单抗制剂在内分泌疾病的应用

1、单抗制剂在内分泌科领域的应用,概述,1890年Behring和北里柴三郎 发现白喉抗毒素,建立了血清疗法,开创了抗体制药。 1937年Tiselius用电泳法将 血清蛋白分离为白蛋白、球蛋白，并证明抗体活性主要 存在于球蛋白组分,抗体是指能与相应抗原特异性结合具有免疫功能的球蛋白。 抗体的产生：机体免疫系统受抗原刺激后，B淋巴细胞被活化增殖和分化为浆细胞，由浆细胞合成和分泌的球蛋白,20世纪60年代发现多发性骨髓瘤是浆细胞癌变形成的恶性增殖性疾病。病人血清中出现同抗体结构类似的球蛋白， 统称为免疫球蛋白（immunoglobulin，Ig）。所以Ig是化学结构的概念，而抗体是生物学功能的概念,

2、多克隆抗体：病原微生物含有多种抗原决定簇的抗原物质，因此这些抗体制剂也是多种抗体的混合物，故称多克隆抗体,1975年Kohler和Milstein首先利用B淋巴细胞杂交瘤技术制备出单克隆抗体（monoclonal antibody McAb）。 单克隆抗体具有高度特异性、均一性、来源稳定、可大量生产等特点，为抗体制备和应用提供了全新的手段，还促进了基础和临床医学的发展,单克隆抗体作为抗体制剂，在临床上主要用与疾病的诊断和治疗。 单克隆抗体检测与某些疾病有关的抗原，辅助临床诊断。用放射性核素标记单克隆抗体进行肿瘤显像，做免疫定位诊断,单克隆抗体用于临床治疗，CD3单克隆抗体作为免疫抑制剂对器官移

3、植免疫排斥有抑制作用。 以单克隆抗体作为载体的药物对肿瘤进行定向治疗,单克隆抗体,单克隆抗体是将抗体产生细胞与具有无限增殖能力的骨髓瘤细胞相融合，通过有限稀释法及克隆化使杂交瘤细胞成为纯一的单克隆细胞系而产生的,一、人鼠嵌合抗体,抗原抗体结合功能抗体可变区（V） 同种性免疫源性抗体稳定区（C） 在基因水平上将鼠源单抗的H 和L链可变区基因分离出来，分别与人Ig的H 和L链的稳定区（C）基因连接成人-鼠嵌合抗体的H 和L链基因，再共转染骨髓瘤细胞，就能表达完整人-鼠嵌合抗体,二、改形抗体（CDR移植抗体,Ig 分子中参与构成抗原结合部位的区域是H和L链V区中的互补决定区（CDR区），而不是整个可

4、变区。 H和L链各有三个CDR，其它部分称框架区。 用鼠源单抗的CDR序列替换人Ig 分子中CDR序列，则可使人的Ig 分子具有鼠源单抗的抗原结合特异性。可消除免疫源性,三、小分子抗体,基因工程小分子抗体仅表达鼠源单抗的V区片段，相对分子量为原抗体的1/801/3。即保留CDR区，而Ig 分子中的C区不表达。 小分子抗体类型有： Fab片段抗体 Fv抗体 单链抗体 单域抗体 最小识别单位,四、双功能抗体,双功能抗体就是双特性抗体。它是一种非天然性抗体。其结合抗原的两个臂具有不同的特异性。 构建方法： 化学交联法 生物学方法（杂种-杂交瘤） 基因工程法,五、抗体融合蛋白,抗体融合蛋白广义属双功能

5、抗体。 类型： 配基-配基型融合蛋白； 配基-Ig型嵌合蛋白； 配基-Fv型融合蛋白； 受体-Fv型融合蛋白； 酶-抗体型融合蛋白,GAD抗原肽抗体,1型糖尿病 采用把耐受原基因GAD片段移植在IgG重链N端的融合子GAD抗原肽抗体通过逆转录病毒对NOD小鼠进行基因治疗。 初步实验显示，GAD抗原肽抗体通过逆转录病毒对NOD小鼠进行基因治疗能使NOD小鼠糖尿病发病延迟并降低了其发病率,小剂量抗CD3单克隆抗体,1型糖尿病-有效逆转新发1型糖尿病 抗移植排斥药 以体液免疫为主的重症肌无力动物模型 抗CD3单克隆抗体OKT3自1986年被FDA批准用于临床以来，在肾、心脏、骨髓等实体及非实体器官移

6、植后的抗排斥反应中有着广泛的应用. 近年来在1型糖尿病等自身免疫病的治疗中也取得了良好的临床疗效。 但是抗CD3抗体与Fc受体相互作用引起的丝裂原活性以及鼠抗体的免疫原性给抗体的临床应用带来严重的毒副作用,Th1或Th2型细胞因子或抗细胞因子单抗，IFN-单抗,自身免疫性糖尿病 动物实验中已证实用逆转录病毒为载体构建的IL一4基因疫苗、IL一10基因疫苗均能有效地防止糖尿病的发生,抗CD22单克隆抗体,自身免疫性糖尿病 动物实验,抗CD20单克隆抗体,1型糖尿病 与IL-10基因联合免疫治疗对胰岛细胞具有 保护作用 动物实验,抗VEGF抑制剂,治疗糖尿病性视网膜病变、糖尿病性黄斑水肿、新生血管

7、性老年黄斑水肿/变性(AMD)、新生血管性青光眼、卵巢癌、胰腺癌 作用：阻断VEGF的作用，可以抑制白细胞淤滞、视网膜细胞问黏附分子一1的表达和血-视网膜屏障的破坏、减少视网膜微血管的渗漏，有效治疗DR,抗VEGF抑制剂,按作用途径可以分为： VEGF受体嵌合蛋白、VEGF中和抗体、反义寡聚脱氧核苷酸和选择性VEGF受体激酶抑制剂，其中选择性VEGF受体激酶抑制剂可能为较有前途的抑制剂。 目前，FDA批准上市的VEGF抑制剂主要有3种：哌加他尼钠、兰尼单抗和贝伐单抗，其中已被批准用于眼科临床的有哌加他尼钠和兰尼单抗,抗VEGF抑制剂,文献报道静脉滴注bevacizumab治疗直肠癌期临床试验中

8、，224的患者诱发了高血压，全身静脉滴注VEGF-A可明显降低收缩压，这说明抑制VEGF-A可提升动脉压，有提高动脉血栓形成风险系数的作用，而当年龄大于65岁时，此风险加倍。 VEGF-A可以提高前列腺环素和一氧化氮水平，从而引起血管扩张效应，这对缺血性心脏病患者有保护作用，抗VEGF药物可以减少前列腺环素和一氧化氮水平，从而给患冠状动脉硬化性心脏病患者的心血管事件的高发生率带来负面影响,抗VEGF抑制剂,因此，对年龄较大、较易发生心血管意外的新生血管眼病患者在应用非选择性VEGFA抑制剂时，要充分考虑其全身效应及可能诱发的副作用。 眼部不良反应可能有：角膜损伤、视网膜脱离、葡萄膜炎或炎症反应

9、、晶状体损伤、眼内炎、白内障进展、视网膜动脉阻塞、视网膜下出血、急性视力下降、视网膜色素上皮脱离； 全身不良反应包括急性缺血性心脏病发作、血压增高、脑血管意外或死亡，但发生率均未超过021,抗VEGF抑制剂,抗VEGF治疗是一把“双刃剑” VEGF及其受体系统在眼血管形成过程中起着非常重要的作用，对于确保有足够的血液供应视网膜色素上皮细胞和光感受器，维持和保护视网膜神经节细胞的功能至关重要，眼内VEGF平衡失调会干扰正常眼血管生成和神经生理功能。 目前临床应用的非选择性VEGF-A抑制剂治疗新生血管性AMD可能需要持续数月或数年，对视网膜神经节细胞的影响以及视网膜脉络膜正常血管生成的干扰究竟有

10、多大，虽然真正的临床关联还不清楚，但需要我们在选择这种治疗方式时考虑到这些潜在风险,重组人源化IgGl一K单克隆抗体,ranibizumab： 治疗糖尿病性黄斑水肿；湿性年龄相关性黄斑变性 可通过与VEGFA的结合，阻断VEGFA与其受体VEGFRl和VEGFR2的相互作用，从而减少内皮细胞增殖、血管渗漏和新生血管的形成。 该单抗于2012年8月获美国FDA批准用于DME的治疗，商品名为Lucentis（雷珠单抗,促红细胞生成素受体抗体,抑制小鼠视网膜新生血管形成 抑制VEGF通路后并不能完全抑制视网膜新生血管的产生。近来发现促红细胞生成素是一个独立的促视网膜新生血管形成的因子。使用Epo拮抗

11、剂，应能抑制视网膜新生血管的形成,人源化单抗XOMA-052,2型糖尿病、痛风 可特异性地与人白细胞介素-1结合，使之无法作用于IL-1受体，进而干扰由IL-1 介导的信号通路，现已被证实具有糖尿病治疗作用。 目前，XOMA公司正在美国和欧洲进行本品治疗2型糖尿病的期临床研究。 值得一提的是，在所有的有核细胞上均有IL-1受体存在，因此本品对其他与该类细胞有关的疾病，如类风湿性关节炎和幼年特发性关节炎、心血管疾病、白塞病以及痛风的炎症反应等也具有治疗作用,抗IL-1单抗,痛风,甲状腺癌,抗p21ras单克隆抗体：甲状腺乳头状癌 抗P T K（酪氨酸蛋白激酶）抗体：F D A 批准的主要有Bev

12、acizumab、Cetnximab、帕尼单抗及曲妥珠单抗。它们抗癌的靶点分别为VEGF、EGFR及人类表皮生长因子受体等，主要用于人体多种癌肿，如肺、肾、头颈、乳房及胃肠道肿瘤。 Bevacizumab于2004年FDA批准用于治疗迁徙性结直肠癌，近年亦有报道将Bevacizumab用于治疗甲状腺癌,甲状腺癌,酪酸激酶抑制剂(TKI)：凡德他尼(vandetanib) ，口服的，多靶点，适应症为不适合手术治疗的转移性甲状腺髓样癌。 抗CTLA-4或抗CTLA-4受体的单克隆抗体：前者是直接对CTLA-4的单抗，如Ipilimumab、Tremelimumab，其主要用于恶性黑色素瘤的治疗，并

13、能改善晚期病例生存率，但它用于甲状腺癌治疗的报告较少。由于癌基因的突变，PTC与恶性黑色素瘤有相似之处，如BRAF及Ras突变，因此，本品亦可用于PTC（乳头状甲状腺癌）的治疗,甲状腺癌,抑制程序性死亡-1(PD-1)及其受体的单克隆抗体：前者如BMS-936558，后者如BMS-936559。一项纳入207例多种晚期癌症患者的I期临床研究发现使用BMS-936559 0.310mg/kg，6例患者疾病稳定达24周。 上述抗CTLA-4或抗CTLA-4受体的单克隆抗体及抑制PD-1及其受体的单克隆抗体又称免疫关节阻断剂。它与多靶点阻滞的TKI(小分子蛋白酪氨酸激酶抑制剂)不同点为单靶点抑制，其

14、作用更具特异性,甲状腺癌,CD73抑制剂,-亚甲基二磷酸腺苷：已经成功应用于PTC肿瘤模型，能缩小肿瘤体积。 抗CD73单克隆抗体(TY-23)：不仅仅抑制CD73酶活性，还能抑制肿瘤细胞的黏附，从而抑制肿瘤的侵袭。 但总的来说分子靶向治疗药物的长期有效性、安全性还待临床研究进一步证实,甲状腺未分化癌(ATC,单克隆抗体对ATC亦显示一定作用。 西妥昔单抗(cetuximab)是一种抗EGFR的嵌合单克隆抗体，能有效阻断配体EGF、TGFOt与EGFR的结合，发挥抗肿瘤作用。 贝伐单抗(bevacizumab)是一种重组人源化、人鼠嵌合抗VEGF的单克隆抗体。 西妥昔单抗、第3代半合成的新型长

15、春碱类抗癌药依立替康(irinotecan，CPT一11)及两药联用在ATC异体动物模型体内肿瘤抑制率分别为77、79、93，较临床常用的顺铂及阿霉素更有效，毒性低，应用前景较好。 可抑制肿瘤细胞生长及血管生成，且西妥昔单抗单药优于贝伐单抗单药，两药联合疗效优于阿霉素,自身免疫性甲状腺疾病,抗CD52单抗(阿伦单抗,Alemtuzumab)_,抗ICAM-1单抗,Graves病 小鼠实验研究,抗人树突状细胞（DC）单抗,小鼠自身免疫性甲状腺炎,甲状腺相关性眼病,抗细胞因子制剂：有研究证实肿瘤坏死因子 (TNF-)在眼病的炎症出现和维持中起重要作用。 目前已有少数几项以TNF-为靶向的抗细胞因子制剂用于治疗GO的报道。如依那西普单抗、英夫利昔单抗、阿达木单抗 抗CD20单克隆抗体：利妥昔单抗 单独予利妥昔单抗治疗，GD患者外周血及眼眶组织中的B细胞减少，且在血清低水平的促甲状腺激素受体抗体(TRAb)GD患者体内能诱导长期缓解，但利妥昔单抗对TRAb水平没影响，可能对TRAb水平较高的GD患者无效,甲状腺相关性眼病,人类单克隆抗体(Monoclonal antibody，MAb)： 对研究自身免疫反应很有价值。到目前为止，只产生一种人类MAb，即可供使用的5C9抗体，其可与TsHR