尿液化学检验

1、尿液化学检验,2.pH试纸法,1.试带法,模块有甲基红(pH4.6-6.2),溴麝香草酚蓝(pH6.0 - 7.6). 变色范围：黄5.0-绿7.0-蓝9.0，仪器或肉眼判读,多种混合指示剂(棕红色-深黑色), 与标准色板比较,一）测定原理,一、尿酸碱度测定（urine acidity,3.指示剂法,5.pH计法,4.滴定法,0.4g/L溴麝香草酚蓝滴于尿液黄-酸性,绿-中性,蓝-碱性. 受黄疸尿及血尿的影响,pH电极.精确度较高,需仪器,烦琐,少用,标准NaOH滴定,测总酸度.复杂,少用,一）测定原理,一、尿酸碱度测定（urine acidity,二） 尿酸度测定的方法学评价,标本新鲜; 操

2、作规范; 试带保存; 试剂配制标准; pH计校准,三）质量保证,一、 尿酸碱度测定（urine acidity,正常饮食 晨尿pH：5.56.5，平均6.0; 随机尿pH： 4.68.0； 可滴定酸度： 2040mmol/24h尿,四）参考值,一、 尿酸碱度测定（urine acidity,1)生理变化: 食物影响：蛋白类酸性; 果蔬类碱性. 碱潮:餐后胃酸,肾泌H+,Cl-重吸收 尿pH一过性. 生理活动：运动,饥饿,出汗,应急,夜间入睡呼吸 变慢体内酸性代谢产物pH,五）临床意义,一、 尿酸碱度测定（urine acidity,2)病理变化: 酸性尿：酸中毒,高热,慢性肾炎,白血病, 糖尿

3、病酮症酸中毒,低钾血症,痛风 碱性尿：碱中毒,呕吐,尿路感染,型肾 小管性酸中毒,原发性醛固酮增多症,一、 尿酸碱度测定（urine acidity,五）临床意义,3）药物影响： NaHCO3,K2CO3,枸橼酸钠碱化尿液防止酸性结晶(尿酸及胱氨酸)形成;促进酸性药物排泄. 氯化钙(铵、钾)、稀盐酸酸化尿液防止碱性结晶(磷/碳/草酸钙)形成;促进碱性药物排泄;预防细菌生长. 溶血时口服NaHCO3碱化尿液促进溶解及排泄Hb,一、 尿酸碱度测定（urine acidity,五）临床意义,表5-6 常见影响尿液pH的因素,表5-6 常见影响尿液pH的因素,二、尿液蛋白质检查,健康人尿液中蛋白含量很

4、少，定性为阴性,尿液中蛋白质含量150mg/24h 或尿中蛋白质浓度100mg/L 蛋白定性为阳性，即 proteinuria,1.蛋白尿 (proteinuria, PRO),一)概述,二、尿液蛋白质检查,2.蛋白尿形成的原因,1)肾小球滤过膜破坏或电荷屏障改变,2)肾小管重吸收障碍,3)溢出性,4)肾组织性,一)概述,原理】 指示剂的蛋白质误差原理 溴酚蓝阴离子,1)干化学试带法,评价,肉眼和仪器；对清蛋白灵敏(70-100mg/L)， 与Hb/Mb/BJP基本不反应； 简便快速，易标准化，应用普遍。 健康普查、肾病筛查,pH3.2,pro+复合物 (淡黄绿色兰色,二) 尿蛋白定性检查,1

5、.测定原理与评价,表5-7 试带法检测的干扰因素及评价,二) 尿蛋白定性检查,评价,2)磺基水杨酸法,原理】 pro+ + 磺基水杨酸根- 不溶性蛋白沉淀,简便快速，灵敏度高0.05-0.1g/L； 与清/球/本周蛋白反应；假阳性。 干化学法的参考方法，NCCLS推荐的 确证实验,H,二) 尿蛋白定性检查,1.测定原理与评价,1,尿2-3ml+试剂0.1ml，立即混匀，1min内观察结果,2)磺基水杨酸法,干扰因素,二) 尿蛋白定性检查,1.测定原理与评价,阴性()：不浑浊 微量()：轻微浑浊，PRO约0.1-0.15g/L 弱阳性()：明显白雾状，PRO约0.2-0.5g/L 阳性(2)：浑

6、浊，明显颗粒，PRO约0.6-2.0g/L 强阳性(3)：大量絮片沉淀，浑浊，PRO约2-5g/L 最强阳性(4)：凝块，大量絮片沉淀，PRO5g/L,3)加热乙酸法,原理】加热PRO变性凝固， 加酸pH接近PRO等电点; 溶解碱性盐类结晶,评价,二) 尿蛋白定性检查,特异性高，干扰少，灵敏度0.15g/L； 与所有蛋白发生沉淀反应。 经典准确的、定性的确证实验,1.测定原理与评价,3)加热乙酸法,干扰因素,二) 尿蛋白定性检查,1.测定原理与评价,定性：阴性,2.参考值,干化学测定尿蛋白原理,R-CH,NH2,COOH,H,R-CH,NH3,COOH,指示剂,显色,指示剂蛋白误差原理,pH

7、3.6,二) 尿蛋白定性检查,1)检测前：患者正常饮食,2)检测中： 室内质控；阳性及阴性对照。 试带法：按规程操作，浸渍时间适宜；阴凉 干燥；有效期。 加热乙酸法：盐类浑浊假阳性； 遵循加热-加酸-再加热； 5%乙酸为尿液的1/10. 加热乙酸法和磺基水杨酸法：调尿液pH为5-6,3.质量保证,二) 尿蛋白定性检查,3)检测后：报告审核;结果与临床不符，分析原因,1)加热乙酸法： 加酸要合适; 无盐或低盐饮食，先加12滴饱和NaCL; PRO极少时，加酸后出现沉淀,2)磺基水杨酸法： 尿液浑浊，应先离心或过滤; 强碱性尿加5%乙酸数滴; 碘造影剂、青霉素及尿酸或尿酸盐假阳性,3)干化学法：尿

8、液新鲜 超大剂量青霉素假阴性,3.质量控制,二) 尿蛋白定性检查,1)沉淀法,原理】 pro+生物碱沉淀物,评价,三) 尿蛋白定量检查,费时、准确性差，已淘汰,H,1.测定方法与评价,评价,2)双缩脲比色法,原理】 钨酸沉淀蛋白质，双缩脲法定量,蛋白质定量的经典方法,三) 尿蛋白定量检查,1.测定方法与评价,原理,3)染料结合法,评价,后两种灵敏高，简便快速，呈色稳定，干扰少，但易污染。 第一种烦琐，沉淀不完全-影响结果,三) 尿蛋白定量检查,1.测定方法与评价,蓝色 （600nm比色,原理】 单克隆抗体技术,4)免疫法,评价,定量：0.15g/24h 0.1g/L,灵敏度和特异性更高，临床普

9、遍应用,原理】 SDS-PAGE、琼脂糖电泳,5)电泳法,评价,灵敏度和特异性更高,三) 尿蛋白定量检查,1.测定方法与评价,2.参考值,三) 尿蛋白定量检查,定量：0.15g/24h 0.1g/L,2.参考值,1)结合灵敏度和线性范围选择方法,2)离心取上清,3)冷藏保存,4)更换试剂重做标准曲线,3.质量控制,三) 尿蛋白定量检查,1)生理性 蛋白尿,功能性,2)病理性 蛋白尿,肾后性,肾 性,肾小球性: 肾小管性: 混合性,溢出性,肾前性,体位性,偶然性:血、脓、粘液,Alb,2、1-M,Alb、2-M,Hb,Mb,BJP,TH糖蛋白,；0.5g/24h；青少年,，卧床后(-)；青少年,

10、三) 尿蛋白定量检查,4.临床意义,组织性,蛋白尿的选择性,肾小球滤过膜损伤程度及尿中蛋白组分不同,选择性蛋白尿,非选择性蛋白尿,MW49万,Alb,Tf;AT,前Alb. 3+4+;3.5g/24h;肾病综合症,MW9万,Ig(G,A,M),C3；Alb,T-H. 1+4+;0.53.0g/24h. 持续肾衰；原/继发肾小球疾病,三) 尿蛋白定量检查,肾小球性：肾小球肾炎+，很少+； 肾小管性：+，很少+. 混合性性：肾病综合征+. 组织性： +，很少,三) 尿蛋白定量检查,三、尿液葡萄糖检查,正常人尿内含糖量极少，0.565.0 mmol/24h，定性试验阴性,糖尿(glucosuria,

11、 GLU,血糖8.88mmol/L，肾糖阈值，或近端肾小管重吸收功能障碍时尿糖，定性试验阳性的尿液,1)试带法,原理】 葡萄糖+H2O 葡萄糖氧化酶 葡萄糖酸内酯+H2O2 H2O2+色素原 过氧化物酶 有色物质+ H2O,glucose oxidase-peroxidase method,评价,特异性强,灵敏度高(1.672.78mmol/L 弱阳性),简便快速,自动分析,1.测定方法与评价,一) 尿糖定性检查,1)干化学试带法,干扰因素,葡萄糖氧化酶试带法,1.测定方法与评价,一) 尿糖定性检查,2)班氏法(Benedict法,原理】 Cu2+-Cu+ 兰色 黄色至砖红色,评价,缺乏特异性

12、,灵敏度低(8.33mmol/L弱阳性,CHO,OH,1.测定方法与评价,班氏试剂1ml,煮沸不变色+尿2滴煮沸1-2min 冷却后观察,一) 尿糖定性检查,2)班氏法(Benedict法,干扰因素,1.测定方法与评价,一) 尿糖定性检查,3)薄层层析法(thin-layer chromatography, TLC,评价,鉴别、确证尿糖种类的特异、灵敏的方法；操作烦琐，很少应用,一) 尿糖定性检查,1.测定方法与评价,原理,吸附剂作固定相；有机溶剂作流动相；两相间作相对移动。 各组分流动相固定相反复吸附-解析-亲和作用展开分离,比移值（Rf）=斑点距离/溶剂距离,假阳性多,1)检验前,2)检测

13、中,容器清洁，不含氧化性物质；一次性尿杯. 消除VitC干扰：尿液煮沸几分钟,3)检测后,报告审核,结果不符查找原因; 与临床沟通,2.质量控制,一) 尿糖定性检查,室内质控. 试带法注意反应时间和温度;阴凉干燥,保质期. 班式法遵守操作规程,注意判读时间,定性：阴性,3.参考值,1)检验前质量控制,2)试带法,试带避光干燥保存； VitC,高SG尿,酮尿,左旋多巴假阴性; 尿液污染过氧化物或次氯酸盐假阳性,3)班氏法,VitC,青/链霉素,头孢菌素水杨酸盐,氨苄西林假阳性； 大量铵盐，预先加碱煮沸去氨后再检验； PRO0.5g/L,加热乙酸法去蛋白取滤液检验; 大量尿酸盐绿色浑浊灰蓝色,2.

14、质量控制,一) 尿糖定性检查,测定方法,葡萄糖氧化酶法,己糖激酶法,二) 尿糖定量检查,评价,测血糖方法。药物和尿液中的自然物质对己糖激酶法几乎无干扰；对葡萄糖氧化酶法有不同程度的干扰,2.参考值,0.565.0 mmol/L,1.测定方法与评价,非葡萄糖尿,葡萄糖尿,血糖增高性糖尿,血糖正常性糖尿-肾性,糖尿病-代谢性 内分泌性糖尿 饮食性糖尿 应激性糖尿 饥饿-糖耐量糖尿,糖尿,乳糖尿,半乳糖尿,果糖尿,肝功障碍,哺乳期,(三)临床意义,暂时性,胰岛素分泌不足,饥饿-糖耐量糖尿：见于晚期食道肿瘤、低营养状态和妊娠剧吐者 做糖耐量试验,表5-10 内分泌性糖尿常见原因及检查结果,表5-11

15、血糖正常性糖尿常见原因及检查结果,后天获得性肾性糖尿：慢性肾盂肾炎、药物中毒、肾病综合症,血糖的来源与去路,单糖,转化,四、 尿液酮体定性检查,羟丁酸78% 乙酰乙酸20% 丙酮2,脑,心脏,肌肉,1.酮体(ketone bodies,KET,尿酮体定性为阳性，即ketonuria,正常血浆含量 24mg/L,正常24h尿含量:乙酰乙酸25mg, -羟丁酸9mg, 丙酮3mg,2)乙酰乙酸测定法(Gerhardt法,2.检测原理,四、尿液酮体定性检查,1)亚硝基铁氰化钠法,乙酰乙酸+氯化高铁乙酰乙酸铁 (赭/酒红色,表5-12 基于亚硝基铁氰化钠的尿酮体检测方法,3.方法学评价,四、尿液酮体定

16、性检查,片剂法 本法对乙酰乙酸的灵敏度50100mg/L，丙酮为200250mg/L,Rothera法 本法对乙酰乙酸的灵敏度1050mg/L，丙酮为100250mg/L,Gerhardt法 本法对乙酰乙酸的灵敏度250700mg/L,表5-13 尿酮体不同检测方法灵敏度比较,3.方法学评价,灵敏度,四、尿液酮体定性检查,干扰因素,3.方法学评价,四、尿液酮体定性检查,1)检测前：标本新鲜,及时检测；密闭冷藏/冷冻,2)检测中：阴阳对照； 加入少量冰乙酸防止肌酐、肌酸 过多引起的假阳性 试带阴凉干燥，保质期,4.质量保证,四、尿液酮体定性检查,3)检测后：注意方法灵敏度. 不同病程的酮体成分的

17、影响,1)早期诊断：糖尿病酮症酸中毒昏迷,四、尿液酮体定性检查,5.临床意义,酮体阳性见于,鉴别:低血糖、心脑血管病酸中毒、高血糖渗 透性糖尿病昏迷酮体不增高. 糖尿病酮症者肾功能严重障碍而肾阈值 尿酮体-消失,糖尿病酮症酸中毒缓解时,-羟丁酸乙酰乙酸,分析结果时必须密切结合临床,2)治疗监测: 糖尿病酮症酸中毒早期主要为-羟丁 酸; 测定血-羟丁酸有利于早期诊断,5.临床意义,酮体阳性见于,四、尿液酮体定性检查,5.临床意义,酮体阳性见于,四、尿液酮体定性检查,5.临床意义,酮体阳性见于,5)药物影响：降糖药抑制细胞呼吸作用,3)非糖尿病性酮症：感染、严重呕吐 腹泻、长期饥饿、禁食、子痫,4

18、)中毒:氯仿、乙醚、磷中毒,五、尿液胆红素(BIL)定性检查,1.胆红素代谢,2) 氧化法,1)试带法（重氮法,胆红素+二氯苯胺重氮盐-紫红色偶氮化合物,强酸,2.检测原理,五、尿液胆红素定性检查,Harrison法,Smith碘环法,胆红素+碘胆绿素(绿色)（接触面,1)试带法：简单，分析仪，定性筛检 2,4-二氯苯胺试带灵敏度5-10mg/L 二氯重氮氟化硼酸盐试带灵敏度2-5mg/L,3.方法学评价,五、尿液胆红素定性检查,干扰因素,Harrison法:烦琐,灵敏度高(0.9umol/L)/0.5mg/L,3.方法学评价,五、尿液胆红素定性检查,2) 氧化法,Smith碘环法:简便,灵敏

19、度低(17.1umol/L)，少用,干扰因素,1)检测前：标本新鲜,棕色瓶避光保存,2)检测中： 试带避光干燥；规范，高低质控，定检。 Harrison法:加入FeCl3后未见足够的钡盐沉淀, 可加适量硫酸铵,五、尿液胆红素定性检查,4.质量控制,5.参考值,3)检测后：试带法定性，可疑用Harrison法验证,阴性,1)肝细胞性黄疸,2)梗阻性黄疸,hepatocellular jaundice,obstruct jaundice,3)溶血性黄疸,hemolytic jaundice,五、尿液胆红素定性检查,6.临床意义,黄疸的诊断与鉴别诊断,六、尿胆原和尿胆素定性检查,1)改良Ehrlic

20、h法(湿化学法,2)干化学试带法,尿胆原+对二甲氨基苯甲醛樱红色化合物,Ehrlich醛反应 尿胆原+重氮化合物红色化合物,1.尿胆原(URO)测定方法,H,Urobilinogen, URO/UBG,立即呈深红色 放置10min呈樱红色 放置10min呈微红色 放置10分钟后不显色,2.尿胆素(urobilin)测定方法,无胆红素尿液+碘液,尿胆原,尿胆素,Zn2+,复合物 (绿色荧光,六、尿胆原和尿胆素定性检查,Schleisinger法,氧化,1)试带法： 改良Ehrlich法：简单快速，分析仪，定性或定量； 不同试带灵敏度不同（1-4mg/L）。 偶氮反应试带不受胆红素影响，对尿胆原特

21、异,2)尿胆素最低检出量为0.05mg/L,3.方法学评价,六、尿胆原和尿胆素定性检查,干扰因素】 Ehrlich醛反应,偶氮法：尿甲醛2g/L,亚硝酸盐0.05g/L灵敏度,1)检测前：标本新鲜,避光保存； 口服NaHCO3碱化尿液,午餐后2-4h尿标本,2)检测中:口服NaHCO3碱化尿液,先用乙酸调节 为弱酸性. 试带法:规范,高低室内质控,定检. 阴凉干燥,密闭避光,有效期,4.质量控制,六、尿胆原和尿胆素定性检查,3)检测后：正确评价尿三胆; 尿胆原阴性可疑尿胆素定性验证,尿胆原：阴性或弱阳性； 1:20稀释阴性. 尿胆素：阴性,1)鉴别黄疸种类,2)反映肝细胞损伤敏感指标,3)长期

22、便秘易使尿胆原阳性程度增加,六、尿胆原和尿胆素定性检查,5.参考值,6.临床意义,表5-15 不同类型黄疸的鉴别诊断,尿液中Hb来源： 血管内溶血 尿路出血,七、尿血红蛋白定性检查,正常人血浆中游离Hb微量(50mg/L),与结合珠蛋白形成Hb-Hp复合物，在单核-巨噬细胞系统代谢，故尿中Hb极微。定性：阴性,验证尿液潜在出血的试验: 隐血试验(occult blood test,1.概述,1)试带法,2)湿化学法,3)免疫法：单克隆抗体法,利用胶体金标记的抗人Hb单克隆抗体检测,2.测定方法,原理相同,七、尿血红蛋白定性检查,胶体金单克隆抗体法,1)试带法,2)湿化学法,3)免疫法,试剂稳定

23、性差,特异性较低,假阳性多.0.3-0.6mg/L,简便快速,灵敏度高(0.15-0.3mg/L),影响多,筛检,简便,灵敏度高(0.2mg/L),特异性强，验证,3.方法学评价,七、尿血红蛋白定性检查,3.方法学评价,七、尿血红蛋白定性检查,干扰因素,阴性,1)检测前：标本新鲜,煮沸2分破坏WBC过氧化物酶 和其他对热不稳定酶,2)检测中：高低室内质控，阳性对照；3%H2O2或试 带验证所用试剂的有效期和可靠性,4.质量控制,5.参考值,七、尿血红蛋白定性检查,3)检测后：审核，沟通，验证,2)辅助诊断泌尿系统疾病,1)辅助诊断肾前性溶血性疾病,各种血管内溶血性疾病:PNH, 血型不合输血,

24、 AIHA,行军性Hb尿;各种病毒感染、疟疾;大面积烧伤、体外循环、术后所致的RBC大量破坏,隐匿性肾炎尿中少量RBC破坏隐血试验();镜检时RBC少,6.临床意义,七、尿血红蛋白定性检查,八、亚硝酸盐(NIT,硝酸盐,亚硝酸盐,nitrate,nitrite,对氨基苯磺(砷)酸,重氮盐,a-萘胺,偶氮化合物 (红色,1.检测原理：亚硝酸盐还原法,1)亚硝酸盐检出率的3个影响因素： 尿中G-杆菌要有硝酸盐还原酶; 尿潴留时间4h; 尿中有硝酸盐,八、亚硝酸盐(NIT,2.方法学评价,2)灵敏度：0.3-0.6mg/L,3)干扰因素,表5-16 亚硝酸盐检测的干扰因素及评价,1)检测前：晨尿，尽

25、快检测,八、亚硝酸盐(NIT,3.质量控制,2)检测中：高低室内质控,定时阳性标本验证; 试带干燥避光，有效期,3)检测后：审核,结合LEU、镜检分析,阴性,4.参考值,快速筛检尿路感染,NIT阳性:泌尿系统有细菌感染.(排除假阳性) NIT阴性:不能排除泌尿系统有细菌感染,八、亚硝酸盐(NIT,5.临床意义,NIT试带LEU镜检准确诊断,确证试验：尿细菌培养阳性,九、白细胞(WBC,LEU)(leukocyte,1.检测原理：酯酶(esterase)法,吲哚酚酯 吲哚酚+有机酸,粒细胞酯酶,重氮盐 重氮色素 （紫红色缩合物,九、白细胞(WBC,LEU,2.方法学评价,1)灵敏度1025个/u

26、l或515个/HPF,特异性强：中性粒细胞,2)【干扰因素,九、白细胞(WBC,LEU,3.质量控制,1)检测前：标本新鲜,久置后WBC破坏试带法 与镜检结果差异过大,2)检测中：规范操作和质控,3)检测后：审核,结合NIT、LEU、镜检分析， 提高尿路感染诊断的可靠性,阴性,4.参考值,LEU阳性:泌尿系统感染.(排除假阳性,5.临床意义,LEU阳性镜检阴性,九、白细胞(WBC,LEU,诊断泌尿系统感染,LUE阴性:镜检为淋巴细胞或单核细胞。 见于肾移植排斥反应、泌尿系结核,中性粒细胞溶解，见于肾脏病人,十、维生素C(VitC或ASG,1.反应原理,甲基绿磷钼酸噻嗪化合物,VitC,钼蓝 (蓝色紫色,检测VitC用于提示尿液OB、BIL、GLU、NIT及LEU检测结果是否准确，防止出现假阴性结果,1)还原法,2)吲哚酚法,2.方法学评价,1)灵敏度：50-100mg/L,特异性：只检测还原性抗坏血酸,2)【干扰因素,3.质量控制,1)检测前：随机尿,2)检测中：规范操作和试带质控,3)检测后：审核,分析对OB/Hb、BIL、GLU、 NIT、LEU是否产生影响,阴性,4.参考值,5.临床意义,判断试带法OB/Hb、BIL、GLU、NIT、LEU等 结果是否可靠,十一、尿液分