铜绿假单胞菌

1、铜绿假单胞菌铜绿假单胞菌(P. Aeruginosa)原称绿脓杆菌。在自然界分布广泛，为上壤中存在的最常 见的细菌之一。各种水、空气、正常人的皮肤、呼吸道和肠道等都有本菌存在。本菌存在 的重要条件是潮湿的环境。目录名称山来生物学特性实验室检查及其它检查1.1、标本采集2.2、染色镜检3.3、分离培养4.4、生长实验5.5、生化鉴定6.6、分型临床意义抵抗力 耐药性 控制菌1. (1)操作要求2. (2)安全设备 治疗展开名称山来生物学特性实验室检查及其它检查1.2.1、标本采集2、染色镜检3.3、分离培养4.4、生长实验5.5、生化鉴定6.6、分型临床意义 抵抗力 耐药性控制菌1. (1)操作

2、要求2. (2)安全设备 治疗展开名称由来铜绿假单胞菌的学名是Pseudomonas aeruginosa, 1中的 Pseudomonas是山希腊语的pseudo及monds所组成，意即虚假的单元，是 早期微生物学用作描述病菌的。而Aeruginosa则是铜绿(即铜与空气中的 氧气、二氧化碳和水等物质反应产生的物质,又称铜锈。化学式 Cu2 (OH) 2C03 ),正好表达了这种细菌所产生的青色色素。绿脓素 (pyocynin)的生物合成是以群体效应来调控，就像充满囊肿性纤维化病人 肺部铜绿假单胞菌的生物膜一样。生物学特性本菌是一种常见的条件致病菌,属于非发酵革兰氏阴性杆菌。菌体细长 且长短

3、不一,铜绿假单胞菌有时呈球杆状或线状，成对或短链状排列。菌体的一端有单鞭毛，在暗视野 显微镜或相差显微镜下观察可见细菌运动活泼。本菌为专性需氧菌，生长温度范围2542C,最适生长温度为25、30C, 特别是该菌在4C不生长而在42C可以生长的特点可用以鉴别。在普通培养 垒上可以生存并能产生水溶性的色素，如绿脓素(pyocynin)与带荧光的水 溶性荧光素(pyoverdin)等。在血平板上会有透明溶血环。该菌含有0抗原(菌体抗原)以及H抗原(鞭毛抗原)。0抗原包含两 种成分：一种是其外膜蛋口，为保护性抗原；另一种是脂多糖，有特异性。 0抗原可用以分型。实验室检査及其它检査1、标本采集采自不同感

4、染部位的各种标本，包括血液、题、痰标本、脓汁、W 液等。还包括来自医院环境中的各种标本如水、空气、物体表面采样等。2、染色镜检为革兰阴性菌，菌体大小（1.55. O）umX宽（0.5l）um,细长且长短 不一，有时呈球杆状或线状，成对或短链状排列。菌体的一端有单鞭毛，无 芽胞。3、分离培养本菌生长对营养要求不高。对有正常菌群存在的临床标本或采自环境中 的标本应接种选择性培养基如麦康凯琼脂培养基（MAC）；对无正常菌群存在的临床标本如血液、脑脊液、穿刺液等可接种普通或血琼 脂培养基。在普通琼脂培养基上生长1824h可以见到扁平、湿润的菌落， 该菌所产生的带荧光的水溶性青脓素与绿脓素相结合将使得培

5、养基呈亮绿色;在血琼脂平板上生长时可以见到在菌落的周围有溶血环，菌落呈金属光泽； 如果是在液体培养基中则呈浑浊状生长，在液体表面形成菌落，而在培养基 底部细菌的革兰氏染色生长不良。4、生长实验该菌在4C不生长而在42C可以生长。5、生化鉴定该菌氧化酶阳性,能氧化分解葡萄糖和木邂，产酸不产气，但不分解乳 糖和蔗糖。液化明胶、可分解尿素，还原硝酸盐为亚硝酸盐并产生氮气,眄I 口朵阴性，利用枸椽酸盐，精氨酸双水解酶阳性。6、分型(1) 噬菌体分型：所应用的噬菌体现有24株，分型率达90%。(2) 血清学分型：利用0抗原进行分型，目前可分20个血清型。(3) 质粒指纹图分析：此项技术是对同种细菌的不同

6、株进行同源性分 析的一种方法。根据细菌携带质粒的情况进行分析。临床意义本菌为条件致病菌,是医院内感染的主要病原菌之一。患代谢性疾病、 血液病和恶性肿瘤的患者，以及术后或某些治疗后的患者易感染本菌。经常引起术后伤口感染，也可引起褥疮、脓肿、化脓性中耳炎等。本菌 引起的感染病灶可导致血行散播，而发生菌血症和败血症。烧伤后感染了铜 绿色假单胞菌可造成死亡。本菌普遍存在，而在潮湿环境尤甚。铜绿假单胞菌是存在于人类中最常 见的一种假单胞菌，它偶尔可在腋下和肛门生殖道周圉的正常皮肤，但除非 给服抗生素，在粪中其为罕见。该菌通常伴随毒力较强的细菌存在于病灶中, 但偶尔也可单独引起暴露于外部的组织感染。感染通

7、常发生于医院内，洗涤 槽、防腐洛液和贮尿容器中常可发现这种细菌。通过医护人员可将病菌传给 病人，特别在灼伤和新生儿重症监护室。是重要的医院内病原菌。铜绿假单胞菌引起的很多感染发生在衰弱或免疫受损的住院病人，它是 重症监护室感染的第二位最常见的病原菌，是呼吸机相关性肺炎的常见原 因。除医院内获得感染外，HIV感染者很容易在社区获得该菌的感染，而且 一旦被铜绿假单胞菌感染,常可出现晚期HIV感染的体征。铜绿假单胞菌感染可发生于很多解剖部位，包括皮肤、皮下组织、骨、 耳、眼、尿路和心脏瓣膜。感染部位与细菌的入口及病人的易感性有关。烧 伤时，焦痂下区域可成为大量细菌侵犯的场所，进而成为引起菌血症的病灶

8、, 而菌血症常是烧伤的致死性并发症。本菌所致感染的临床表现取决于受累部位。在住院病人中，若口咽部有 绿脓杆菌和其他革兰氏阴性杆菌共同繁殖,则气管插管、气管切开或间歇性 正压呼吸可引起肺部感染。囊性纤维病的后期铜绿假单胞菌性支气管炎常见, 分离得到的菌株有粘液状菌落的形态学特征。烧伤伴有恶性肿瘤的病人常见 在其血液中分离出该菌株，临床表现为革兰氏阴性败血症，有时出现坏疽性 深部脓疱，其特征为直径约lcm的紫黑色病变，中央区溃疡，四周为红斑。 这种病变最常见于腋下和肛门生輕部位。该菌还是尿路感染的常见病原菌，特别常见于有过泌尿科操作的病人， 尿路梗阻的病人或接受广谱抗生素的病人。热带气候条件下常见

9、的外耳炎流脓是耳部铜绿假单胞菌感染最常见的临 床类型。糖尿病患者可发生更为严重的恶性外耳炎，表现为严重耳痛常伴有 单侧颅神经麻痹，需要肠外给药治疗。铜绿假单胞菌眼部感染一般表现为角 膜溃疡，最多见于外伤之后，但有些病人也可因角膜接触镜片或镜片液体污 染而感染。引流的窦道，特别在足部外伤或深部穿刺伤后，可发现该细菌， 引流物常有汗味和果味。这种穿刺伤有很多可引起铜绿假单胞菌性嵯型选 和骨髓炎，为此除抗生素外，还要早期外科扩创。罕见情况下该菌可引起心内膜炎，通常发生于心脏直视手术所装的人工 瓣膜或静脉吸毒者的自然瓣膜上。右侧心内膜炎用内科治疗，但为根治累及 二尖瓣，主动脉瓣或人匸瓣膜的感染,通常必

10、须将感染的瓣膜切除。抵抗力本菌对化学药物的抵抗力比一般革兰氏阴性菌强大。1： 2000的洗必泰, 度米芬和新洁尔灭，1： 5000的消毒净在5分钟内均可将其杀死。0. 5-1%醋 酸也可迅速使其死亡，有些菌株对磺胺，链霉素，氯霉素敬感,但极易产生輕 药性。青霉素对此菌无效,但庆大霉素和名粘菌素B、E,氨基或类、第三和 第四代头抱菌素（头泡哌酮、头抱曲松、头抱匹罗、头泡哇南等，后两种为 三线抗菌药物，应慎用）等抗生素作用较明显,一些半合成的青霉素类抗生 素，比如阿洛西林和哌拉西林对绿脓杆菌也有很强的抗菌作用,其有效率约 为80叙磷霉素对其也有效,但效果不如以上的抗生素。联合用药可减少竝 药菌株的

11、产生。耐药性铜绿假单胞菌的耐药机制异常复杂，总括之，主要与以下因素有关： 细菌产生抗菌活性酶，如B-内醸胺酶、氨基糖昔钝化酶等。 细菌改变抗菌药物作用的靶位，如青霉素结合蛋白（PBPs）、DNA旋转 酶等结构发生改变，从而逃避抗菌药物的抗菌作用。 外膜通透性降低。 生物膜形成。 主动泵出系统；等等。其中主动泵出系统在铜绿假单胞菌多重耐药机制中起着主导作用。实验证明，治疗铜绿假单胞菌的临床感染，以复合青霉素类、三或四代 头泡菌素、三或四代嚨诺酮类等药物为好。但临床抗感染的经验证明，单一 抗生素对大多数G 杆菌尤其是铜绿假单胞菌的治疗是不理想的，因其很快 就会出现耐药株，从而导致治疗失败，故此，N

12、CCLS以及许多权威的专业人 士早已主张联合用药。亚胺培南对此菌的敏感性虽然很高，但山于它易致二重感染，有文献报 导其耐药菌和霉菌进驻发生率可高达3. 2%和8. 0%,同时它乂是诱导酶产生 的良好诱导剂，加上异常价格昂贵，故此，亚胺培南作为治疗混合感染的二 线用药可能会更合理。由于广谱抗生素、激素以及免疫抑制剂的广泛使用，铜绿假单胞菌对多 种抗生素快速产生耐药性在临床抗感染的一线战场己是不争的事实，对 NCCLS推荐的一线用药，如庆大霉素、头抱嚏甲竣胯、哌拉西林等亦早己产 生不同程度的耐药性，这就使得临床的抗感染治疗显得越来越困难。故此， 临床上还应加强消毒防御，控制感染发生，同时，应更为合

13、理地科学地使用 抗生素，并应在药敬试验结果指导下进行抗感染治疗。笫三代头抱菌素中的头砲他唳是经典的抗铜绿假单胞菌药物，但近年耐 药菌株也在迅速增加。而一些对铜绿假单胞菌活性增强或对LI前耐药菌株有 效的第四代头抱菌素（如马斯平）以及第四代嚨诺酮（如拜复乐、天坤）均 已经陆续涌现，且有相当部分品种已用于临床，这对临床抗感染治疗无疑是 个好消息。而今，含儿茶酚取代基的第四代头泡菌素是开发研究的热点，有 被称为“第五代”之势。其中 GR69153. LB10522、Ro9-1428、Ro09-1227 和RU-59863对铜绿假单胞菌的抗菌作用更强且对耐药菌株更有效，体外活 性更为出色，远强于头泡他

14、唳。RU-59863对B-内醸胺酶很稳定，对铜绿假 单胞菌的体外活性也较强（MIC900. 5mg/L）,耐环丙沙星、氨基糖昔类和头砲 他噪的多重耐药性的铜绿假单胞菌株也对其高度敬感，有望成为治疗难治性 铜绿假单胞菌感染的有效药物。碳青霉烯类以其独特的化学结构、极强的抗 菌活性和超广的抗菌谱而备受嘱II, 一直为研究开发热点，其经典代表亚胺 培南己广泛用于临床，成为抗铜绿假单胞菌的重要药物之一。但近年由于使 用此药所产生的耐药菌株不断涌现，且数量大增，故新品种的开发应用也已 变得日益迫切。单环类抗生素的代表氨曲南有抗铜绿假单胞菌活性，但较弱, 临床疗效有限，仅适用于轻、中度感染。近年研究发现，

15、细菌生物膜（biof订m）在铜绿假单胞菌感染中广泛存在, 是导致抗菌治疗失败的重要原因之一。大环内酯类抗生素自身儿乎没有抗铜 绿假单胞菌的活性，但能抑制生物膜的形成，调节免疫，增强呑噬细胞的乔 噬作用，抑制铜绿假单胞菌的一些毒性因子而增强其他抗铜绿假单胞菌药物 的活性，改善疗效。研究发现，红霉素、克拉霉素、阿奇霉素和罗红霉素能 有效抑制生物膜形成，短期联合头抱他唳等抗铜绿假单胞菌药物后就可明显 改善临床疗效（如克拉霉素5d方案），其中以阿奇霉素抑制作用最强。总之，为了提高抗菌治疗效果，应经常监测本地区及本单位的病原菌对 抗菌药物的敬感性及其耐药特性，并根据药敬试验有针对性地合理地选用抗 菌药物

16、，且在临床实践与研究中探讨抗感染的药物组合和开发新的抗感染药 物。与此同时，改善卫生条件，严格执行消毒隔离制度，防止耐药菌的交叉 感染，控制医院感染的发生率，也是一项非常重要的工作。控制菌根据病原微生物生物实验室生物安全管理条例中的有关规定，铜绿 假单胞菌属于三类,BSL-2。相关的防护事宜包括：（D操作要求1. 实验时，未经实验室主任同意，限制或禁止进入实验室。临床实验 室。2. 不许在工作区域饮食、吸烟、清洗隐型眼镜和化妆。食物应存放在 工作区域以外专用橱柜或冰箱中。3. 所有的操作过程应尽量细心，避免产生和溅出气溶胶。4. 对于污染的锐器，必须时刻保持高度的警惕，包括针、注射器、玻 片、

17、加样器等。5. 注射和吸取感染材料时，只能使用针头固定注射器或一次性注射器 （即注射器和针头是一体的）。用过的一次性针头必须弯曲、切断、破碎、重新套上针头套、从一次性注射器上去掉，或在丢弃前进行人工处理，要不 将之小心放入不会被刺穿的、用于收集废弃锐器的容器中。非一次性锐器必 须放置在坚壁容器中，转移至处理区消毒，最好高压杀菌。6. 打碎的器皿不能直接用手处理，必须用其它工具处理，如刷子和簸 箕、夹子或银子。盛污染的针头、锐器、碎玻璃的容器在倒掉前，应按照相 关的规定进行消毒。7. 所有的培养物、储存物及其它规定的废物在释放前，均应使用可行 的消毒方法进行消毒，如高压灭菌。转移到就近实验室消毒

18、的物料应置于耐 用、防漏容器内，密封运出实验室。离开该系统进行消毒的物料，在转移前 应包装，其包装应符合有关的法规。8. 溅出或偶然事件中，明显暴露于传染源时，要立即向实验室主任报 告。进行适当的医学评估、观察、治疗，保留书面记录。9. 按日常程序、在有关传染源的工作结束后、尤其是传染源溅出或洒 出后、或受到其他传染源污染后，实验室设备和工作台面应当使用有效的消 毒剂消毒。污染的设备在送去修理、维护前，要按照相关的规定消毒；在离 开设施转移前，要按照相关的规定打包运输。（2）安全设备1. 正确使用和保养主物安全柜、最好是二级生物安全柜、或其他合适 的人员防护设施、或物理遏制装置。临床实验室。2. 确定可能形成传染性气溶胶或溅出物的实验过程，包括离心、研磨、 匀浆、剧烈震荡或混匀、超声波破裂、开启装有传染源的容器、采集感染标 本等。3. 涉及高浓度或大体积的传染源时，若选用密封转头或带安全罩的离 心机，若转头或安全罩仅在生物安全柜中打开，则可在开放实验室内离心。4. 当必须在生物安全柜外处理标本时，需采取面部保护措施（跟镜、 口罩、面罩、或其他防溅装置），以免传染源或其他有害物溅或洒到面上。5. 在实验室内