水杨酸与柠檬酸对秋菊鲜切花保鲜过程中生理特征的影响

1、本科学生毕业论文题 目水杨酸与柠檬酸对秋菊鲜切花保鲜过程中生理特征的影响学 院生命科学学院专 业生物科学学生姓名李金杰学 号指导教师张晓平职称副教授论文字数 字完成日期 2014 年 4 月 22 日论文题目 水杨酸与柠檬酸对秋菊鲜切花保鲜过程中生理特征的影响 学生姓名、学院：李金杰,生命科学学院中文摘要以秋菊鲜切花为材料，用10 g/ L蔗糖、5 mg/ L氯化钙、50 mg/ L青霉素、和蒸馏水，分别加入50 mg/ L 水杨酸、100 mg/ L 水杨酸、50 mg/ L 柠檬酸和100 mg/ L 柠檬酸配置成4个不同浓度梯度的保鲜剂，培养秋菊鲜切花一段时间并定期取材，测定不同日期秋菊

2、鲜切花的生理指标，包括叶片的叶绿素含量、POD活性、SOD活性以及叶片和花瓣的可溶性糖含量，以此定量分析出不同浓度的水杨酸、柠檬酸对于秋菊鲜切花保鲜作用的影响，甄选出保鲜秋菊鲜切花最适合浓度的水杨酸与柠檬酸，这将对市场保鲜秋菊鲜切花具有极其重要的意义。结果表明：加有浓度为50 mg/ L的水杨酸、浓度为50 mg/ L的柠檬酸的两种保鲜剂,对秋菊鲜切花的叶绿素含量、POD活性、SOD活性以及可溶性糖含量有较明显的效果，对秋菊鲜切花有较好的保鲜作用关键词：秋菊鲜切花；保鲜；水杨酸;柠檬酸；生理指标 英文题目Alternanthera philoxeroides has an effect on

3、physiological index of Zoysia matrellia seeding 学生姓名、学院：Fu XueHao,College of Life Sciences英文摘要The study used Alternanthera philoxeroides as material, the subjects plants were Zoysia matrellia. By using water-soluble allelochemicals method, water-soluble allelochemicals was used to deal with Zoysia m

4、atrellia and measured those physiological index . The results showed that the different density of water-soluble allelochemicals of root,stem, leaf has different effect on the physiological index on subjects plants. And with improvment of density of water-soluble allelochemicals , chlorophyll conten

5、t in leaf of Zoysia matrellia ,activity of catalase ( CAT) , peroxidase ( POD) ,superoxide dismutase ( SOD) presents the tend ,increasing in advance and then decreasing ,and the inhibition effect becomes stronger. Water-soluble allelochemicals makes the content of malondialdehyde( MDA) in plant impr

6、ove. The tested crops were oxidative stressedby water-soluble allelochemicals from Alternanthera philoxeroides. Antioxidant enzyme systems were inhibited. The aqueous extracts from the different organizations of Alternanthera philoxeroides affected the germination and growth. 英文关键词Alternanthera phil

7、oxeroides; Zoysia matrellia;allelopathy; water-soluble allelochemicals ; physiological index目 录摘要6引言71、材料与方法81.1实验材料81.2实验方法81.2.1母液的制备81.2.2马尼拉草幼苗水培实验81.2.3马尼拉草生理指标的测定81.2.4数据分析92、结果与分析92.1不同浓度水花生及其根际土水浸提液对马尼拉草叶绿素含量的影响92.2不同浓度水花生及其根际土水浸提液对马尼拉草过氧化氢酶（CAT）活性的影响102.3不同浓度水花生及其根际土水浸提液对马尼拉草过氧化物酶（POD）活性的影响

8、112.4不同浓度水花生及其根际土水浸提液对马尼拉草超氧化物歧化酶（SOD）活性的影响122.5不同浓度水花生及其根际土水浸提液对马尼拉草丙二醛（MDA）含量的影响133、分析与讨论14展望15参考文献15水杨酸与柠檬酸对秋菊鲜切花保鲜过程中生理特征的影响李金杰 生命科学学院摘 要：以秋菊鲜切花为材料，用10 g/ L蔗糖、5 mg/ L氯化钙、50 mg/ L青霉素、和蒸馏水，分别加入50 mg/ L 水杨酸、100 mg/ L 水杨酸、50 mg/ L 柠檬酸和100 mg/ L 柠檬酸配置成4个不同浓度梯度的保鲜剂，培养秋菊鲜切花一段时间并定期取材，测定不同日期秋菊鲜切花的生理指标，包括

9、叶片的叶绿素含量、POD活性、SOD活性以及叶片和花瓣的可溶性糖含量，以此定量分析出不同浓度的水杨酸、柠檬酸对于秋菊鲜切花保鲜作用的影响，甄选出保鲜秋菊鲜切花最适合浓度的水杨酸与柠檬酸，这将对市场保鲜秋菊鲜切花具有极其重要的意义。结果表明：加有浓度为50 mg/ L的水杨酸、浓度为50 mg/ L的柠檬酸的两种保鲜剂,对秋菊鲜切花的叶绿素含量、POD活性、SOD活性以及可溶性糖含量有较明显的效果，对秋菊鲜切花有较好的保鲜作用关键词：秋菊鲜切花；保鲜；水杨酸；柠檬酸；生理指标水杨酸与柠檬酸对秋菊鲜切花保鲜过程中生理特征的影响李金杰 生命科学学院摘 要：以秋菊鲜切花为材料，用10 g/ L蔗糖、5

10、 mg/ L氯化钙、50 mg/ L青霉素、和蒸馏水，分别加入50 mg/ L 水杨酸、100 mg/ L 水杨酸、50 mg/ L 柠檬酸和100 mg/ L 柠檬酸配置成4个不同浓度梯度的保鲜剂，培养秋菊鲜切花一段时间并定期取材，测定不同日期秋菊鲜切花的生理指标，包括叶片的叶绿素含量、POD活性、SOD活性以及叶片和花瓣的可溶性糖含量，以此定量分析出不同浓度的水杨酸、柠檬酸对于秋菊鲜切花保鲜作用的影响，甄选出保鲜秋菊鲜切花最适合浓度的水杨酸与柠檬酸，这将对市场保鲜秋菊鲜切花具有极其重要的意义。结果表明：加有浓度为50 mg/ L的水杨酸、浓度为50 mg/ L的柠檬酸的两种保鲜剂,对秋菊鲜

11、切花的叶绿素含量、POD活性、SOD活性以及可溶性糖含量有较明显的效果，对秋菊鲜切花有较好的保鲜作用关键词：秋菊鲜切花；保鲜；水杨酸；柠檬酸；生理指标引言秋菊，又名菊花、别名九华、黄花、帝女花，拉丁文名：Dendranthema morifolium (Ramat.) Tzvel.菊科、菊属多年生草本，花中四君子之一。多年生菊科草本植物，名贵观赏花卉，也称艺菊，品种已达千余种，式样繁多，品种复杂。可用扦插、分株、嫁接及组织培养等方法繁殖。秋菊是中国十大名花之一，在中国已有三千多年的栽培历史，约在明末清初传入欧洲。菊花作为世界四大鲜切花之一，以其花色艳丽，婀娜多姿，富丽堂皇，香气悠长，而倍受全世

12、界各国人们的喜爱。鲜切花生产是花卉产业中附加值最高的一个分支，正以前所未有的速度蓬勃发展。中国是世界鲜切花的最大生产国，鲜切花产销量占全球切花总量的30以上。1。随着现代人们生活水平的提升，作为时尚,鲜切花越来越受到人们的追捧，其中秋菊也日益得到了关注和喜爱。秋菊品种繁多，头状花序皆可入药，味甘苦，微寒，散风，清热解毒，这就是药菊。按头状花序干燥后形状大小，舌状花的长度，可把药菊分成 4 大类，即白花菊、滁菊花、贡菊花和杭菊花四类。在每一类里则根据原产地取名。在白菊花类里，以产安徽亳县的亳菊品质最佳，其次如河南武陟的怀菊，四川中江的川菊，河北安国的祁菊，浙江德清的德菊等。然而秋菊瓶插过程中常因

13、水分失调、营养不足和激素水平下降, 瓶插寿命缩短等问题而使秋菊不能长时间的保鲜。2 秋菊多为典型的非跃变型切花，受到胁迫时会产生乙烯，对切花的开花和衰老产生影响，因此使用含有适量乙烯控制剂的保鲜剂很有必要。又因为秋菊对糖极其敏感，糖浓度对于保鲜效果具有重要的意义。3 目前切花菊保鲜液的研究多集中在6-苄氨基嘌呤（6-BA）、水杨酸（SA）柠檬酸（CA）上，这些保鲜剂对于切花秋菊的保鲜均具有不同程度的作用和影响。4黄文江,罗琦,周守标等在2006年研究了5 种不同保鲜剂对香石竹切花保鲜的效果的影响，测定了香石竹切花的SOD、POD、CAT 的活性, 其中处理组 ( 25 g/ L 蔗糖+ 200

14、 mg/ L 8H QS+ 20 mg/ L 水杨酸+ 10 mg/ L 6BA+ 50 mg/ L Al3(SO4)4 + 250 mg/ L 柠檬酸) 的保鲜效果最佳。5 刘丹洲,潘佑找,秦萍,龙艳,谢芳,孟杨,洪河等人在2006年研究了6 种不同浓度的6-BA保鲜剂对鲜切菊花瓶插期间生理状况及瓶插寿命的影响，结果表明，1mg/ L 6BA 保鲜剂效果最好。6水杨酸（SA）是从柳树皮中分离出的有效成分，是桂皮酸的衍生物。水杨酸广泛存在于高等植物中，在植物体内具有多种生理作用，影响植物体内如产热、抗寒、乙烯合成等生理过程，在植物抗病过程中亦起到了重要的作用，能够帮助植物提高抗病能力，抵抗病原

15、微生物。近年来，水杨酸在鲜切花保鲜方面作用显著，主要用于月季、百合、菊花等鲜切花保鲜上，对于鲜切秋菊的保鲜应用不算太多，一般从外观形态指标和生理指标两个方面对保鲜效果进行定性和定量的考量比较。7司建利、代海芳等在2013年进行了不同浓度的水杨酸对菊花切花保鲜效果的研究，通过在菊花花蕾期叶片表面喷洒不同浓度的水杨酸能够起到保鲜的效果，结果表明，60 mg/ L的水杨酸保鲜效果最佳。8水杨酸对月季切花也有一定的保鲜效果，研究表明，水杨酸与杀菌剂8- 羟基喹啉柠檬酸和蔗糖复配的保鲜剂, 杀菌效果好, 能够明显延缓衰老, 延长切花的寿命。9柠檬酸是一种重要的有机酸，又名枸橼酸，无色晶体，常含一分子结晶

16、水，无臭，有很强的酸味，易溶于水。柠檬酸用途广泛，可以用于食品工业、化工和纺织业、禽畜生产、制成化妆品、杀菌医药等等多方面使用，同样，柠檬酸在对于鲜切花的保鲜上具有不可忽视的作用，起到了很好的保鲜效果。王茹华，秦振华，张启发等在2013年，研究了不同浓度的柠檬酸对切花菊瓶插品质和生理特性的影响，探求了不同浓度的柠檬酸对于切花菊的不同保鲜效果，结果表明，mg/ L柠檬酸处理下，能够增大切花菊花径，促进花枝吸水 增加切花菊花瓣中花青素和叶片中叶绿素的含量，并维持细胞膜的稳定性，从而增加了对于鲜切菊的保鲜时间。3水杨酸、柠檬酸对于鲜切花的保鲜具有一定作用，本实验就主要依赖水杨酸、柠檬酸配置成不同浓度

17、梯度的保鲜剂，对鲜切秋菊进行处理，旨在探求保鲜效果最好的保鲜剂极其最佳浓度。1、材料与方法1.1实验材料：秋菊（品种）鲜切花购买于芜湖市花卉市场。1.2实验方法：1.2.1保鲜剂配置：配置不同保鲜剂处理秋菊，实验所用基础保鲜剂配方为10 g/ L蔗糖+5 mg/ L氯化钙+50 mg/ L青霉素+蒸馏水，水杨酸设置2个浓度：50 mg/ L和100 mg/ L，柠檬酸设置2个浓度：50 mg/ L和100 mg/ L，一共分组为1个对照组（CK）和4个实验组，如下：CK：蒸馏水(空白对照)B：10 g/L蔗糖+5mg/ L氯化钙+50 mg/L青霉素+50 mg/L 水杨酸+蒸馏水C：10 g

18、/L蔗糖+5mg/ L氯化钙+50 mg/L青霉素+100 mg/L水杨酸+蒸馏水D：10 g/L蔗糖+5mg/ L氯化钙+50 mg/L青霉素+50 mg/L柠檬酸+蒸馏水E：10 g/L蔗糖+5mg/ L氯化钙+50 mg/L青霉素+100 mg/L柠檬酸+蒸馏水1.2.2处理方法： 2013 年11月在安徽师范大学生科院实验室内，将新买的菊花进行修剪, 留35 cm 长,将基部斜剪, 除去瓶口以下的叶片。将菊花插入500 mL 锥形瓶中，,AE组每组三个锥形瓶，每瓶装3 枝秋菊和200 mL 相应的保鲜剂。置于室内通风良好、散射光充足、无直射光处。 将相应的保鲜剂对秋菊处理72h（三天）

19、，将各瓶保鲜剂倒去，各加入200ml蒸馏水，每天对各瓶秋菊换水处理，并定期对各组秋菊的叶片和花瓣进行取材，装袋置于冰箱保存。2014年4月，取出冰箱的秋菊材料，进行各项生理指标的测定。1.2.3测定生理指标光合色素：参照沈伟其的方法提取叶绿素。取 0. 1 g 放入 10 mL 混合提取液 (乙醇 丙酮 1 1) 中，在黑暗下浸泡提。以提取液为对照，取浸提液分别在 752 型分光光度计上测定D645、D663、D470。按以下公式计算叶绿素含量: 叶绿素 a (mgg 1) = (12. 7 D663 2. 69 D645v / (1 000 w); 叶绿素 b ( mgg 1) = (22.

20、 9 D645 4. 68 D663) v / (1 000 w)；总叶绿素（CT）=Ca+Cb类胡萝卜素（Cx.c）=1000A4703.27Ca104C3/229 v / (1 000 w)。其中: v 为提取液的体积 (mL); w 为所取样品的鲜重 (g)可溶性糖：采用恩酮比色法。吸取提取液 0. 5 mL 于 20 mL 刻度试管中 (重复 3 次)，加蒸馏水 1. 5 mL，再加 0. 5 mL蒽酮乙酸乙酯试剂和 5 mL 浓 H2SO4，充分振荡，立即加入沸水浴中准确保温 1 min，自然冷却至室温，以空白 (2 mL 水 + 0. 5 mL 蒽酮乙酸乙脂 + 5mL 浓 H2S

21、O4) 作参比，630 nm 比色，测定吸光度，并通过标准曲线计算可溶性糖的含量。超氧化物歧化酶（SOD）：1. 提取酶液称取叶或花0.200g，于预冷的研钵，加预冷的磷酸缓冲液，（PH=7.8），在冰浴上研磨，转移至离心管，总体积为1.5ml。4度，10000r/min,离心20min.上清液为酶粗提取液。2. 显色反应5ml试管4支，2支为测定管，2支为对照管，在测定管加，0.05mol/l磷酸缓冲液3ml，130mmol/lMet0.6,750umol/lNBT0.6,100ummol/lEDTA-Na2,20umol/l核黄素0.6mol/l，蒸馏水0.5，酶液0.1.两支对主管，加磷

22、酸缓冲液0.1.总体积6.0mL。混合均匀，1支对主管置暗处，另两支放4000lx日光下反应20min ,25度。3. SOD活性测定与计算以不照光的对照管设空白，560nm比色，分别测定各管的吸光度。SOD总活性=2（ACK-AE）*V0/ACK*W*V其中：ACK为对照管的吸光度，AE为样品的吸光度，V0为样品总体积，V为样品用量。过氧化物歧化酶（POD）：采用愈创木酚法测定过氧化物酶（POD）活性；采用氮蓝四唑法测定超氧化物歧化酶（SOD）活性（肖家欣，2010）；配制反应液，200mlPBS(PH6.0,0.2MOL/L)+愈创木酚0.076ml加热溶解，冷却后加30%双氧水0.11m

23、l。取反应液加入比色皿，放入分光光度计，再加入50ul酶液，迅速打入搅拌，3ml反应液对照。470nm比色测定吸光度。POD酶活力单位=100OD*V0/(W*V*t)其中：OD为对照管值减去测定的吸光度。V0为酶总提取液体积（ml），V 为测定时酶用量（ml），T为反应时间（min）。2、结果与分析 2.1不同浓度水杨酸、柠檬酸处理对叶片内光合色素含量的影响表1不同浓度水杨酸、柠檬酸处理对叶片内光合色素含量的影响CKBCDE10.3Chla1.907.323.163.442.49Chlb0.802.272.442.032.44Chl(a+b)2.699.605.605.474.93Cx.c0

24、.250.880.520.510.4510.7Chla8.573.9710.396.898.09Chlb3.002.495.682.694.53Chl(a+b)11.596.4616.079.5812.62Cx.c0.190.621.490.881.18由表1可知，在瓶插期间前一次取材中，各实验组的光合色素含量均高于CK，其中B组Chla含量较高，为7.32 mgg，高于CK 2倍之多，高于其他各对照组1倍左右；Chlb含量：实验组B、C、D、E的基本接近，均高于CK近1倍；Chl(a+b)含量：各实验组均高于CK，其中B组Chl(a+b为9.60 mgg，高于CK2倍之多；Cx.c含量：各实

25、验组均高于CK，其中B组为0.88 mgg，高于CK 2.52倍之多。后一次取材，各实验组的光合色素含量均高于CK，其中C组Chla含量较高，为10.39 mgg，高于CK约 21.24%；Chlb含量： C组的较高， 高于CK约 89.33%； Chl(a+b)含量：实验组C、E组高于CK，C组为16.07 mgg，高于CK约38.65%，而B、D组低于CK，其中B组Chl(a+b为6.46mgg，低于CK约 44.26%；Cx.c含量：各实验组均高于CK，其中C组为1.49 mgg，高于CK 6.84倍之多。前后两次取材测得光合色素含量比较，其中CK 的Chla、 Chlb和Chl(a+b

26、)含量均升高，Chla含量增长较快，从1.90 mgg上升至8.57mgg，增加了3.5倍之多，而Cx.c含量降低了，从0.25mgg减少至0.19mgg，降低了24.00%。B组的Chla Chl(a+b)和 Cx.c含量均降低，其中Chla含量减少较多，从7.32 mgg减少到3.97 mgg，降低了接近一倍，而Chlb含量升高，从2.27mgg升高至2.49mgg，增加了9.69%。C组各光合色素含量均升高，其中Chla含量升高较多，从3.16mgg升高至10.39mgg，增加了2.89倍之多。D组各光合色素含量均升高，其中Chla含量升高较多，从3.44mgg升高至6.89mgg，增加

27、了约1倍。E组各光合色素含量均升高，其中Chla含量升高较多，从2.49mgg升高至8.09mgg，增加了约2.25倍之多。2.2不同浓度水杨酸、柠檬酸处理对叶片和花内可溶性糖含量的影响表2不同浓度水杨酸、柠檬酸处理对叶片和花内可溶性糖含量的影响CKBCDE叶10月3日3.269.307.706.655.9610月7日5.609.216.587.981.01花10月10日0.271.991.191.270.8310月17日0.121.371.021.190.55由表2可知，在瓶插期间秋菊叶片的第一次取材中，相对于CK，B、C、D、E组的可溶性糖含量均高于CK，其中B组为9.30 mgg，高于C

28、K约1.85倍。第二次取材中可知，B、C、D组可溶性糖均高于CK，其中B组可溶性糖含量最高，为9.21 mgg ，高于CK约64.46%，E组可溶性糖含量最低，为1.01 mgg，低于CK 81.96%。前后两次取材测量比较，CK和D组可溶性糖含量呈升高趋势，分别升高了71.78%和20.00%，而B、C、E组可溶性糖含量均降低，其中B组可溶性糖含量降低比例较少，从9.30 mgg 降低至9.21，降低了0.97%，E组降低比例最大，从5.96 mgg降低至1.01 mgg，降低了约83.05%。秋菊花瓣的第一次取材中， B、C、D、E组的可溶性糖含量均高于CK，其中B组为1.99 mgg，高

29、于CK约6.37倍。E组最低，为0.83 mgg，高于CK约2.07倍。第二次取材中可知，B、C、D、E组的可溶性糖含量均高于CK，B组可溶性糖较高，为1.37 mgg，高于CK 10.42倍，E组最低，为0.55 mgg，高于CK约3.58倍。前后两次取材测量比较，所有组可溶性糖含量均呈降低趋势，其中其中D组降低比例最小，从1.27 mgg降低至1.19 mgg，只降低了约6.30%，C组降低比例较小，从1.19 mgg降低至1.02 mgg，降低了14.29%。2.3不同浓度水杨酸、柠檬酸处理对叶片SOD活性的影响表3不同浓度水杨酸、柠檬酸处理对叶片SOD活性的影响CKBCDE叶 1243

30、.76179.55205.04224.49261.542155.90102.0455.13140.42228.20由表3可知，在瓶插期间秋菊叶片的第一次取材中，E组的SOD活性高于CK，为261.54，高于CK约7.29%，B、C、D、组的SOD活性均低于CK，其中B组最低，为179.55，低于CK约26.34%。第二次取材中可知，E组的SOD活性高于CK，为228.20，高于CK约46.38%，B、C、D、组的SOD活性均低于CK，其中C组最低，为55.13，低于CK 64.64%。前后两次取材测量比较，所有组的 SOD活性均呈降低趋势，其中CK、B组D组和降低比例较小，分别降低了36.04

31、%、43.17%和37.45%，而C组降低比例最大，从205.04降低至55.13，降低了73.11%。2.4不同浓度水杨酸、柠檬酸处理对叶片POD活性的影响表4不同浓度水杨酸、柠檬酸处理对叶片POD活性的影响CKBCDE叶10月3日67.87274.04254.72414.29189.3210月7日97.22314.2999.53178.90190.91由表4可知，在瓶插期间，秋菊叶片的第一次取材中，所有实验组的POD活性均高于CK，其中D组最高，为414.29，高于CK约5.1倍，高于E组1.189倍。第二次取材中可知，所有实验组的POD活性均高于CK，其中B组的最高，为314.29，高于

32、CK约2.23倍，C组POD活性最低，为99.53，比CK高2.38%。前后两次取材测量比较，CK、B、E组POD活性呈升高趋势，其中CK升高比例最大，从67.87升高至97.22，升高了29.35%，B组升高了14.69%，E组升高不明显，升高了0.84%，而C、D组POD活性均呈降低趋势，分别降低了60.93%和56.82%。3、分析与讨论鲜切花衰老的原因有很多，经过研究表明，鲜切花脱离母株，失去了生命所需的能量来源，进而乙烯会大量生成，鲜切花早衰；花枝切口处也会有真菌和细菌的生长而影响了花枝的吸水另外鲜切花内源激素失调，亦会加速鲜切花的衰老。2鲜切花脱离母株之后会受到各种胁迫作用，产生了

33、大量的氧自由基，生物体内具有很多清除活性氧自由基的酶类，包括SOD、POD、CAT，另鲜切花内叶绿素含量、可溶性糖、可溶性蛋白质含量也会随着时间的推移而发生变化，通过对于这些生理指标的测定，可以定量出何种浓度配方的保鲜剂对鲜切菊花的保鲜效果最好。5保鲜剂的保鲜作用机理可以概括为几点：1、含有抗菌活性物质，抑制腐败菌；2、抗氧化作用，延缓衰老；3、防止微生物污染，减少水分散失。10乔永旭在非洲菊切花保鲜的研究中使用硝酸银、水杨酸、柠檬酸等配置保鲜剂，结果表明保鲜剂中最适硝酸银浓度为60 mg/L，最适水杨酸浓度为80 mg/L。11张雪平,齐香玉,王雪娟, 周玉丽研究在有机酸对切花菊保鲜效应的研究中，柠檬酸浓度为150 mg/L , 水杨酸浓度为75 mg/L,对切花菊鲜重的增加、水分平衡值的增加、丙二醛含量的降低、质膜的稳定、花色素苷含量的降低有较明显的效果, 对切