免疫SOP：乙肝表面抗原作业指导书

1、33文件编号：LABOPMY020第 页，共 页 版本：A/0生效日期：2008-02-01XXXXXX 医院检验科免疫室分析项目作业指导书 Elecsys E 170/E 411乙乙肝表面抗原1. 分析原理采用双抗体夹心法原理，整个过程18分钟完成。 第1步：50l标本、生物素化的抗HBsAg单克隆抗体和钌（Ru）标记的抗HBsAg单克隆抗体混匀，形成夹心复合物。 第2步：加入链霉亲和素包被的微粒，让上述形成的复合物通过生物素与链霉亲和素间的反应结合到微粒上。 第3步：反应混和液吸到测量池中，微粒通过磁铁吸附到电极上，未结合的物质被清洗液洗去，电极加电压后产生化学发光，通过光电倍增管进行测定

2、。Elecsys自动将标本产生的光电信号与从HBsAg定标液得出的Cutoff值相比较。2. 标本要求血清：按标准常规方法采集。血浆：肝素钠、EDTA-K3或枸橼酸钠抗凝。不要使用肝素锂抗凝血浆。标本在28度可稳定5天，-20oC可稳定3个月。标本可冻融6次。有沉淀的标本使用前需离心。加热灭活的标本可使用。标本和质控品禁用叠氮钠防腐。标本、定标液和质控品在测定前应预温到室温。3. 试剂、校准品、质控品和其他所需材料采用罗氏原装配套试剂。试剂：M： 链霉亲和素包被的微粒（透明瓶盖），1瓶，6.5ml。粒子浓度0.72mg/ml，生物素结合能力： 470ng生物素/mg粒子。含防腐剂。R1：生物素

3、化的抗HBsAg单克隆抗体（灰盖），1瓶，10ml，浓度高于0.5mg/l，磷酸缓冲液0.1mol/l，pH7.4含防腐剂。R2：Ru(bpy)32+标记的抗HBsAg单克隆抗体（黑盖），1瓶，10ml。浓度高于0.8mg/l，磷酸缓冲液0.1mol/l，pH 8.0含防腐剂。校准品：Cal 1 阴性定标液（白盖），2瓶，1.3ml/瓶人血清, 含防腐剂Cal 2 阳性定标液（黑盖），2瓶，1.3ml/瓶，HBsAg浓度约为0.5IU/ml,人血清，含防腐剂质控品：Elecsys HBsAg质控品1和2 （PreciControl）货号11876309其他所需材料：Elecsys HBsAg确

4、证试验货号11820648Elecsys通用稀释液货号11732277 Elecsys1010或2010分析仪 Elecsys 系统缓冲液（ProCell）货号11662988 Elecsys测量池清洗液（CleanCell）货号11662970 Elecsys 添加剂液（SysWash）货号11930346 Elecsys 系统清洗液（SysClean）货号112985004. 仪器和校准使用仪器：瑞士罗氏诊断公司生产Elecsys 2010/E 170/E 411全自动电化学发光免疫自动分析仪仪器校准：每批HBsAg试剂盒必须用新鲜试剂和HBsAg Cal 1,Cal 2定标一次。另外，以

5、下情况需要再次定标：Elecsys2010： 一个月（同一批号试剂） 7天（放置仪器上的同一试剂盒）各种分析仪均适用的情况：根据要求进行标定：如质控结果超出范围时；根据规定进行多次标定。定标液范围：(电化学发光信号计数) 阴性（Cal 1） 600-1200；阳性（Cal 2） 3000-80005. 操作步骤（以E 170为例）5.1 校准操作步骤：在编缉各项目的参数时，已经在ApplicationCalib菜单中定义好了定标类型和几点定标。因此在对各项目进行定标时，只需在定标菜单Calibration中进行即可。3.2进入CalibrationStatus菜单，用鼠标选择需定标的项目，再根

6、据需要点单点定标（BLANK键）或两点定标（TWO POINT键）、跨距定标（SPAN键）、多点定标（FULL键），再选择其它项目进行相应选择，最后点SAVE，将定标物放入在CalibrationCalibrator中定义好的位置，点Start，再点Start，仪器开始定标。 在CalibrationStatus菜单中看定标结果，点Calibration Result键看定标结果，点Reaction Monitor键看每个定标物的反应曲线。5.2 样本检测程序： 单个样本输入，在主菜单下选择Workplace- Testslection，在Sequence No栏输入标本号，然后选择该标本所需

7、做的单个项目或组合项目，点SAVE键，样本号自动累加。批量常规标本的输入，在主菜单下选择Workplace- Testslection，在Sequence No栏输入起始标本号，然后选择该标本所需做的单个项目或组合项目，点REPEAT，输入该批标本的最后一个标本号，点OK即可。进样分析，将标本按在Workplace菜单中输入的标本号顺序在样本架上排好，放入进样盘内,按START键，输入该批上机标本的起始标本号，再点START键，仪器自动开始推架检测标本。6. 质量控制用Elecsys HBsAg质控品1和2 （PreciControl）。质控品1和质控品2至少每24小时或每一次定标后测定一次。

8、质控间隔期应适用于各实验室的具体要求。检测值应落在确定的范围内，如出现质控值落在范围以外，应采取校正措施。7. 计算方法仪器会自动根据Cal 1和Cal 2的测定值计算Cut-off值。每一个标本的结果以有反应性或无反应性以及Cutoff指数形式（标本信号/ Cutoff）报告。8. 参考范围在欧洲和澳洲随机选择的供血者当中，ElecsysHBsAg重复呈现阳性反应的比例低于0.1%。用该项试验检测364例HBsAg有反应性患者，364例呈现阳性反应（100%）。9. 分析性能10. 干扰因素该方法不受黄疸（胆红素30mg/dl）、溶血（血红蛋白1.4g/dl）、脂血（脂质2800mg/dl）

9、和生物素5mg/天）治疗的病人，至少要等最后一次摄入生物素8小时后才能采血。不受类风湿因子干扰（2000U/ml）。HBsAg浓度高达1.5百万IU/ml也不出现钩状效应。21种常用药物经试验对本测定无干扰。根据目前所知，所有HBsAg测定方法均不能够检测出全部被感染的标本和病人。因此，阴性结果不能绝对排除HBV接触或感染的可能性。有HBV接触史的人，HBsAg阴性可能是因其体内HBsAg含量低于检测下限或抗原对所用抗体无反应性的缘故。接受过小鼠单抗治疗或诊断的病人可能会出现假阳性反应。偶尔会遇到抗链酶亲和素抗体和抗钌抗体的干扰。Elecsys HBsAg测定结果应结合病人病史、临床其他检查结

10、果综合起来进行诊断11. 结果解释标本的Cutoff指数1.0判断为HBsAg无反应性，可判定该标本HBsAg阴性，不需进一步的试验。标本的Cutoff指数1.0判断为HBsAg有反应性。所有呈现有反应性的标本必须重新测定一次，并且每份标本做二次测定。如果二次均为无反应性，标本可确认为HBsAg阴性。如果二次重复测定中有一次为有反应性，则该标本确认为重复有反应性。重复有反应性的标本必须用中和试验(ElecsysHBsAg证实试验)进行测定。如中和试验阳性,标本判定为HBsAg阳性。12. 临床意义HBsAg是乙肝病毒颗粒（HBV）的外壳成份，为一条大小不一的多肽。HBV感染者的血液中除存在完整的HBV病毒颗粒外，还含有较小的非传染性空壳颗粒，其数量极多并含有乙肝表面抗原。HBsAg决定簇a是引起免疫反应的主要成份，普遍存在于HBsAg颗粒上。另外，还有d、y、w、r等主要决定簇。检测人血清或血浆中的HBsAg可以查明HBV感染。HBsAg是首选的免疫学标志物。在临床症状出现前的数天或数周，HBsAg就已存在。急、慢性乙肝患者体内均含有HBsAg，但也有极少数HBV感染