CELL-基本培养方法.ppt

1、细胞培养操作前及操作中应注意事项,无菌操作贯穿细胞培养的始终,一、培养操作前注意 1.培养用物品的灭菌消毒（写出物品清单）。 2.操作台消毒（各物品布局合理进行紫外线消毒30分钟）。 3.洗手和着装（原则上与外科手术相同）。 4.火焰消毒（酒精灯使用、金属器械、吸过培养液的吸管,二、培养操作中注意： 动作准确敏捷有序； 培养用液开口后应45度倾斜，不再重复使用的应立即封口； 一个吸管只能吸一种液体； 不能面向操作台讲话或咳嗽,基本的培养方法 悬滴培养方法,悬滴培养用的凹载玻片 单位：mm,一）单盖玻片培养方法,左图； 凹载玻片支架,右图：单盖玻片培养法操作图解 1、胚胎浸出液2、血浆3、心肌块

2、 4、混合待凝固5、涂凡士林6、扣压7热溶石蜡密封 a为正确操作 b错误操作,8、将密封好的凹玻片放到凹玻片支架上，放到培养箱内培养 9、培养7-8个小时，组织块向外生长，培养24小时在组织块外周形成生长晕（一圈薄而透明的细胞圈），48小时候生长减慢甚至停止。需要重新加入鸡胚浸出液,盖玻片法再培养 1、2、眼科刀切除生长晕 3 方型培养物切为两到四片 4、5培养物漂洗 6、7、再培养,此方法易污染,二）双盖玻片悬滴培养法,双盖玻片图解： 1、载体盖玻片 2、带培养物盖玻片,与单盖玻片不同之处： 1、载体盖玻片加一滴消毒纯水贴到带有组织块的另一面。 2、再培养时：直接取下带培养物的盖玻片漂洗，换

3、一张新的载体盖玻片,可减少污染,二、培养瓶培养方法 20世纪50年代Carrel设计了卡氏瓶 Earle设计了T-培养瓶,用血浆固定组织块的培养方法,图:卡氏瓶培养组织块 1.消毒卡氏瓶 2.火焰略烧瓶口 3.取少量血浆加入瓶底 4.再加等量胚胎浸出液 5.接种组织块 7.上盖 8.消毒 9加入培养液 10.通气,用透明纸固定组织块的培养方法,图:内放有孔透明纸的培养瓶培养 a. 一个T培养瓶内放有有孔透明纸b.卡氏瓶接种后图解 1.有孔透明纸 2.组织块 3.培养液,旋转管培养法： 与前两种培养方法不同之处：细胞或组织块交替与培养液和空气直接接触，有利于细胞的生长,旋转管培养方法用具 a.简

4、易旋转鼓，可放入培养箱内 b.带旋转鼓装置的培养箱 c.培养用的旋转管 1.示血浆的高度 2.示接种组织间间距 3.示加培养液 4.示可放旋转鼓内培养 d.放旋转管的支架.(1.接种组织块时用 2.观察时用,四.灌注小室培养法 优点 1.连续观察活细胞的动态变化 2.研究理化性质对培养细胞的影响和作用 3.活细胞的反应,不锈钢培养小室图 A 中央切面图 B侧面图(mm,灌注小室及灌注系统示意图 A.排液瓶 B.受液瓶 C.不锈钢灌注小室 D.扁锥型小孔道 E、F、J .2号注射针头 G、H.塑料导管 I玻璃导管 K、L.14号注射针头(塞以棉花,五.培养板培养方法,无菌条件下操作， 在超净工作台下进行,培养过程,1、取材并制备拟用于培养的细胞悬液 2、接种细胞，取下培养板的盖子，用吸管吸取一定量的细胞悬液，加到培养板的各孔内 3、给培养板各孔补加足够的培养液 4、加盖，放入CO2培养箱中培养。（贴壁能力弱的细胞在接种后放置于CO2 培养箱中培养3-5小时，使细胞黏附牢靠后再补加充足的营养液，继续培养） 5