注射用氨苄西林钠检验操作规程

1、五页之一题目：注射用氨苄西林钠检验操作规程（BP2005）起草人： 日期：审核人： 日期：编码：QJ/DF08618批准人： 日期：颁发部门：质量管理部生效日期：分发部门：【性状】标准：白色或类白色粉末操作：取本品适量，用目测法检查。【鉴别】标准：应符合规定。操作： A 取相当于氨苄西林0.250g的样品，加5ml水，加2mol/L醋酸溶液0.5ml摇匀后于冰浴静置10分钟，用垂熔漏斗滤取析出物，用丙酮-水（9：1）混合溶液23ml洗涤，置60干燥30分钟，照红外分光光度法鉴别试验操作规程测定本品的红外光吸收图谱应与氨苄西林三水物的对照图谱一致.B. 薄层色谱法 薄层板F254s 硅胶板 ，以

2、丙酮-醋酸铵（10：90）为展开剂，醋酸铵溶液的溶度为15.4%w/v，展开剂的pH用冰醋酸调节至5.0。分别用下列溶液点样1ul。溶液（1） 从密封容器中取一定量的粉末，溶解在碳酸氢钠（4.2%w/v的溶液）溶液中，得到含氨苄西林为0.25% w/v 的溶液。溶液（2）：用碳酸氢钠溶液（4.2%w/v）溶解氨苄西林三水物对照品使达到浓度为0.25% w/v 的氨苄西林三水物；溶液（3）：用碳酸氢钠溶液（4.2%w/v）溶解氨苄西林三水物和阿莫西林对照品使分别达到浓度为0.25% w/v 的氨苄西林三水物和阿莫西林。取出薄层板在空气中干燥，喷碘蒸气直到出现稀疏斑点，在日光下观察，溶液（1）显示

3、的主斑点位置、大小、颜色与溶液（2）显示的主斑点相符；溶液（3）应显示二个清晰、分离的斑点，否则试验无效。 C.溶解0.1g样品于2 ml纯化水与2 ml 150 g/ l碳酸钾试液，加热至沸腾，无沉淀生成。加入4 ml焦锑酸钾试液加热至沸腾，于冰水中冷却，如有必要，用玻璃棒摩擦试管内壁，有白色结晶状沉淀生成D. 溶解相当于2mg的钠离子的样品于0.5ml纯化水中，加入1.5ml甲氧苯基乙酸试液（称取2.7g甲氧苯基乙酸于6ml氢氧化四甲基铵溶液（不小于10.0%w/w），加入20ml纯乙醇），有大量的白色结晶沉淀形成。置于20的水中搅拌5分钟，沉淀不会消失，加1ml稀氨水（75ml 13.5

4、M氨水或56ml 18M氨水用水稀释至1000ml），沉淀完全溶解，加1ml碳酸铵（15.8%w/v）溶液，无沉淀形成。【碱度】标准：8.010.0 操作：取本品适量，用经煮沸且冷却的去CO2纯化水稀释，使达到10% w/v 氨苄西林的浓度。用标准缓冲液校正pH计（具体操作见酸碱度测定操作规程）,再用已校正的pH计测定本品溶液(溶解后10min内完成)。【有关物质】标准：氨苄西林二聚物(%)：4.5% 其它单个杂质（%）：2%按高效液相色谱法含量项下所述，进样50ul的下列各种溶液：溶液（1）用80ml的流动相A溶解相当于0.3g氨苄西林的样品超声15分钟，再用流动相A稀释至100ml；通过0

5、.4-m滤膜过滤。溶液（2）精密吸取1ml的溶液(1)用流动相A稀释至100ml；溶液（3）称取0.20g无水氨苄西林对照品，加1.0ml的纯化水，在60加热一小时，用流动相A稀释0.5ml的此样品溶液至50ml。溶液（4）用流动相A溶解无水氨苄西林对照品和头孢拉定对照品。使溶液包含0.025% w/v 的无水氨苄西林对照品和0.002% w/v的头孢拉定对照品，用0.4um的膜过滤并脱气。流动相A0.5 ml 的12%醋酸溶液，50 ml的 0.2 M 的磷酸二氢钾溶液和 50 ml 的乙腈溶液，用纯化水稀释至1000 ml；过滤、脱气。流动相B0.5 ml 的12%醋酸溶液，50 ml的

6、0.2 M 的磷酸二氢钾和 400 ml 的乙腈溶液，用纯化水稀释至1000 ml；过滤、脱气。色谱条件与系统适用性试验：C18柱：0.25m4.6mm 不锈钢柱，膜层厚度5um，流速:1.0ml/min；检测波长为254nm；流动相：A：B约为85：15的比率为流动相进样50ul的溶液(3)，氨苄西林峰和头孢拉定峰的分离度应大于3.0，如有必要，可调整流动相A：B的比例，进样50ul的溶液(1)和溶液（2），当氨苄西林峰出现后开始梯度洗脱。时间（分）流动相A(百分比V/V)流动相A(百分比V/V)备注0-3085 015 100线性梯度30-450100无梯度洗脱45-608515重新平衡进

7、样流动相A并使用相同的梯度获得一空白；进样溶液(3)，使用相同的模式，溶液(3)所得图谱中显示氨苄西林峰和一个二聚物的峰，氨苄西林峰保留时间的2.8倍处的较大杂质峰即为氨苄西林二聚物的峰。在溶液(1)所得图谱中，氨苄西林二聚物的峰面积不得大于溶液(2)中氨苄西林主峰的4.5倍(4.5%)；除主峰和二聚物峰之外，其它单个杂质的峰面积不得大于溶液(2)所得图谱中主峰面积的2倍(2%)；溶剂峰除外。【水分】标准：2.0%操作： 1、费休氏试液的标定：启动卡氏水分测定仪，于玻璃容器中，注入无水甲醇，进行空白校正，精密加入水约10mg，用本液滴定至终点，计算费休氏试液的滴定度。2、测定法：精密称取供试品

8、约0.3g，置卡氏水分测定仪的玻璃容器中，用费休氏试液滴定至终点。 【细菌内毒素】标准：0.15IU/ml操作: 取0.1ml/支规格鲎试剂8支，轻弹瓶壁，使粉末落入瓶底，再用砂轮在瓶颈上轻轻划痕，再用75%乙醇棉球擦拭外壁，小心开启，加入0.1 ml细菌内毒素检查用水溶解，轻轻摇动瓶壁，使内容物充分溶解，避免产生气泡。取复溶后的0.1ml /支规格的鲎试剂原安瓿8支，其中2支加入0.1ml按最大有效稀释倍数的供试品溶液作为供试品管，2支加入0.1ml用细菌内毒素检查用水将细菌内毒素工作标准品制成的2.0浓度的内毒素溶液作为阳性对照管，2支加入0.1 ml细菌内毒素检查用水作阴性对照，另2支加

9、入0.1ml供试品阳性对照液，将试管中溶液轻轻混合后。用封口膜或医用胶布封闭管口。将封好口的8支原安瓿同时放置371恒温水浴锅保温602分钟。保温和拿取试管过程应避免受到振动造成假阳性结果。结果判断：将原安瓿从恒温水浴锅中轻轻取出，缓缓倒转180时，管内凝胶不变形，不从管壁滑脱者为阳性，记录为（+），凝胶不能保持完整并从管壁滑脱者为阴性（-）。供试品2支均为（-），应认为符合规定，如2支均为（+），应认为不符合规定，如2支中1支（+），1支为（-），按上述方法另取供试品复试4支，4支中1支为（+），即认为不符合规定。阳性对照管为（-）或供试品阳性对照管为（），或阴性对照管为（+），试验无效。【

10、含量】HPLC法标准：标示量：95.0 -105.0% （干品）操作：取10瓶装量差异项下内容物，进样50ul的下列各溶液，溶液(1)用流动相A溶解装量差异下的内容物使含氨苄西林0.006%（w/v）溶液(2)用流动相A溶解无水氨苄西林对照品，使溶液包含0.006% （w/v）的无水氨苄西林对照品溶液(3) 用流动相A溶解无水氨苄西林对照品和头孢拉定对照品，使溶液包含0.025% （w/v）的无水氨苄西林对照品和包含0.002% （w/v）头孢拉定对照品色谱条件与系统适用性试验：C18柱：25cm4.6mm 不锈钢柱，膜层厚度5um，流速:1.0ml/min；检测波长为254nm；流动相：A：

11、B约为85：15的比率为流动相;进样溶液（3），氨苄西林峰和头孢拉定峰的分离度应至少3.0，如有必要，可调整流动相A：B的比例使达到合适的分离度，计算公式： 氨苄西林含量（%）= 100% 式中： Au为样品的峰面积； Ws为氨苄西林对照品的称重（mg）；P为氨苄西林对照品的含量（%）。As为氨苄西林对照品的峰面积； Wu为样品的称重（mg）； 氨苄西林标示量（%）氨苄西林含量平均装量/每瓶标示的量100%【无菌】标准：应无菌。操作：每批供试品的检验数量为10瓶，每瓶各1.0g。用消毒剂消毒供试品容器的外表面，按无菌操作法用灭菌注射器向各瓶供试品中分别加入5ml的青霉素酶硫乙醇酸盐流体培养基进

12、行溶解。用针筒吸取全部的供试品溶液，加入薄膜过滤器中，打开膜薄过滤器底座阀，开始抽滤，待抽干后，加入100ml的灭菌0.1%蛋白胨溶液，继续抽干，连续冲洗7次，每次冲洗量为100ml。抽干后，关闭膜过滤底座阀，取出膜过滤器，用无菌操作法取出滤膜，将滤膜平均分成三份，分别接种至2支硫乙醇酸盐流体培养基管中及1支改良马丁培养基管中。阳性对照：在其中1支硫乙醇酸盐流体培养基管中加入小于100CFU的金黄色葡萄球菌菌悬液，作为阳性对照。阴性对照：取一支硫乙醇酸盐流体培养基管和一支改良马丁培养基管直接加入稀释剂作为阴性对照；冲洗液的阴性对照采用薄膜过滤法，抽滤后将滤膜平均分成两份，分别接种至1支硫乙醇酸

13、盐流体培养基管中及1支改良马丁培养基管中。稀释剂和冲洗液的阴性对照检验量与样品检验时的使用量相同。培养：硫乙醇酸盐流体培养基管及对照管一同放置30-35培养14天，改良马丁培养基放置23-28培养14天。培养期间逐日检查，阳性对照管培养4872小时应生长良好，其它管长菌后，需及时查明原因并做好重试工作。结果判断：当阳性对照显浑浊，并确定有菌生长，阴性对照管呈阴性时，可根据观察所得的结果判定，并且硫乙醇酸盐流体培养基管和改良马丁培养基管均为澄清或虽显浑浊但经证明并非有菌生长可判定合格。当硫乙醇酸盐流体培养基管或真菌培养基管中任一管显浑浊并证明有菌生长，判供试品不符合，除非能充分证明试验结果无效，

14、即生长的微生物非供试品所含。当符合下列至少一个条件时，方可判实验结果无效：1） 检查试验所用的设备及环境的微生物监控结果不符合无菌检查法的要求；2） 回顾无菌试验过程，发现有可能引起微生物污染的因素；3） 阴性对照管有菌生长；4） 供试品管中生长的微生物经鉴定后，确证是因无菌试验中所使用的物品和（或）无菌操作技术不当引起的。试验若经确认无效，应重试。重试时，重新取同量供试品，依法重试，若无菌生长，判供试品符合规定；若有菌生长，判供试品不符合规定。【不溶性微粒】标准：10um以上的微粒6000粒/瓶；25um以上的微粒600粒/瓶。操作：按不溶性微粒测定标准操作规程依法测定。【溶液澄清度】标准：

15、应澄清操作：用同样的无色，透明，中性的内径为15 mm -25 mm的平底玻璃试管， 在浊度标准液制备5分钟后，在漫射日光下用如下所述的新配制的浊度标准液比较所测试的液体，液层厚度为40mm，于黑色的背景从垂直黑色的背景方向观察。漫射的光必须可以轻松地将1号浊度标准液与纯化水，II号浊度标准液与1号浊度标准液区别开来。在上述条件下测试时，液体与纯化水或所使用的溶剂是一样澄清的，或浊度不会明显的比1号浊度标准液大，那么此液体被认为是澄清的。硫酸肼溶液的制备: 称取1.0 g 硫酸肼溶解于纯化水中，加纯化水稀释至100.0 ml。放置4-6小时。 乌洛托品溶液的制备：于100 ml具玻璃塞的细颈瓶

16、中，溶解2.5 g乌洛托品于25.0 ml纯化水。浊度标准贮备液的制备: 在细颈瓶中的乌洛托品溶液中加入25.0 ml硫酸肼溶液，混匀，静置24小时，如果保存在一个无表面缺陷的玻璃容器中，此溶液可稳定两个月，不可黏附于玻璃上，用前摇匀。浊度标准原液的制备:取浊度标准贮备液15.0 ml，置1000.0 ml量瓶中，加纯化水稀释至刻度，摇匀，本液应新配制，可储存24小时。浊度标准液的制备:如表2.2.1-1制备，用前混匀。【可见异物】标准：无可见异物操作：【装量差异】 标准：10%。操作：取供试品20瓶，除去标签，铝盖。容器外壁用乙醇洗净，开启时避免玻璃屑等异物落入容器中，立即分别精密称定，倒空

17、药粉容器，如有必要，先用纯化水再用乙醇洗净，在100-105干燥一小时，在干燥器中冷却，称重，再分别精密称定每一容器的重量，求出每瓶重量与平均重量。（参照了原来你的翻译，有些没有直译）注射或输液用粉末符合单剂量制剂质量均匀度检查法的要求。如果所有活性物质都符合含量均匀度检查法，就不需要做质量均匀度2.9.5. UNIFORMITY OF MASS OF SINGLE-DOSE PREPARATIONS单剂量制剂的质量均匀度Weigh individually 20 units taken at random or, for single-dose preparations presented

18、in individual containers，the contents of 20 units, and determine the average mass. Not more than 2 of the individual masses deviate from the average mass by more than the percentage deviation shown in Table 2.9.5.-1 and none deviates by more than twice that percentage.随机取20个剂量单位，精密称定总重量，计算平均重量，再分别准确

19、称定各片的重量，计算每个剂量单位与平均重量差异的百分率。见下表，20个剂量单位中超出重量差异限度的不得多于2，并不得有1个超出限度的1倍。l When the average mass is equal to or below 40 mg, the preparation is not submitted to the test for uniformity of mass but to the test for uniformity of content of single-dose preparations (2.9.6).l 当平均重量等于或小于40mg，则不适合做质量均匀度，但是适合做

20、单剂量制剂的含量均匀度(2.9.6).【含量均匀度】TEST ATablets, powders for parenteral use, ophthalmic inserts, suspensions for injection. The preparation complies with the test if each individual content is between 85 per cent and 115 per cent of the average content. The preparation fails to comply with the test if more than one individual content is outside these limits or if one individual content is outside the limits of 75 per cent to 125 per cent of the average content If one individual content is outsid