微生物限度检查方法验证方案

1、 微生物限度检查方法验证方案 页1页，共12页 码： 第 ZYCWJ-TS-07156-01 文件编码：起草部门：质量管理部 01 版本号： 微生物限度检查方法验证方案标题 起草人 起草时间 审核人 审核时间 批准人 批准时间 颁发部门质量管理部 生效日期 分发部门 物料部 设备部 质量管理部 生产部 份数 财务部销售部 行政人事部 变更记载：修订号 批准日期 执行日期 变更原因 页 码：第 3 页 共 31 页 文件编码：ZYCWJ-TS-07156-01 版 本 号： 01 题 目： 微生物限度检查方法验证方案 微生物验证实施小组主要成员： 部 质量质量质量质量质量管理部 门姓 管理 管理

2、 管理 管理 名 职位 验证领导小组审查汇签： 姓 名 部 门 职务或岗签字日期 位 企业负责 质量管理部 人 经理 生产部 经理 设备部 经理 质量管理部 QC主管 质量管理部 QA主管 物料部 经理 页 码：第 4 页 共 31 页 文件编码：ZYCWJ-TS-07156-01 版 本 号： 01 题 目： 微生物限度检查方法验证方案 1 概述 药典微生物限度检查法中要求在建立药品的微生物限度检查法时，应进行方法的验证，以证明所采用的方法适合于该药品的微生物限度检查。所以对感冒灵颗粒微生物限度检查进行方法的验证。 2 目的 为了保证检验质量，对所用的检验方法必须经过验证，才能确保检验结果的

3、准确可靠。 3 适用范围 本方案适用于感冒灵颗粒微生物方法学的确认与验证。 4 验证人员职责 4.1 验证小组:组长：质量管理部经理 成员：QC主管、微生物操作人员 4.2 职责及分工：QC主管组织起草该验证方案，并组织实施该方案； 微生物操作人员具体实施该方案； 页 码：第 5 页 共 31 页 文件编码：ZYCWJ-TS-07156-01 版 本 号： 01 题 目： 微生物限度检查方法验证方案 质量管理部经理协助和监控该方案的实施。 4.3 验证方案批准后，应进行培训。由验证小组指定人员负责对小组成员及和验证有关的人员进行培训。 5 验证依据 中国药典2015年版通则“1105”、“11

4、06” 6.感冒灵颗粒微生物限度检验方法验证风险分析 措施结果 序号 项目 潜在的风险分析潜在的失败后果 原因分析 严重程度 发生频 次风险 等级 采取的措施严重程度 发生频次 1 验证方案编写人员 编写人员未按照ZYCWJ-SOP-10008-01微生物限度检查法标准 操作规程编写方案。验证方法错误，导致验证结果不可 靠。人员培训考核不到位 F2 P3 ALARP 对验证编写人员进行培训和考核，合格后方可编写 F2 P5 2 试验 人员试验人员未按照编写的验证方案进行操作 操作不正确，导致试验结果不可 靠人员培训考核不到 位F2 P3 ALARP 按照验证方案进行培训，培训合格后方可操作 F

5、2 P5 页 码：第 7 页 共 31 页 文件编码：ZYCWJ-TS-07156-01 版 本 号： 01 题 目： 微生物限度检查方法验证方案 导致使3 培养箱、净化工作 台仪器未经校验或不在校 验期内。检验环境和培养环境不符合要求，最终导致验证用人员使用前未对校验期F2 P3 ALARP 设备人员使用前对设备进行检查。 F3 P5 页 码：第 8 页 共 31 页 文件编码：ZYCWJ-TS-07156-01 版 本 号： 01 题 目： 微生物限度检查方法验证方案 失进败。 行检查 4 干热灭菌烘箱、压力蒸气锅 仪器未经校验或不在校验期内。 导致试验结果出现异常。 使用人员使用前未对校

6、验期进行 检查F2 P3 ALARP 设备人员使用前对设备进行检查。 F3 P5 页 码：第 9 页 共 31 页 文件编码：ZYCWJ-TS-07156-01 版 本 号： 01 题 目： 微生物限度检查方法验证方案 使用5 对照培养基、检查用培养基、检定菌 对照培养基、检查用培养基、检定菌失效 导致验证失败 前未对对照培养基、检查用培养基、检定菌有F2 P3 ALARP 对管理人员进行培训，严格按照ZYCWJ-SMP-10020-00培养基及检定菌管理规程进行管理，使用前使用人对有效期进行确认。 F3 P5 页 码：第 10 页 共 31 页 文件编码：ZYCWJ-TS-07156-01

7、版 本 号： 01 题 目： 微生物限度检查方法验证方案 效期进行核查。 6 培养基、缓冲液、消毒剂 培养基、缓冲液、消毒剂配制不正确 导致验证失败 严格按照标准要求制备缓冲液和消毒F2 P3 ALARP 对实验人员进行验证培训 F3 P5 页 码：第 11 页 共 31 页 文件编码：ZYCWJ-TS-07156-01 版 本 号： 01 题 目： 微生物限度检查方法验证方案 剂 7 灭菌器具、洁净服 已灭菌器具和洁净服过效期 导致验证失败 使用前未对已灭菌器具和洁净服有效期进行确 认F2 P3 ALARP 使用前对已灭菌器具和洁净服有效期进行确认 F3 P5 页 码：第 12 页 共 31

8、 页 文件编码：ZYCWJ-TS-07156-01 版 本 号： 01 题 目： 微生物限度检查方法验证方案 1、 验证方案编8 验证方法不正确 写不正确； 2、 未严格按照验证方案开展验证工作 导致验证失败 验证方案未经批准 F3 P3 ALARP 对验证方案进行审核 F3 P5 9 控制菌检验结果不合格 实验组无菌落生长，供 试品可能有抑菌性导致验证失败 1、供试品可能对试验菌存在抑制F2 P3 ALARP 采用培养基稀释法消除抑菌性 F3 P5 页 码：第 13 页 共 31 页 文件编码：ZYCWJ-TS-07156-01 版 本 号： 01 题 目： 微生物限度检查方法验证方案 作用

9、 2、检验员判断失误。 10 实验组菌种回收率不达 标各试验组回收率低于或 高于标准范围导致验证失败 1、供试品可能对试验菌存在F2 P3 ALARP 采用培养基稀释法消除抑菌性 F3 P5 页 码：第 14 页 共 31 页 文件编码：ZYCWJ-TS-07156-01 版 本 号： 01 题 目： 微生物限度检查方法验证方案 抑制作用 2、检验人员计数错误。 11 样品储存环境 样品储存环境、温度异常。 导致样品被污染或 失败样品存放不当 F2 P3 ALARP 严格控制样品存放环境的温湿度 F3 P5 页 码：第 15 页 共 31 页 文件编码：ZYCWJ-TS-07156-01 版

10、本 号： 01 题 目： 微生物限度检查方法验证方案 1.12 洁净区环 境洁净区温湿度、1、压差异常 、洁净区环境被污染2 导致验证 失败洁净区温湿度、压差控制 不当2.未定期对洁净F2 P3 ALARP 1. 每天定期监察洁净区的温湿度； 2. 按照SOP规定对洁净区进行消毒； 3. 严格按照洁净度监测管理规程对洁净区环境进行 监测。F3 P5 页 码：第 16 页 共 31 页 文件编码：ZYCWJ-TS-07156-01 版 本 号： 01 题 目： 微生物限度检查方法验证方案 区进行清洁和消毒； 3.未定期监测洁净区的环 境 页 码：第 17 页 共 31 页 文件编码：ZYCWJ-

11、TS-07156-01 版 本 号： 01 题 目： 微生物限度检查方法验证方案 6.1 结果分析：通过以上采取的措施，风险均控制在可接受范围内。 7. 人员培训确认表 培训 时间 培训内容 培训对象 培训地点 培训讲师 主办部门 被 培 训 人 员 签 名 序号 姓名 部门及岗位 QA主管 QC主管 设备部经理 设备管理员 生产部经理 质量管理部QC检验员 质量管理部QC检验员 质量管理部QC检验员 质量管理部QC检验员 页 码：第 19 页 共 31 页 文件编码：ZYCWJ-TS-07156-01 版 本 号： 01 题 目： 微生物限度检查方法验证方案 8.验证方法 6.1 仪器及设备

12、名称 仪器及设备名称 型号 生产厂家 是否校验 备注 生化培养箱 是 否 恒温培养箱 是 否 净化工作台 是 否 超净工作台 是 否 立式压力消毒器 是 否 立式压力灭菌器 是 否 6.1验证用样品： 感冒灵颗粒 规格： 批号： 感冒灵颗粒 规格： 批号： 感冒灵颗粒 规格： 批号： 6.2 验证用培养基： ：家厂产生 基养培脂琼胨豆大酪胰 页 码：第 20 页 共 31 页 文件编码：ZYCWJ-TS-07156-01 版 本 号： 01 题 目： 微生物限度检查方法验证方案 批号： 配制批号： 沙氏葡萄糖琼脂培养基 生产厂家： 批号： 配制批号： 营养琼脂培养基 生产厂家： 批号： 配制批

13、号： 胰酪大豆胨液体培养基 生产厂家： 批号： 配制批号： 沙氏葡萄糖琼脂培养基 生产厂家： 批号 ： 配制批号： 麦康凯液体培养基 生产厂家： 批号 ： 配制批号： 麦康凯琼脂培养基 生产厂家： 批号 ： 配制批号： 6.3验证用菌种: 金黄色葡萄球菌（CMCC(B)26 003）、大肠埃希菌（CMCC(B)44 102）、枯草芽孢菌（CMCC(B)63 501）、白色念珠菌（CMCC(F)98 001）、黑曲霉菌（CMCC(F)98 003） 6.4菌液制备： 6.4.4取经3035培养1824小时的金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌与枯草芽孢杆菌营养肉汤液体培养物51ml加入9ml 0.9%氯化

14、钠溶液中，10倍稀释至10107 备用。100cfu/ml为不大于 21 页页 码：第 31 页共：编码文件ZYCWJ-TS-07156-01 ： 本 号版01 目：题 微生物限度检查方法验证方案 天的白色念珠菌霉菌液体236.4.2取经2025培养倍稀释至氯化钠溶液中，加入9ml 100.9%培养物1ml5 100cfu/ml备用。10为不大于将黑曲霉菌斜面的新鲜培养物接种至沙氏葡萄糖6.4.3天，使大量的7培养5?20琼脂斜面培养基上，?2580）聚山梨酯0.05%（ml/ml孢子成熟。加入3-5ml含蛋白胨缓-pH7.0无菌氯化钠的0.9%无菌氯化钠溶液或冲液，将孢子洗脱。然后，采用适宜

15、方法吸出孢子悬液无0.9%80的0.05%（ml/ml）聚山梨酯无菌试管内用含菌氯化钠溶液或pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液依次稀释至，制成每1ml 含孢子数小于100cfu 的孢子悬液。 6.4.4 上述菌悬液制备后若在室温下放置，应在2小时内使用；若保存在28，可在24内使用。 6.5供试液制备: 取样品10g，加入pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液100ml，为1：10供试液。 7.计数方法的验证： 7.1 需氧菌、霉菌及酵母菌计数（平皿法） 所加菌液的体积不得超过供试液体积的1%。为确认供试品中的微生物能被充分检出，首先应选择最低稀释级的供试液进行计数方法适用性检查。 7.2试验组

16、取上述制备好的供试液，加入试验菌液、混匀，使每1ml供试液或每张滤膜过滤的供试液中含菌量不大于 。100cfu 22 页页 码：第 31 页共：编码文件ZYCWJ-TS-07156-01 ： 本 号版 01 目：题微生物限度检查方法验证方案 7.2.1取的供试液9.9ml和小于10000cfu的铜绿假单胞菌菌悬液0.1ml混匀后，吸取1ml注入平皿中，立即倾注胰酪大豆胨琼脂培养基1520ml，混匀，凝固，于3035倒置培养3天点计菌落数。平行制备2个平皿。 7.2.2取的供试液9.9ml和小于10000cfu的金黄色葡萄球菌菌悬液0.1ml混匀后，吸取1ml注入平皿中，立即倾注胰酪大豆胨琼脂培

17、养基1520ml，混匀，凝固，于3035倒置培养3天点计菌落数。平行制备2个平皿。 7.2.3取的试液9.9ml和小于10000cfu的枯草芽孢杆菌菌悬液0.1ml混匀后，吸取1ml注入平皿中，立即倾注胰酪大豆胨琼脂培养基1520ml，混匀，凝固，于3035倒置培养3天点计菌落数。平行制备2个平皿。 7.2.4取的供试液9.9ml和小于10000cfu的白色念珠菌菌悬液0.1ml混匀后，吸取1ml注入平皿中，立即倾注胰酪大豆胨琼脂培养基1520ml，混匀，凝固，于3035倒置培养3天点计菌落数。平行制备2个平皿。 7.2.5取的供试液9.9ml和小于10000cfu的黑曲霉菌悬液0.1ml混匀

18、后，吸取1ml注入平皿中，立即倾注胰酪大豆胨琼脂培养基1520ml，混匀，凝固，于3035倒置培养3天点计菌落数。平行制备2个平皿。 7.2.6取的供试液9.9ml和小于10000cfu的白色念珠菌菌悬液0.1ml混匀后，吸取1ml注入平皿中，立即倾注沙氏葡萄糖琼脂培养基1520ml，混匀，凝固，于2025倒置培养5天点计菌落数。平行制备2个平皿。 7.2.7取的供试液9.9ml和小于10000cfu的黑曲霉菌悬液0.1ml混匀后，吸取1ml注入平皿中，立即倾注沙氏葡萄糖琼脂培养基1520ml，混匀，凝固，于2025 个平皿。2天点计菌落数。平行制备5倒置培养 页页 码：第 23 页共 31

19、：码文件编ZYCWJ-TS-07156-01 本 号：版 01 目：题 微生物限度检查方法验证方案 菌液组7.3 金黄色葡的铜绿假单胞菌菌悬液、7.3.1取小于100cfu萄球菌菌悬液、枯草芽孢杆菌菌悬液、白色念珠菌菌悬，注入平皿中，立即倾注胰酪1ml液、黑曲霉菌悬液各，混匀，凝固，于301520ml大豆胨琼脂培养基约 个平皿。 天点计菌落数。各平行制备235倒置培养3黑曲霉菌悬的白色念珠菌菌悬液、7.3.2取小于100cfu液各1ml，立即倾注沙氏葡萄糖琼脂培养基各 1520ml，混匀，凝固，于2025倒置培养5天点计菌落数。各平行制备2个平皿。 7.4 供试品对照组 7.4.1取的供试液1

20、ml，注入平皿中，分别立即倾注1520 ml温度不超过45胰酪大豆胨琼脂培养基和沙氏葡萄糖琼脂培养基，混匀，凝固，胰酪大豆胨琼脂培养基3035倒置培养3天点计菌落数， 沙氏葡萄糖琼脂培养基2025倒置培养5天点计菌落数。各组平行制备2个平皿。 7.4计算公式：稀释剂对照组的回收率= 稀释剂对照组菌落数-供试品对照组菌数 100% 菌液组菌落数 试验组菌数回收率= 试验组菌落数-供试品对照组菌 数 100% 菌液组菌落数 判定标准：实验组、稀释剂对照组的菌数回收率应7.5 之间。若各试验菌的回收率均符合规定，照20.5在 第 24 页页 码： 共 31 页 文件编码：ZYCWJ-TS-07156

21、-01 版 本 号： 01 题 目： 微生物限度检查方法验证方案 所用的供试液制备方法及计数方法进行该供试品的需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数计数。 7.6试验结果 表1 平皿法验证结果1# 批号： 实验组别 菌试验 种供试液对照组 菌液组 菌数试验组菌数 回收率（%） 2号1 1号 2号 号金黄色葡萄球 菌 大肠埃 希菌 枯草芽 孢杆菌 黑曲霉 页 码：第 25 页 共 31 页 文件编码：ZYCWJ-TS-07156-01 版 本 号： 01 题 目： 微生物限度检查方法验证方案 白色念 珠菌 证结果皿法验2# 表2 平批号： 实验组别 验试菌 种供试液对照组 菌液组 菌数试验组菌数 回收率（

22、%） 2号1 1号 2号 号金黄色葡萄球 菌 大肠埃 希菌 枯草芽 孢杆菌 页 码：第 26 页 共 31 页 文件编码：ZYCWJ-TS-07156-01 版 本 号： 01 题 目： 微生物限度检查方法验证方案 黑曲霉 白色念 珠菌 证结法表3 平皿验果3# 批号： 实验组别 试验菌 种供试液对照组 菌液组 菌数试验组菌数 回收率（%） 2号1 1号 2号 号金黄色葡萄球 菌 大肠埃 希菌 枯草芽 27 页页 码：第 31 页共：编码文件ZYCWJ-TS-07156-01 ： 本 号版 01 目：题微生物限度检查方法验证方案 孢杆菌黑曲霉 白色念 珠菌 结果说明： 8.控制菌检查方法验证（

23、1）大肠埃希菌 取1：10供试液10ml两份，分别加入两瓶100ml胰酪大豆胨液体培养基，其中一瓶加入1ml大肠埃希菌液（不大于100cfu/ml）为试验组；一瓶为供试品；另取一瓶100ml胰酪大豆胨液体培养基加入10ml无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液为阴性对照。 取上述培养物1ml，接种至含100ml 麦康凯液体培养基内培养，4244培养2448小时。取麦康凯液体培养物划线接种于麦康凯琼脂平板上3035培养1872小时。 表10 大肠埃希菌常规法验证结果1# 批号： 页 码：第 28 页 共 31 页 文件编码：ZYCWJ-TS-07156-01 版 本 号： 01 题 目： 微生物限度检查方法验证方案 步骤 实验组 阳性对照 组阴性对照组 胰酪大豆胨液体培养基， 小时3035培养1824 ，麦康养体培基凯液 培养42442448小时 取麦康凯液体培养物划线接种于麦康凯琼脂平板1