荧光免疫技术

1、第十八章 荧光免疫技术chapter 18 fluorescence immunoassay第一部分 教学内容和要求一、目的要求掌握：荧光免疫技术原理、类型及临床应用，常用的荧光物质；熟悉：荧光免疫技术的技术要点。了解：荧光素标物的制备与保存，镧系稀土元素标记物的制备，荧光免疫技术主要类型的技术要点。二、教学内容1荧光标记物的制备：荧光和荧光物质，荧光标记物的制备。2荧光免疫显微技术：基本原理，技术类型，技术要点，方法评价，临床应用。3荧光免疫测定技术：时间分辨荧光免疫测定（基本原理，技术类型，技术要点，方法评价和临床应用）；荧光偏振免疫测定（基本原理，技术类型，技术要点，方法评价和临床应用）

2、。第二部分 测试题一、选择题（一）单项选择题（a型题）1如下有关荧光免疫技术完整正确的提法 a直观性检测抗原和抗体 b直观性检测抗原 c直观性检测抗体d间接检测抗原或抗体 e间接检测抗原和抗体2荧光素易受温度影响，操作时通常选择较佳的温度a. 1015 b.1520 c.2025 d. 2530 e. 30353荧光抗体保存34年，应选择 a小量分装、4 b瓶分装、4 c瓶分装、-10 d瓶分装、-20 e小量分装、-204.下列组成荧光显微镜的结构中，与普通光学显微镜相同的是 a. 光源 b. 聚光器 c. 目镜 d. 物镜 e. 滤光片5. 下列哪项方法不属于荧光免疫显微技术类型 a. 直

3、接法 b. 夹心法 c. 间接法 d. 补体法 e. 双标记法6. 荧光抗体染色标本的观察时间： a。当天 b。第二天 c。第三天 d1周内 e.5天7荧光抗体间接法应标记 a抗原 b抗体 c补体 d抗抗体 e.抗体及补体8荧光显微技术常用于检验血清中各种自身抗体和多种病原体抗体的方法是 a 直接法 b 间接法 c 双抗体夹心法 d补体法 e双标记法9荧光抗体间接法可检测 a抗原 b抗体 c补体 d 蛋白质 e 抗原和抗体10在荧光显微镜检查中直接影响检测结果的是a抗原荧光染色 b抗体荧光染色 c补体荧光染色d特异性荧光染色 e非特异性荧光染色11. 主要用于测定各种激素、蛋白质、酶、药物及病

4、毒抗原的技术 a 荧光偏振免疫测定 b 荧光免疫显微技术 c 时间分辨荧光免疫测定d 底物标记荧光免疫测定 e 流式荧光免疫技术12临床药物浓度检测的首选方法a 时间分辨荧光免疫测定 b荧光偏振免疫测定 c荧光免疫显微技术 d 流式荧光免疫技术 e底物标记荧光免疫测定13最适合于时间分辨荧光免疫测定的荧光物质a异硫氰酸荧光素 b四乙基罗丹明 c四甲基异硫氰酸罗丹明d藻红蛋白 e镧系稀土元素（eu3+）（二）多项选择题（x型题）1对荧光素影响的因素有aph、温度 b溴化物、碘化物等杂质 c荧光素的浓度d细胞固定剂 e化合物2.常用的荧光素是指 a异硫氰酸荧光素 b四乙基罗丹明 c四甲基异硫氰酸罗

5、丹明d藻红蛋白 e。镧系稀土元素（eu3+）3有关荧光显微技术中制作组织标本过程要求 a尽量保持抗原完整性 b切片尽量薄 c用丙酮或乙醇固定 d制好的标本尽快染色e制好的标本无法及时染色、应置-20下低温干燥保存。4荧光免疫显微技术在临床可用于检测 a.血清中自身抗体的检测 b.各种微生物的快速检查和鉴定c.寄生虫感染的诊断 d.白细胞分化抗原的检测 e.hla分型检测5。荧光显微技术在组织学检查中具有如下优点a抗原或抗体的定位 b. 抗原或抗体的定性检查 c.抗原抗体反应的高度特异性 d.荧光标本能持久保存 e.能在荧光显微镜下清晰地显示其形态、直观性强 6。间接荧光免疫法的优点是a敏感性高

6、于直接法 b制备一种荧光抗体即可检测多种抗原或抗体c操作时间较短 d不易出现非特异荧光 e反应参与的因素多二、填空题1. 荧光免疫技术的主要类型包括_ 和_。2荧光物质有_ 和_。3荧光抗体染色技术可分为_ 和_。4. 镧系稀土元素标记物制备的螯合剂有_、_、_和_。5荧光免疫测定根据抗原抗体反应后是否需要分离结合的与游的荧光标记物而分为_和_两种类型。6非均相荧光免疫测定法包括_ 和_。7均相荧光免疫测定法包括_和_。8荧光素标记抗体的方法有_和_。三、名词解释1荧光免疫技术(fluorescence immunoassay)2荧光效率(fluorescent efficiency)3荧光寿

7、命（fluorescence lifetime） 4荧光的淬灭(fluorescent dyked) 5荧光素(fluorescein) 6荧光抗体(fluorescent antibody)7荧光免疫显微技术(immunofluorescence microscopy )8非均相荧光免疫测定法(aneven phas fluoroimmunoassay) 9均相荧光免疫测定法(even phas fluoroimmunoassay) 10时间分辨荧光免疫测定(time resolved fluorescence immunoassay，tr-fia) 11荧光偏振免疫测定(fluoresce

8、nce polarization immunoassay)四、问答题1试述用于标记的荧光素应具备什么条件？2试述荧光免疫显微技术基本原理。3. 试述荧光免疫显微技术的临床应用。4试述荧光偏振免疫测定基本原理。5。试述荧光免疫显微技术基本原理。6时间分辨荧光免疫测定法具有哪些优点？第三部分 参考答案与题解一、选择题（一）单项选择题（a型题）1a 2b 3e 4.d 5.b 6a 7d 8b 9e 10e 11c 12b 13.e（二）多项选择题（x型题）1abcde 2abcd 3abcde 4abcde 5abce 6ab 二、填空题1荧光抗体染色技术、荧光免疫测定技术。2荧光素、其他荧光素物

9、质（镧系稀土元素）。3荧光免疫显微技术、流式荧光免疫技术。4多羧基酸类螯合剂、-二酮体类螯合剂、bcpda和10菲洛林。5均相、非均相。6时间分辨荧光免疫测定、荧光酶免疫测定。7荧光偏振免疫测定、底物标记荧光免疫测定。8搅拌标记法、透析标记法。三、名词解释1. 荧光免疫技术：是将抗原抗体反应的特异性与荧光物质检测的敏感性和直观性结合起来的一种免疫分析技术。2. 荧光效率：是指荧光物质将吸收的光能转变成为荧光的百分率。3. 荧光寿命：指荧光物质被一瞬时光脉冲激发后产生的荧光随时间而衰减到一定程度时所用的时间。4. 荧光的淬灭：指荧光分子在某些理化因素作用下、荧光分子的辐射能力受到激发光较长时间的

10、照射后会减弱的现象。5.荧光素：是能产生荧光并能作为染料使用的有机化合物。6. 荧光抗体：荧光素与特异性抗体以化学共价键的方式结合而成，是免疫荧光技术的关键试剂。7. 荧光免疫显微技术：是以荧光显微镜为检测工具，用荧光素标记特异性抗体或抗抗体，检测固定组织细胞上的抗原或血清中的抗体，常用于定性和定位检查的一门技术。8. 非均相荧光免疫测定法：在抗原抗体反应后，先把ab*ag与ab*分离，然后测定ab*ag或ab*中的标记物的量，从而推算出标本中的ag量，该方法称非均相荧光免疫测定法。9. 均相荧光免疫测定法：在抗原抗体反应后ab*ag中的标记物失去荧光特性，则不需进行ab*ag与ab*的分离，

11、可以直接测定游离的ab*量，从而推算出标本中的ag量，该方法称为均相荧光免疫测定法。10. 时间分辨荧光免疫测定：时间分辨荧光免疫测定是用镧系稀土元素螯合物(如eu3+螯合物)标记抗体或抗原，检测标本中的相应抗原或抗体的荧光免疫测定技术。11. 荧光偏振免疫测定：是利用荧光素经偏振光照射而跃入激发态，在回复至基态后可释出光子，经偏振仪形成偏振荧光，荧光偏振强度与荧光分子的大小成正比的关系而建立的免疫分析技术。四、问答题1用于标记的荧光素应符合以下要求：应具有能与蛋白质分子形成共价键的化学基团，结合后不易解离，而未结合者易清除；荧光效率高，与蛋白质结合后，仍能保持较高的荧光效率；荧光色泽与背景组织的色泽对比鲜明；与蛋白质结合后不影响蛋白质原有的生化与免疫学性质；标记方法简单、安全无毒；与蛋白质的结合物稳定，易于保存。2荧光免疫显微技术是以荧光显微镜为检测工具，用荧光素标记特异性抗体或抗抗体，检测固定组织细胞上的抗原或血清中的抗体，常用于定性和定位检查的一门技术。3临床常应用于：血清中自身抗体的检测; 各种微生物的快速检查和鉴定; 寄生虫感染的诊断; 白细胞分化抗原的检测。4荧光偏振免疫测定基本原理：荧光偏振免疫测定是利用荧光素经偏振光照射而跃入激发态，在回复至基态后可释出光子，经偏振仪形成偏振荧光，荧光偏振强度与荧光分子