清华大学 有机化学及实验 实验指导 实验五、从番茄酱中提取番茄红素和β胡萝卜素

1、实验五：从番茄酱中提取番茄红素和胡萝卜素一、实 验 目 的1. 学习从天然产物中提取有机化合物的方法。2. 学习用薄层层析法检验有机化合物的基本原理，点样，展开和计算Rf值的方法。二、提 取 方 法1. 浸取法：选用合适的溶剂，根据相似相溶原理，直接把溶剂加到固体样品上加热回流提取，本次试验就用的是此法。平时熬中药也是使用的该方法。用水煮中药就是把中药的有效成分提取出来。2. 水蒸汽蒸馏法：天然动植物中含有一些较易挥发的成分。利用水蒸汽可以把这些物质蒸出提取。天然的很多香料的提取（如橙油的提取）就是用的此法。3. 连续提取法：原理同第一种方法，但是使用了一种特殊的装置索氏提取器。使用少量的溶剂

2、能重复用来浸取达到浓缩的目的。如：茶叶种咖啡因的提取就是用此法。三、本实验中的具体方法1. 取一平勺番茄酱于50ml圆底烧瓶中，加5 ml 95 的乙醇，装上冷凝管，回流3-5分钟，冷却。用玻璃漏斗垫棉花过滤。滤液置于带塞子的锥形瓶内，滤渣放回原烧瓶。加入乙醇的目的是破坏细胞壁，为下一步用石油醚的提取创造条件。2. 上部的滤渣及棉花一起放入烧瓶中，加入10 ml石油醚，加热回流10分钟，冷却，过滤。滤液和上面滤液合并，滤渣扔掉。3. 将合并的滤液倒入分液漏斗中，加入5 ml饱和食盐水，萃取，分层。其中有机层进行薄板层析，无机层作对比用。加入饱和食盐水的目的：1）盐析，分层快且清；2）因为NaC

3、l溶液是饱和水溶液，所以溶解有效成分少，即损失小。4. 有机相加入少量Na2SO4干燥很重要。b-胡萝卜素是合成VB6的原料，极性小，Rf值大，在上边。番茄红素极性大，Rf值小，在下边。四、本实验中薄板层析的爬板1. 介绍色谱法包括薄层法，柱色谱，纸色谱气相色谱和液相色谱。今天只作薄层色谱。2. 色谱法是分离和鉴定有机化合物的常用方法。3. 原理：利用混合物个组分在固定相和流动相的溶解度不同，即在两相间分配系数的不同而使各组分分开。4. 特点：时间短；分离效果好；需要样品量少；适用于在较高温度下容易发生化学变化的化合物。5. 事先准备：用铅笔和尺子轻轻画出起始线和终止线；6. 点样：用直径1m

4、m的平头毛细管点取提取物，先在废纸上点一下（快速），然后在起始线线上少量多次地点样（保证一定浓度，一般需要50次以上）。待溶剂挥发以后，轻放到装好展开剂地展开缸内，不要让展开剂溅起或倾斜；7. 展开（爬板）：当展开剂爬到终止线时，停止爬行，取出。因为b-胡萝卜素（黄点）易挥发，所以要尽快画出黄点的位置；8. Rf值的计算：分离效果好时Rf应为0.15 0.75之间。9. 意义：定性鉴定，监测化学反应等等。10. 点样：再薄板一端10mm（下）及另一端5mm（上）处用铅笔轻轻画一道痕迹，用直径小于1mm的毛细管（平口）点样，点样时要做到少量多次，保证样品点小而又有一定的浓度，一块板上可以点两个点

5、。 11. 展开剂的选择：根据样品的极性而定，极性大的化合物可选用极性较大的展开剂。为达到较好的分离效果，可用混合溶剂。做多次展开后可确定一合适的配比。展开时，溶剂前沿离板顶5mm停止。12. 显示方法：A)有色化合物可直接观察；B)无色的，用显色剂显色，如碘熏法；紫外光显色，用硅胶GF254，有样品点的位置再紫外灯光照射下发暗。13. Rf值计算公式：Rf = 样品中某组份移动离开原点的距离 / 展开剂前沿距离原点中心的距离五、注 意 事 项 本次实验使用95乙醇和石油醚提取。两种混合后用NaCl水溶液洗涤。乙醇主要进入水相，建议水相不要弃去。点样时在一块板上点两点：一为有机相，一为水相。观

6、察比较有何不同。 展开剂的配比控制在石油醚:丙酮=9:1。 同时可以做一个比较，采用12:1。在混合展开剂中丙酮的极性大于石油醚，因此如果丙酮含量增大，极性增大，使得分离效果很差。如果增加石油醚的含量，使展开剂的极性变小，分离效果较好。 观察：如果红点紧追黄点，且Rf0.75，则要增加石油醚的用量如达到12:1。 番茄红素为红色，b-胡萝卜素为黄色，展开后的薄板放置一段时间后，样品颜色褪去。因为b-胡萝卜素极易氧化，故在提取和展开过程中，注意不要敞开口，要用瓶盖盖住。 番茄红素的双键比b-胡萝卜素的双键多，因此番茄红素的极性大，在爬板时爬地慢，在下面，b-胡萝卜素的极性小，爬地快，且易氧化。 展开缸用后不要用水洗！ 薄板展开后临摹在实验报告上，板用后洗干净放回窗台上地塑料筐内。 在实验报告临摹一块走好的薄板最理想的。 六、所用仪器1 50ml圆底烧瓶 2