罗氏中文说明书：环孢霉素检测试剂盒（电化学发光法）说明书

1、Cyclosporine环孢霉素检测试剂盒（电化学发光法）说明书_05889014190 8 / 8【产品名称】通用名称：环孢霉素检测试剂盒（电化学发光法）英文名称：Cyclosporine【包装规格】100测试/盒【预期用途】主要用途主要用于定量测定人全血中环孢霉素的含量。本检测有助于接受环孢霉素治疗的心、肝、肾、肺和骨髓移植病人的管理。电化学发光免疫测定试剂“ECLIA”，适用于罗氏Elecsys和cobas e免疫测定分析仪。临床应用环孢霉素是一种真菌来源的环状多肽，是一种潜在的免疫抑制剂。二十世纪70年代末期环孢霉素首次用于肾移植病人的治疗，这是移植药物研究的一项重要进步，明显增加了心

2、、肾、肝、胰腺、肺或骨髓移植病人的生存率。1、2、3环孢霉素是第一个可特异性且可逆性抑制淋巴细胞的激活和增殖的药物。它是钙调磷酸酶类抑制剂的雏形。4环孢霉素产生免疫抑制效应的原理在于它可通过抑制T细胞的激活和增殖。细胞内环孢霉素可结合亲环蛋白A和B，这些复合物可抑制钙调磷酸酶的活性。3、5、6抑制钙调磷酸酶可限制激活的T细胞（NFAT）的核因子的去磷酸化和核转位，由此调节包括IL-2、IL-4、TNF-和-干扰素在内的多种细胞因子的转录，进一步限制淋巴细胞的激活和增殖。7、8、9、10、11、12环孢霉素具有高度的亲脂性，并从胃肠道吸收不完全且变异性大。血浆内约90%的环孢霉素与蛋白相结合。1

3、3环孢霉素的生物利用度和代谢主要受细胞色素P450药物代谢同工酶CYP3A4和CYP3A5以及流出泵P-糖蛋白的影响，在表达和功能方面在同一个体以及不同个体之间都变现出明显的差异。14、15、16环孢霉素在同一病人和不同病人间都表现出很大的变异性，无论剂量高低都可能出现严重不良反应。环孢霉素浓度不足可能导致对抑制器官的排异反应。浓度过高又可导致严重不良反应。环孢霉素的主要不良反应为肾毒性，可表现为可逆性的记性损伤，也可表现为不可逆的慢性损伤。3、17环孢霉素还可导致肾功能不全、颤抖、多毛症、高血压病和牙龈增生。13为了让每名病人的体内药物浓度都维持在狭窄的治疗窗范围内，治疗药物监测的应用和浓度

4、控制下给药作为标准临床实践的一部分已在临床上应用多年，它也是病人治疗的主要手段。18、19、20如果有检测手段能够替代总药物暴露（时间浓度曲线面积AUC 0-12），就能实现最佳监测。采用给药前的谷浓度（C0）和给药2小时后的药物浓度（C2）监测环孢霉素还在探讨之中，还需要进行多中心试验证明C2监测的临床有效性。18、21【检验原理】手工沉淀：采用Elecsys环孢霉素检测前，采用Elecsys ISD预处理试剂对标本、定标液和质控品进行预处理。该试剂可使细胞溶解，提取出环孢霉素，并使血中大部分蛋白沉淀。预处理样本经过离心，抽取含有环孢霉素的上清液采用ELecsys环孢霉素检测进行测定。竞争法

5、原理，总检测时间：18分钟l 第一次孵育：环孢霉素特异性生物素化抗体和钌标记的环孢霉素衍生物与20L预处理样本一起孵育。随样本中分析物浓度的不同，免疫复合物的形成过程中，标记的抗体空白结合位点一部分被样本分析物占据，一部分与钌标记的半抗原占据。l 第二次孵育：添加包被链霉亲和素的磁珠微粒后，该复合物通过生物素和链霉素之间的反应结合到微粒上。l 将反应液吸入测量池中，通过电磁作用将磁珠吸附在电极表面。未与磁珠结合的物质通过ProCell/ProCell M被去除。给电极加以一定的电压，使复合体化学发光，并通过光电倍增器测量发光强度。l 仪器自动通过2点校正的定标曲线计算得到检测结果。a) Tri

6、s(2,2-bipyridyl)ruthenium(II)-complex (Ru(bpy)三联吡啶钌【主要组成成份】试剂工作溶液试剂盒被标记为CSA。M包被链霉亲和素的磁珠微粒（透明瓶盖），1瓶，6.5ml；包被链霉亲和素的磁珠微粒，0.72mg/ml；防腐剂。R1 生物素标记的抗环孢霉素抗体（灰盖），1瓶，9mL；生物素标记的抗环孢霉素单克隆抗体（小鼠）25g/L；磷酸缓冲液50 mmol/L，pH6.0；防腐剂。R2 钌复合物标记的环孢霉素（黑盖），1瓶，9mL；钌复合物标记的环孢霉素复合物5g/L；磷酸缓冲液50 mmol/L，PH 6.0；防腐剂。提供的物品参阅“试剂工作溶液”章节。

7、需要的物品（未提供）l 实验室基础设备l 精密度吸管（处理PT ISD试剂时仅使用正压式微量分注器）l 微型离心管（2.0 ml容量）l 微型离心机（至少10 000g）l 旋涡混合器l 滚轴混合器l REF05889073190，ISD样本预处理，1 x 30 mll REF05889022190，环孢霉素定标液组，3 x 1 mLl REF05889081190，PreciControl ISD，PreciControl ISD 1、2和3，每瓶2 x 3 mLl REF11732277122，Diluent Universal，216ml样本稀释液，或者REF03183971122，Di

8、luent Universal，236ml样本稀释液l REF11776576322，CalSet小瓶，带咬封盖的空瓶，2 x 56l Elecsys 2010、MODULAR ANALYTICS E170或cobas e分析仪Elecsys 2010和cobas e 411分析仪所需材料：l REF11662988122，ProCell，6380 mL，系统缓冲液l REF11662970122，CleanCell，6380mL，测量池洗液 l REF11930346122，Elecsys SysWash，1500mL，附加洗液l REF11933159001，SysClean适配器l RE

9、F11706802001，Elecsys 2010反应杯，6060反应管l REF11706799001，Elecsys 2010吸头，30120移液管吸头MODULAR ANALYTICS E170、cobas e 601分析仪和cobas e 602分析仪所需材料：l REF04880340190，ProCell M，22L系统缓冲液l REF04880293190，CleanCell M，22L测量池洗液l REF03023141001，PC/CC杯，12个用于在检测前预热Procell M及Cleancell Ml REF03005712190，ProbeWash M，1270mL 清

10、洗液，用于在检测完毕后或更换试剂时清洗试剂针l REF03004899190，PreClean M，5600mL探测清洗液l REF12102137001，反应杯/吸头组合装84反应杯/吸头组合装48盒，废物袋 l REF03023150001，WasteLiner，废物袋 l REF03027651001，系统清洁适配器M所有分析仪需要：l 11298500316，Elecsys SysClean，5100mL系统清洗液【储存条件及有效期】储存在2-8，效期为10个月。请垂直摆放Elecsys试剂盒（M、R1、R2），确保使用前仪器通过自动搅拌能够完全混匀磁珠微粒。稳定性：未开封试剂，28有

11、效期内均可使用开封试剂，2884天放置分析仪上56天【适用仪器】罗氏全自动电化学发光免疫分析系统：Elecsys 2010MODULAR ANALYTICS E170cobas e 411cobas e 601cobas e 602【样本要求】样本的采集和准备仅以下罗列的样本类型通过检测要求。含K2和K3-EDTA抗凝的全血适用。样本浓度范围从谷浓度（C0）至峰浓度（C2）均适用。测试前采用EDTA管收集的标本可在15-25条件下储存不超过5天或在28条件下冷藏7天。如果测试需要耽搁7天以上，可在-20以下冰冻储存，最多6个月。为了保证结果的一致性，融解后标本必须完全混匀。选择合适的试管进行不

12、同类型样本的采集，不是所有的试管均可用于检测。不同厂商的样本采集系统可能含有不同的物质，某些情况下会影响检测结果。如果使用原始管进行检测（样本前处理系统）时，应遵循生产商所提供的指导。用手、倒换器或摇轴完全混匀融化的标本。目测标本。如果观察到分层，继续混合标本，直到标本混匀。请勿使用热灭活标本。请勿使用添加叠氮化合物的样本和质控品。预处理前，样本、定标液和质控品须室温平衡（20-25）。应注意处理病人标本要避免交叉污染。建议使用一次性吸管或吸头。在室温条件下，预处理后的样本质控品和定标液可在密闭的试管中储存不超过4小时。使用由于蒸发因素的影响，密闭小管开封并加载到分析仪上后，预处理后的样本在分

13、析仪上的检测必须30分钟内完成。避免在上机和检测期间延误操作，确保预处理后的样本30分钟的稳定性。再运行需要重复执行手工预处理程序。【检验方法】手工预处理样本根据下面列出的步骤预处理定标液、质控品和/或标本。技术注意事项是仪器说明书的重要部分，操作前必须完整阅读。按照步骤1-7预处理定标液、质控品和/或标本。步骤技术注意事项1、保证所有试剂、定标液、质控品和样本都经过室温平衡（18-25）。使用前动作轻柔地混匀所有定标液、质控品和样本。请勿在振荡器上震荡。可采用手工或在倒换器或摇轴上混合液体。定标液和质控品是全血红细胞溶解液，外观可能与全血样本存在些微不同。2、为每个要预处理的定标液、质控品和

14、/或标本标记一个微型离心管无3、采用一个精密度吸管，分别将300L定标液、质控品和/或标本转送到适合的标记号的微型离心管中。每份定标液、质控品和/或标本都采用新的吸头。4、采用精密度吸头，将300L ISD样本预处理试剂加入每个微型离心管中，并立即盖上盖子。注意：ISD样本预处理试剂非常容易挥发。不用时请密闭储存，避免挥发。5、每个微型离心管至少震荡10秒。如果该步骤操作有误，可能使上清液呈红色。请见第7步，技术注意事项。震荡后样本和试剂混合物应完全混匀。需要进行目测。6、在微型离心器中让样本至少离心4分钟（10 000g）离心后的样本颗粒物和上清液界限清晰。上清液不能呈现出云雾状或红色。如果

15、上清液为红色，应丢弃掉并用新提取的样本替代它。7、将每份上清液直接转送到合适的小管中，并立即盖紧瓶盖。样本即可用于检测。室温条件下，预处理后的样本可在密封试管中储存不超过4小时。为了避免挥发效应，预处理后的样本应在开启密封试管且上机后30分钟内接受检测。避免在加载和检测过程中搁置样本，保证预处理后的样本在30分钟内处理完毕。可通过批处理环孢霉素样本保证这一点： 通过每个定标后的测量池同时加载的环孢霉素样本不超过35个。检测要优化检测性能，请遵照本说明书中有关分析仪的相关指导。并参照各分析仪操作手册。试剂使用前分析仪自动搅拌磁珠微粒，使其处于悬浮状态。试剂相关信息可通过条形码自动读取。在特殊情况

16、下，分析仪无法自动读取条码信息时，请输入条码标签上的15位数字序列。MODULAR ANALYTICS E170、cobas e 601和cobas e 602分析仪：需要PreClean M溶液。将冷藏试剂室温平衡至20C左右，放置分析仪的试剂盘（20C）内。避免泡沫产生。分析仪能自动调节试剂温度和开、关各试剂盒瓶盖。定标溯源性：该检测方法已按照精确测量的人血中环孢霉素（USP参考材料）浓度的标准进行标准化。每套Elecsys试剂的条码标签上均含有其批特异的定标信息。使用相应的CalSet可调整预设置的定标曲线。环孢霉素定标液必须在定标前进行预处理。定标频率：新批号试剂和新鲜试剂必须进行定标

17、（新试剂盒注册后在分析仪上放置不能超过24小时）。以下情况建议重新进行定标：l 使用同一批号试剂，1月后（28天）l 7天后（同一试剂盒在分析仪上使用）l 根据需要：如失控。l 有关规章要求可增加定标频率。质控可使用PreciControl ISD。PreciControl ISD水平1、2和3必须在测量前进行新鲜制备。其他合适的质控品也适用。各浓度范围的质控至少每24小时内检测一次，每次更换试剂盒或定标后也须进行质控。每个实验室可根据各自的情况设定合适的控制限和质控周期。质控值必须处于规定的控制限内。若失控每个试验室必须采取相应的纠正措施。质控应遵循适用的政府规章和当地指引。计算仪器会自动计

18、算每个样本中的分析物浓度（ng/mL、nmol/L或g/L）。转换因子：ng/mL1.0g/L ng/mL0.832nmol/L稀释进入手工预处理程序之前，高于环孢霉素检测范围的标本可用通用稀释液（Universal）手工稀释。推荐按1:3稀释。稀释的样本的浓度必须 500 ng/mL。手工稀释后的结果应乘以稀释倍数。【参考值（参考范围）】期望值全血中环孢霉素的治疗范围没有固定。临床条件的复杂性、对免疫抑制剂的敏感性和肾毒性的个体差异、同时给予其它免疫抑制剂、移植物种类、抑制后的时间以及可能导致环孢霉素最佳血药浓度不同的其它一系列因素。环孢霉素的个体值并不能作为单个指标用以改变治疗策略。作出治

19、疗调整前必须对每名病人进行充分评估，每个检测用户都应该根据临床实践制定他或她的检测范围。不同的商用体外诊断测试这些参考范围有所不同。必须为每种商用测试制定相应的参考范围。【产品性能指标】特殊的性能指标试剂在各分析仪上的性能试验数据如下。各实验室得出的数据可能会稍有差异。精密度应用Elecsys试剂盒、样本和质控品验证精密度，按CLSI（美国临床和实验室标准协会）的改良协议（EP5A2）执行：每天运行2次复本，共21天（n=84）下面是获得的结果：Elecsys 2010和cobas e 411分析仪可重复性中间精密度样本均值标准差变异系数标准差变异系数ng/mlng/ml%ng/ml%HSP1

20、a)63.32.453.95.809.2HSP21464.5HSP339113.93.523.36.0HSP4954.7HSP5183059.13.21104.9PC ISD1b)65.01.963.04.877.5PC ISD23177.812.513.34.2PC ISD312104.4a）人样本池b）PreciControl ISDMODULAR ANALYTICS E170、cobas e 601和cobas e 602分析仪可重复性中间精密度样本均值标准差变异系数标准差变异系数ng/mlng/ml%ng/ml%HSP

21、164.02.7HSP21464.363.07.295.0HSP34004.8HSP497323.02.440.44.2HSP5182048.22.61055.8PC ISD169.02.824.13.635.3PC ISD23266.452.010.13.1PC ISD312304.4方法学比较a)采用临床样本组采用Elecsys环孢霉素检测（y）和自动化免疫检测（x）得出以下相关性：标本数：339Passing/Bablok22 加权的线性回归y1.01x-15.5 y0.946x-8.95T=0.857 r0.977 样品

22、浓度范围约为30.7-1770 ng/mL。c）采用临床样本组采用Elecsys环孢霉素检测（y）和LC-MS-MS法（x）得出以下相关性：标本数：352Passing/Bablok22 加权的线性回归y1.091x+2.08 y1.092x+1.87=0.900 r0.997 样品浓度范围约为30.7-1912 ng/mL。分析特异性采用Elecsys环孢霉素检测根据CLSI文档EP7-A2指南执行研究。代谢产物添加的代谢产物的最高浓度ng/ml交叉反应性%AM120002AM192000NDAM1c2000NDAM1c92000NDAM4n20002AM920006eND=未能检出如果得到

23、的值低于检测灵敏度，则交叉反应性表示为“未能检出”。限制项干扰以下内源性物质、药物和临床条件对测试性能的影响进行了测试。高达所列浓度的物质的干扰进行了检测，未观察到对结果产生干扰。标准：回收率在18.0 ng/mL（浓度范围 90.0 ng/mL）范围内或初始值20（浓度范围 90.0 ng/mL）之内回复。内源性物质：化合物测试浓度白蛋白 12.0 g/dL胆红素 1026 mol/L或 60 mg/dL生物素5mg/天），必须在末次生物素治疗8小时后采集样本。药物化合物：体外对15种常用药物进行试验未发现会影响检测结果。标准：回收率在初始值20之内回复。此外还检测了27种特殊药物。伊曲康唑

24、（INN国际非专利药品名）存在干扰。请勿使用接受伊曲康唑治疗的病人标本。药物测试浓度阿昔洛韦3.2g/mL两性霉素B5.8g/mL环丙沙星7.4g/mLEDTA K26mg/mLEDTA K36mg/mL红霉素20mg/dL依维莫司60ng/mL氟康唑30g/mL氟胞嘧啶40g/mL更昔洛韦1000g/mL庆大霉素12mg/dL伊曲康唑50g/mL卡那霉素100g/mL甲酮康唑50g/mL利多卡因6mg/dLMPA葡萄糖醛酸1800g/mL麦可酚酸500g/mL呋喃西林6g/mL苯巴比妥钠15mg/dL利福平5mg/dL西罗莫司60ng/mL奇放线菌素100g/mL新诺明200g/mL他克莫司

25、60 ng/mL妥布霉素2mg/dL甲氧苄氨嘧啶40g/mL万古霉素6mg/dL少数病例极高滴度的抗特异性分析物抗体、链霉素抗体和钌抗体会影响检测结果。通过适合的试验设计可最大程度地减少这些效应。作为诊断指标，必须结合患者病史、临床检查和其他临床资料来综合评估检测结果。检测限及范围检测范围30.02000 ng/mL，不低于30 ng/mL的值都将被报告。低于30 ng/mL的值将报告为2000 ng/mL。检测下限空白限（LoB）、检测限（LoD）和定量限（LoQ）空白限20.0 ng/mL检测限30.0 ng/mL定量限50.0 ng/mL，最小相对误差20根据CLSI（临床和实验室标准研

26、究所）EP17-A的要求测定空白限、检测限和定量限。通过检测数个独立系列的不含分析物的样本，得出n60个测试值，这些值的第95百分位值为空白限。空白限低于不含分析物样本浓度的几率为95。检测限由空白限和低浓度样本的标准差确定。检测限与最低可检出的分析物浓度一致（高于空白限值的几率达95）。定量限定义为可准确定量的最低分析物浓度，其最小相对误差20。【注意事项】警告和注意事项仅用于体外诊断。在使用本试剂盒时必需遵循所有试验室试剂操作的注意事项。所有废弃物必需按照当地法规进行处置。专业人员可要求获得安全数据报告。避免试剂和样本（样本、定标液和质控品）产生气泡。【参考文献】1 Kahan, B.D.

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