动物病原学：寄生虫病实验一

1、实验一 蠕虫学粪便检查法（一）一、内容1. 直接涂片法；2. 饱和盐水漂浮法；3. 沉淀法；4. 绵纶筛兜集卵法；5. 各种蠕虫卵的特征。二、参考资料 蠕虫学粪便检查是蠕虫病生前诊断的重要方法。因为大多数的寄生性蠕虫是寄生在家 畜、家禽的消化道及其相连的器官（如肝脏、胰脏） ，有的寄生在呼吸器官和生殖器官（家 禽），如后圆线虫、前殖吸虫。寄生在这些部位的寄生虫，它们的虫卵、幼虫或节片都随着 宿主的粪便排除体外，因此，通过粪便检查可以获得生前诊断。除蠕虫以外，还有一些原生 动物的寄生虫，如结肠小袋纤毛虫及球虫，它们的包囊或卵囊亦随着宿主的粪便排除体外， 依靠粪便检查也可以建立生前诊断。根据蠕虫学

2、粪便检查的目的可分为：蠕虫虫体检查法： 是从粪便中检查虫体或节片， 如莫尼茨绦虫， 一般以肉眼直接检查； 蠕虫虫卵检查法：是从粪便中检查虫卵，如大多数的吸虫、绦虫和线虫； 蠕虫幼虫检查法：是从粪便中检查幼虫， 如牛、羊的网尾线虫等， 随粪便排出的不是虫 卵而是幼虫。下面主要分述虫卵检查法。1. 蠕虫虫卵检查法（之一） ：（1）直接涂片法：取一片洁净的载玻片，在玻片中央滴加 1-2 滴 50甘油生理盐水，然后用镊子或牙 签挑取少量粪便，与甘油生理盐水混匀，并将粗粪渣推向一边，涂布均匀，作成涂片，涂片 的厚薄以放到书上隐约可见下面的字迹为宜， 加上盖玻片， 置显微镜下检查， 检查时先在低 倍镜下顺

3、序查找， 如发现虫卵， 再换高倍镜仔细观察。 如无甘油生理盐水时可以用常水代替， 加甘油可使标本清晰，易于观察，并可防止涂膜很快变干燥。 但是检查原虫的滋养体， 必须 以生理盐水进行稀释，不应加甘油，否则会影响其运动而妨碍观察。本法操作简单，能检查各种蠕虫卵，但检出率不高，特别是轻度感染时，往往得不到 可靠结果，因此，本法只能为辅助的诊断方法，并且每次检查要重复观察 8-10 片，才能收 到确实的效果。（2）饱和盐水漂浮法： 本法基本原理是采用比重比虫卵大的溶液，使虫卵浮集于液体的表面，形成一层虫卵 液膜，然后蘸取此液膜，进行镜检。方法：先配制饱和盐水溶液，配制时先将水煮开，然后加入食盐搅拌，

4、使之溶解，边 搅拌边加食盐，直加至食盐不再溶解而生成沉淀为止（ 1000毫升沸水中约加食盐 380 克）， 再以双层纱布或棉花过滤至另一干净的容器内，待凉后即可使用。 （溶液凉后如出现食盐结 晶，则说明该溶液是饱和的，合乎要求，其比重为1.18，此溶液应保存于温度不低于13 C的情况下，才能保持较高的比重） 。取粪便 5-10 克，置于 100-200 毫升的烧杯中， 先加入少量饱和盐水，把粪便调匀， 然 后加入约为粪便的 12倍量的饱和盐水， 并搅拌均匀， 用纱布或 40目的铜丝筛过滤于另一干 净的烧杯内，滤液静置 30-40 分钟，此时比饱和盐水比重轻的虫卵， 大多浮于液体表面， 再 用铂

5、耳或直径 0.5-1 厘米的铁丝圈蘸取此液膜， 并抖落在载玻片上， 进行镜检， 或者将此滤 液直接倒入试管内， 补加饱和盐水使试管充满，加上载玻片(盖玻片应与液面完全接触，不 能留有气泡)，静置30-40分钟，取下盖玻片，贴在载玻片上进行镜检，可以收到同样效果。本法检出率高，在实际工作中广泛应用，可以检查大多数的线虫卵和绦虫卵，为了提 高漂浮效果，可用其他饱和溶液代替饱和盐水。如在检查比重较大的后圆线虫时，可先将猪粪便按沉淀法操作，取得沉渣后，在沉渣中加入饱和硫酸镁溶液，进行漂浮，收集虫卵。常 见虫卵及漂浮比重如下表：寄生虫卵比重漂浮液比重种类比重种类1000ml水中加入比重的试剂量(g)猪蛔

6、虫卵1.145钩虫卵1.085 1.090饱和盐水3801.1701.190毛圆线虫卵1.1151.130硫酸锌溶液3301.180猪后圆线虫卵1.20以上氯化钙溶液851.050肝片吸虫卵1.20以上同上4401.250姜片吸虫卵1.20以上硫代硫酸钠溶液17501.371.39华支睾吸虫卵1.20以上饱和硫酸镁9201.26双腔吸虫卵1.20以上饱和硝酸钠10001.20 1.40(3 )沉淀法：采用普通清水处理被检粪便，使虫卵沉淀集中，便于检查。本法适用于检查各种虫卵， 而比重较大的虫卵，如吸虫卵，棘头虫卵等尤宜采用此法。本法根据需要和条件又可分为自然沉淀法和离心沉淀法。自然沉淀法取粪便

7、约5 10克，放在干净的烧杯内，加水搅拌，充分混匀称悬浮液，然后用40目铜丝筛过滤至另一干净量杯中，滤液静止10 15分钟后，将上清液倒掉，再加水沉淀，再静止10 15分钟，倒掉上清液，如此反复多次，直至上清液澄清为止，把上清液倒掉，取 沉渣做成涂片镜检。离心沉淀法取粪便1 2克，放在干净的小烧杯中，约加十倍量的水，充分混匀成悬浮液，再用40目钢丝筛过滤至另一干净的离心管中，放入离心机内，也可以用上法处理过的滤液倒入离心管中，放入离心机内，以 1500转/分的速度离心2 3分钟，此时，因虫卵比重大，经离心 后沉于管底，然后倒去上清液，取沉渣进行镜检。(4)锦纶筛兜集卵法：检查较大的虫卵时，虫卵

8、直径再60微米以上，如片形吸虫、姜片吸虫、同盘科吸虫、日本分体吸虫等的虫卵，可取上述经40目铜丝筛过滤的滤液倒入 260 目的锦纶筛兜中过滤， 反复用水冲洗，直到洗出液体清澈透明为止，而后挑取兜中粪渣做抹片检查，可获得满意的结果。2操作、观察注意点：(1 )在操作中，粪便不能互相感染，已经使用过的工具，必须进行消毒，或另换工具， 才能检查第二个粪样，粪样更不能搞错，特别在大面积普查工作中，一定要做好登好编号， 每次检查都要有详细记录。(2) 粪便要求新鲜，防止暴晒、腐败而失效。(3) 镜检时一定要详细观察，严格区别虫卵与非虫卵。虫卵：都有一定的卵壳结构，且都有一定的形状，如圆形、椭圆形、三角形

9、等，多数 都是两侧对称，内含有卵细胞或一个已发育的幼虫或毛蚴。非虫卵：在粪便中容易与虫卵混淆的杂物有各种植物细胞、花粉颗粒、脂肪球、气泡、 真菌孢子、螨类及其虫卵、纤毛虫等等。但这些物质，由于种类不同，其形状、大小、颜色 也各不相同。如各种植物细胞，有的呈螺旋形，有的呈双层环状物的，也有呈铺石状的，但 都有明显的细胞壁， 与虫卵结构显然不同；各种花粉颗粒，往往都带有一定的颜色，易误认 为蛔虫卵，但花粉颗粒没有卵壳的结构，表面呈蜂窝状或锯齿状，仔细观察，可以区分。还 有脂肪和气泡之类，亦很像虫卵，但脂肪球和气泡往往大小不一，无色，且折光性很强，周 围壁较厚， 而内部是空虚的。 不具有虫卵的一般结

10、构。 总之，粪渣中与虫卵混淆的杂物较多， 但只要掌握虫卵的结构和特征是可以辨认的， 有时某物与虫卵分辨不清， 也可用解剖针轻轻 推动盖玻片下的东西滚动，这样往往可以把虫卵和其他物体区别开来。3. 各种蠕虫的特征：（1）吸虫卵：多呈卵圆形或椭圆形，大小不一，卵壳有数层卵膜组成较坚实；大多数 吸虫卵其一端有一个卵盖（日本血吸虫卵、嗜眼吸虫卵除外） ，卵内含有许多卵黄细胞及一 个胚细胞，还含有一个已成形的毛蚴；颜色多为黄色，黄褐色，有的呈灰白色。（2）绦虫卵：因种类不同，形状差异很大，虫卵多数无色，少数为黄色或黄褐色，在 高倍镜下可见到三对小钩状物。 圆叶目绦虫卵壳脆弱， 无卵盖， 卵壳在虫卵排出时已破裂脱 落，常见的所谓“卵壳”实际上是胚膜， 在带科绦虫胚膜的两层间呈辐射纹， 虫卵圆形或不 正圆形，内含六钩蚴； 裸头科绦虫卵呈圆形， 方圆形或三角形， 内有一个含六钩蚴的梨形器； 假叶目绦虫卵椭圆形，卵壳颇厚，一端常有卵盖，胚膜被有许多纤毛，内含一个钩球蚴。（3）线虫卵：一般呈椭圆形，大小不一，无色透明，有的呈灰白色，或褐色或黄褐色， 多数虫卵两侧对称， 卵可多半由最外层的蛋白质膜， 中间几丁质膜和内层的卵黄膜组成， 有 些线虫