接骨木抗骨质疏松活性成分的深入研究

1、接骨木抗骨质疏松活性成分的深入研究接骨木为忍冬科 (Caprifoliaceae)接骨木属 (Sambucus)植物接骨木(Sambucus williamsiiHance)的茎枝。作为常用中药 , 具有接骨续筋、活血止痛、祛风利湿的作用 , 主要用于治疗骨折、跌打损伤、风湿性关节炎、痛风、大骨节病等。本论文采用去卵巢小鼠模型, 对接骨木 60%乙醇提取物的浓缩水溶液进行大孔树脂柱色谱层析后得到的亚馏分进行活性评价, 发现 50%乙醇洗脱部位可以显著的抑制股骨和胫骨的骨质流失, 增加骨密度、骨强度 , 改善骨的三维结构形态。体外实验结果也表明50%乙醇洗脱部位在0.1 到 100.0 g/ml

2、 的剂量范围内可以显著的促进类成骨UMR106细胞的增殖和分化活性。此外接骨木 50%乙醇洗脱部位不会引起子宫重量的增加, 因此确定木 50%乙醇洗脱部位为其活性部位。随后建立了该活性部位的特征图谱, 对其中占总峰面积 82.3%的 14 个主要色谱峰进行了指认 , 并用体外类成骨细胞及乳腺癌细胞对这些化合物进行了促进类成骨细胞和乳腺癌细胞增殖的活性评价。结果显示 ,8-0-4 类木脂素、 四氢呋喃类木脂素和酚酸类化合物有显著的促进类成骨细胞增殖的活性 , 苯骈四氢呋喃类木脂素无此活性 , 且 14 个化合物中仅有一个化合物有促进乳腺癌细胞增殖的活性。 为了从活性部位进一步分离获得微量及半微量

3、成分 , 决定加大投料量 , 进行系统分离。结果 , 综合运用硅胶柱色谱、 ODS柱色谱、 SephadexLH20柱色谱、ToyoperarlHW-40 柱色谱以及反相HPLC等色谱分离手段从接骨木活性部位共分离鉴定了 48 个化合物 , 它们分别是 :1*:(7R,8R)-3-methoxy-4,8-epoxy-7,3-oxyneolignan-4,9,l-triol;2*:(7R,8S)-7,8-dihydro-7-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-l-hydroxy-3 -methoxy-8-benzofuranmethanol;3:(7R,8S)-ceplign

4、an,(7R,8S)-肥牛木素 ;4:(7R,8S)-Ficusal,(7R,8S)-榕醛 ;5:8R-EvofolinB;6:3,9-dimethoxy-11-hydroxypropyl-6H-benzofuro-3,2-c-1benzopyran;7:(7S,8R)-dihydrodehydro-diconiferyl alcohol-9-O-D-apiofuranosyl-(1 6)-O- -D-glucopyranoside;8:(7S,8R)-hierochinD;9:(7S,8R)-dihydro-3-hydroxy-8-hydroxy-methyl-7-(4-hydroxy-3-

5、methoxy-phenyl)-l-benzo-furan propanol;10:(7R,8S)-dihydrodehydrodiconiferylalcohol;11:(7R,8S)-dehydrodiconiferyl alcohol,(7R,8S)-去氢二松柏醇 ;12:(7S,8R)-dihydrodehydrodiconiferyl alcohol-9 -O- -glucosdie,(7S,8S)-去氢二松柏醇 -9 - -O- 葡萄糖苷 ;13:(7R,8S)-2,3-dihydro-2-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-7-methoxy-5-( 3-me

6、thoxy-1-(propenyl)-3-benzofuranmethanol;14:(7R,8S)-1-(4-hydroxy-3 -methoxy-phenyl)-2-4-(3-hydroxypropyl)-2-methoxyphenoxy-1,3-propane diol;15:(7R,8R)-1-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-2-4-(3-hydroxypropyl)-2-methoxyphenoxy-1,3-propane diol;16:(7S,8R)-guaia-cylglycerol-O-4 -conifery ether,(7S,8R)-愈创木基丙三醇

7、 - -O-4 - 松柏醇基醚 ;17:(7R,8R)-guaiacylglycerol-O-4 -conifery ether,(7R,8R)-愈创木基丙三醇 - -O-4 - 松柏醇基醚 ;18:(7R,8R)-3-methoxy-8,4-oxyneolignan-3,4,7,9,9-pentol;19:(7S,8R)-guaiacylglycerol- -0-4 -sinapylether,(7S,8R)-愈创木基丙三醇 - -O-4 - 芥基醚 ;20:(1S,2R)-1-(4-hydroxy-3;-methoxyphenyl)-2-4-(3-hydroxypropyl)-2,6-di

8、methoxyphenoxypropane-1,3-diol;21:(7S,8R)-guaiacylglycerol-coniferylaldehyde ether,(7S,8R)-愈创木基丙三醇 - - 松柏醇乙醛基醚 ;22:(7S,8R)-syingylglycerol-O-4 -coniferyl ether;23:(8R,7R,8S)-olivil;24:(8S,7R,8 S)-lariciresinol,(8S,7R,8 S)- 落叶松脂醇 ;25:(8S,7 R,8S)-5 -methoxylariciresinol,(8S,7R,8S)-5 - 甲氧基落叶松脂醇 ;26:(8S

9、,7 R,8S)-5,5 -dimethoxy-lariciresinol,(8S,7R8S)-5,5 二甲氧基 - 落叶松脂醇 ;27:(8S,7S,8R)-ciwujiatone,(8S,7S,8 R)- 刺五加酮 ;28:(7R,8R,7 R,8S)-4,4 ,9,7 -tetrahydroxy-3,3-dimethoxy-7,9 -epoxylignan;29:(7R,8S,7R,8S)-syrigareinol,(7R,8S,7R,8 S)- 丁香脂素 ;30:(7R,8S,7R,8S)-tortosideA,(7R,8S,7R,8S)- 丁香脂素 -4 -O- -D- 葡萄糖苷 ;

10、31:(7R,8S,7R,8S)-medioresinol;32:gmelinol,石梓醇 ;33:(7S,8S,8 R)-Lyoniresinol;34:(7S,8R,8S)-isolariciresinol,(7S,8R,8S)- 异落叶松脂素 ;35:(7S,8S,8 S)-Burselignan;36:(7R,7R,8R)-4 -guaiacylglycerol-EvofolinB;37:(7R,8S,7 R,8S,7S,8R)-4 -guaiacylglycerol-medioresinol-4-O- -D-glucopyranoside;38:(7R,8S,8S,7R,8SS)-2

11、,3-dihydro-2-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-7-methoxy-5-tetrahydro-5-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-4-(hydroxymethyl)-3-furanylmethyl-3-Benzofuranmethanol;39:(7r,8S,7R,8S,8S )-2,3-dihydro-2-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-7-methoxy-5-tetrahydro-4-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)methyl-3-(hydroxylmethyl)-2-furanyl-

12、3-Benzofuranmethanol;40:(7R,8S,7R,8S)-VitrifolA;41:(7R,8S,7R,8S,8S)-Seslignanoccidentaliol A;42:2,4 ,10 -trihydroxy-1H,5H-guaia-6-ene;43:Coniferol,松柏醇 ;44:Ferulicacid,阿魏酸 ;45:Methylcaffeate,咖啡酸甲酯;46:Vanilicacid,香草酸 :47:Umbelliferon,伞形花内酯;48:Tiashicacid,天师酸。 48 个化合物中, 木脂素类化合物41 个, 酚酸类化合物4 个, 香豆素类化合物1 个, 倍半萜类化合物1个 , 脂肪族化合物 1 个。7 个(1 、2、 6、 7、 36、37、 42) 未见报到 , 为新化合物 ,20个 (3-5 、 8、 11、13、17、 18、21、22、25-28 、32、 35、38-41) 为从接骨木属首次分离得到。对具有类成骨细胞增殖活性而无促进乳腺癌细胞增殖作用的一个木脂素类化合物(7R,8R)-4,7,9,9-tetrahydroxy-3,3-dimethoxy-8-O-4 -neolignan及一个酚酸类化合物香草酸进行了作用机制初步探讨, 发现这两个化合物可以调控OPG/RANKL/RANK系统 , 通过抑制破骨细胞的发生对骨