探讨大黄酚对脑缺血再灌注心脏损伤的保护机制

1、探讨大黄酚对脑缺血再灌注心脏损伤的保护机制大黄酚( chrysophanol，Chry) 是蓼科植物掌叶大黄( Rheum palmatum L ) 根中游离蒽醌衍生物，有研究表明Chry 对脑缺血再灌注( IR) 所致小鼠记忆功能损伤有明显保护作用，但关于 Chry 对脑 IR 引起心脏损伤的保护作用的报道少见。我们拟通过观察 Chry 对脑 IR 后小鼠心脏组织中过氧化氢( H2O2) 含量及过氧化氢酶( catalase，CAT) 活力变化的影响，探讨 Chry 对脑 IR 心脏损伤的保护作用机制，为其应用于临床治疗脑血管疾病引起的心脏组织损伤的保护作用提供参考。1 材料与方法1 1 动

2、物与试剂1 1 1 动物 昆明种小鼠 80 只，体质量( 28 ± 2) g，雌雄不拘，中国医学科学院北京药物研究所提供，许可证号:( 京) 2004200012。1 1 2 药物与试剂 Chry( 中国药品生物制品检定所，纯度≥98%，批号 110796 200412) ，实验前用 N，N dime-thyl Formamide 溶解，聚山梨酯 80 助溶，0 9% 氯化钠注射液稀释至所需浓度。N，N dimethyl Formamide: 聚山梨酯 80 0 9% 氯化钠注射液为 1 1 8。CAT 可见光试剂盒及 H2O2试剂盒由南京建成生物工程研究所提供。1 1 3

3、 仪器 FSH 2 内切式组织可调高速匀浆器( 江苏大地自动化仪器厂) ; LabTech 全自动紫外可见分光光度计( 北京莱伯泰科仪器有限公司) ; 二列六孔电热恒温水浴锅( 北京精科华瑞仪器有限公司) ; Sigma3K30 高速冷冻离心机( 德国 Sigma 公司) 。1 2 方法1 2 1 造模 3 5% 水合氯醛( 10 mL / kg，腹腔注射) 麻醉小鼠，仰卧位固定，自胸骨柄到下颌骨间行 5 8 mm 正中纵向切口，分离两侧颈总动脉，分离后用液体石蜡浸泡过的黑色手术线穿过左右二侧颈总动脉，尽量恢复两侧颈总动脉到原位，黑色手术线在气管上方打松反手结，结的松紧以不压迫气管为宜。在每侧

4、颈总动脉上方的黑线上穿过一条用液体石蜡浸泡过白色手术线，按文献2方法埋线后缝合切口。术后 48 h 将颈下部黑色手术线拉紧，阻断两侧颈总动脉造成大脑缺血状态，5 min 后轻拉两侧白色手术线，使颈总动脉恢复血液再灌注。1 2 2 实验分组 造模成功 74 只，术后 48 h 将清醒、活动正常的造模成功的 74 只小鼠随机分为 5 组，药物组( IR+ Chry) 45 只，分为高、中、低剂量 3 个组各 15 只，于缺血前30 min 分别腹腔注射 Chry 10 0、1 0、0 1 mg / kg; 模型组 15只，于缺血前30 min 腹腔注射溶剂 10 mL/kg; 假手术组 14只，进

5、行手术，但不进行脑 IR，腹腔注射溶剂10 mL/kg。1 2 3 小鼠心脏组织内 H2O2含量及 CAT 活力的测定模型组和药物组小鼠恢复血供后 10 min 快速断头处死，在 0 9% 氯化钠注射液冰块上迅速取心脏组织，4 0 9% 氯化钠注射液冲洗，滤纸吸干，置于 1 mL 离心管内，并置于 Forma 86c ULT 冰柜内冷冻贮存。实验时取出制成 10% 心脏组织匀浆，3 500 4 000 r/min，4 低温离心 10 min 后取适量上清液测定 H2O2含量和 CAT 活力。每 mg 组织蛋白每 s 分解 1 μmoL 的 H2O2的量为一个CAT 活力单位。1 3 统计

6、学方法应用 SPSS 16 0 统计软件进行统计学分析，计量资料用均数 ± 标准差( x珋 ± s) 表示，采用 t 检验。2 结 果2 1 各组心脏组织中 H2O2含量比较 见表 1。由表 1 可见，与假手术组比较模型组小鼠心脏组织内H2O2含量明显增加 P 0 05) ; 与模型组比较高剂量大黄酚组、中剂量大黄酚组小鼠心脏组织内 H2O2含量明显减少( P 0 01) 。2 2 各组心脏组织中 CAT 活力比较 见表 2。由表 2 可见，与假手术组比较模型组小鼠心脏组织内CAT 活力明显降低( P 0 05) ; 与模型组比较高剂量大黄酚组小鼠心脏组织内 CAT

7、 活力明显提高( P 0 01) 。3 讨 论急性缺血性脑血管疾病是老年人的常见病、多发病，发病后，可导致某些器官功能损伤甚至衰竭，进而发生多个器官功能损伤甚至衰竭，是老年缺血性脑血管疾病患者死亡和致残的主要原因，其中心、肝、肺、肾、胃肠道容易受累，表现为心肌梗死，肝细胞水肿、体积增大，肺水肿，急性胃黏膜病变，肾衰竭及代谢等系统或器官的损伤，病死率与器官衰竭数目呈正相关，尤其是引起的心肌损伤，后果更严重。因此，积极探讨脑缺血疾病引起的多器官损伤的中药单体药物治疗和预防具有重大医学价值和社会意义。多数学者研究后认为脑缺血后再灌注可引脑组织损伤加重，与脑缺血时间及再灌注时间无相关。缺血性脑血管疾病

8、患者生病后，导致多器官功能障碍综合征( multiple organ dysfunction syndrome，MODS) 。引起 MODS 的病因很多，往往是综合性的、多因素的。现代研究表明有以下一些因素: 严重创伤、烧伤和大手术后，低血容量休克，败血症及严重感染，大量输液、输血及药物使用不当，毒物和中毒等。MODS 的威胁日渐突出，目前是 ICU 内导致患者死亡最主要的原因之一，也是创伤及感染后最严重的并发症之一，对患者预后影响明显。如何提高其诊断和救治水平，已是当务之急，尤其是当今发病率很高的脑缺血性疾病发生后而引起的 MODS，如何预防其发生，如何对各组织起到保护作用，是研究的必然趋势

9、。有研究认为，Chry 对脑 IR 损伤所造成的其他组织、器官损伤有较强的保护作用，可减轻心肌、肾脏等器官因脑缺血所引起的损伤。本研究结果表明，Chry 可增强脑IR 小鼠心脏组织中 CAT 活性，促进 H2O2分解，减少心脏组织中 H2O2含量，进而减少氧自由基的生成及脂质过氧化反应。H2O2是活跃的强氧化剂，能通过氧化反应破坏细胞新陈代谢产生一系列新的氧化性活跃物质自由基，而 CAT 是细胞内抗氧化酶，能够消除细胞新陈代谢的副产物H2O2。通过本研究结果，我们认为 Chry 可增强脑 IR 损伤后心脏组织中 CAT 活性，减少心脏组织中 H2O2含量，从而发挥 IR 后心脏损伤的保护作用，

10、可为 Chry 的基础研究及临床应用提供有益的参考。参考文献1 王树，张丹参，张力，等 大黄酚对脑缺血再灌注小鼠记忆功能的保护作用J 中国老年学杂志，2009，29( 15) : 1934 19362 Himori N，Watanabe H，Akaike N，et al Cerebral ischemia mod-el with conscious mice: involvement of NMDA receptor activa-tion and derangement of learning and memory abilityJ JPharmacol Meth，1990，23: 311 3273 韩敏，刘艳凯，薛茜 脑缺血再灌注损伤的研究进展J 河北北方学