半导体激光血管内照射对人体外周血T淋巴细胞亚群及NK细胞的调节作用

1、第 6 卷 第 3 期 1997 年 9 月激光生物学报v o l.n o.63a c ta l a ser b io l o gy s in ica sep. 1997 半导体激光血管内照射对人体外周血 t淋巴细胞亚群及 n k细胞的调节作用徐清史桂英许松林(上海第二医科大学 生物物理教研室, 200025)成柏华王如瑶(上海第二医科大学 神经生物学实验室, 200025)朱雅芬俞庆宪吴之畏(上海东南医院, 200023)摘要本文报道了半导体激光血管内照射对人体外周血 t 淋巴细胞亚群及 n k 细胞的免疫调节作用。 实验结果提示: 在 23 例经 650nm. 5mw 的半导体激光血管内照

2、射治疗一次, 五次和十次的患者 中, cd + 3 细 胞 亚 群 的 百 分 比 与 照 射 前 ( 63166% ) 比 较, 分 别 提 高 到 65186% , 69194% ,75104% 。cd + 4 t 辅助细胞在第十次治疗后也有所增加。除此之外, 半导体激光血管内照射对n k细胞比例及 cd + 4cd + 8 比值具有双向调控作用, 即偏离 (即高于或低于) 正常值的患者经照射后 恢复到正常水平。 这种双向调控作用将对临床治疗更有指导意义。关键词半导体激光血管内照射t 淋巴细胞亚群免疫调节作用the ef f ec ts of d iode l a ser il ib on

3、 per iphera lb lood t l ym phocy te s subpopula t ion s an d nk ce llsx u q in g s h i g u i- y in g c h en g b a i- h u a e t a l(sh an gh a i seco n d m ed ica l u n ive r sity,200025)a bstra c tt h e imm uno - regu la t io n effec t o f d io de la se r il ib o n t lym p ho cy te s subpop u la t i

4、o n s and n kce lls h a s been stud ied.t h e re su lt s show ed th a t th e re w e re an im p ro v ing effec t o n th e cd + 3, cd + 4, cd + 8, and n k ce lls af te r a p e r io d o f d io de la se r (650nm , 5mw , cw ) il ib in 23 p a t ien t s. t h e m ean va lue o f cd + 3% w a s incea sed o n t

5、h e lst , 5th and 10th t im e s il ib sep a ra te ly ( 65186% , 69194% , 75104% ) com p a red w ith th e da ta ( 63166% ) be2 fo re t rea tm en t. t h e m ean va lue o f cd + 4% o n ly inc rea sed o n th e 10th t rea tm en t.in sp ite o f th e cd + 8 w a s a inc rea sed tendency and th e m ean va lu

6、e o f n k % w a s inc rea sed o n th e lst t im e o f il ib (23166 to 26190% ) bu t a m o du la t ing effec t h ad been seen , w h ich m o du la ted th e abno rm a l leve ls o fn k ce ll and cd + 4cd + 8 to th e no rm a l leve ls, so it w o u ld be a m o re u sefu l effec t c lin ica lly.key word s

7、d io de la se ril ibt lym p ho cy te s subpop u la t io nimm uno - m o du la t io n低功率氦氖激光血管内照射 ( il ib ) 在临床上的应用已有大量报道。 对机体免疫状态的影国家自然科学基金资助项目收稿日期: 1997- 04- 27响和促进免疫功能的作用, 作者亦已作了临床治疗观察报道。 但半导体激光对人体免疫功能是否也有同样的影响? 是当今人们关注的问题, 迄今尚未见报道。本文将继续采用单克隆抗体 直 接免疫荧光染色方法, 应用流式细胞仪 ( fcm ) 深入观察分析半导体激光 ( 650nm , 5mw

8、 , cw ) 血管内照射对人体外周血 t 淋巴细胞亚群 (cd + 3, cd + 4, cd + 8 及 n k 等) 的影响。 从而 为进一步开发推广半导体激光在临床上的应用, 提供科学实验的依据。1 材料与方法111 观察对象选自上海东南医院病房内接受 il ib 疗程治疗的患者共 23 例。 正常人对照组: 为体检合格的健康人员共 15 例。112 样品采集il ib 治疗者分别于照射前, 第一次照射后, 第五次照射后, 或第十次照射后立即由静脉采 血抽取肝素抗凝血 1m l 进行分析, 正常组只采血一次。113 半导体激光器及血管内照射半导体激光器: 末端输出功率为 5mw , c

9、w 波长 650nm 。激光器系采用进口半导体激光管 自行研制而成。 每次照射时间为 40 分钟。 每日一次, 连续五次为一疗程。 部分患者共连续进行十次照射。 第一次照射前及每次照射 以后各抽血进行检测分析。cd + 3, cd + 4, cd + 8, n k 细胞的检测采用微量外周血全血法和单克隆抗体直接免疫荧光法。具体步骤如下: 各取肝素抗凝血 100l, 分别加入 cd + 3 - f it c. cd + 4 - f it c. cd + 8 -p e. (由北京医科大学免疫教研室提供) cd 16. cd 56- p e. (美国 bd 公司提供) 单克隆抗体各20l, 孵育 3

10、0 分钟后, 加入 n h 4c 1 溶血剂溶解红细胞, 离心弃上清液, 用 pb s 洗涤后用 300l( 015- 1% ) 甲醛溶液悬浮细胞, 上激光流式细胞仪 fa c scan (bd 公司) 检测, 每个样品收取10000 个细胞, 以 l ist 模式存储, 用 b. d. 公司所提供的专用程序 l y sy s 软件分析数据。2 实验结果211健康人外周血中 cd + 3, cd + 4, cd + 8, n k t 细胞亚群的正常值正常 15 例健康人外周血中 cd + 3 亚群平均为 701404111% 。cd + 4 亚群平均为 441153148% 。cd + 8 亚

11、群平均为 331453109% , cd + 4cd + 8 比值平均为 11460118。n k 细胞平 均为 201576178% 。114il ib 照射前后 cd + 3, cd + 4, cd + 8 细胞亚群的测定212在 接 受il ib 治 疗 的 23 例 患 者 中, cd + 3照 射 前 为 63166% , 经 一 次 照 射 后 上 升 到65186% , 第五次照射后上升到 69174% 。十次照射后上升到 75104% 。提示 cd + 3 经 il ib 治疗后有明显上升的趋势。cd + 4 照射前为 42179% , 一次照射后为 42166% , 无明显变

12、化。 五次照射后略有下降, 为40161% , 而十次照射后提高到 49115% 。cd + 8 照射前为 28184% , 一次和五次照射后, 略有上升, 分别为 31116% 和 29188% 。十次 照射后恢复到照射前水平为 27192% 。第 3 期徐清等: 半导体血管内照射对人体外周血 t 淋巴细胞亚群及 n k 细胞的调节作用1107从 cd + 4cd + 8 的比值来看照射前为 1171, 经一次照射后为 1152, 经五次、十次照射后分别提高至 1196 及 1186。213il ib 治疗前后 n k t 细胞亚群的变化表 1半导体激光 il ib 对人体外周血 t 淋巴细

13、胞亚群及 n k 细胞的影响(x sd )cd + 3%cd + 4%cd + 8%cd + 4cd + 8n k %6316610185(n = 23)6518611195 (n = 17)6919411105 (n = 16)751046127 ( n= 3)701404111421797196(n = 23)421669188 (n = 17)401616189 (n = 16)491156167 (n= 3)441153143281849119(n = 23)311167178 (n = 17)291887144 (n = 16)271927132 (n= 3)331453109117

14、10182( n= 23)11520170 ( n= 17)11960199 ( n= 16)11860163 (n = 3)114601182316612125(n= 23)2619017129 (n= 17)211237199 (n= 16)141802154 (n = 3)201576178照射前第 1 次照射后第 5 次照射后第 10 次照射后正常值 (n = 15) (n = 15) (n = 15) ( n = 15) (n = 15) 实 验 结 果 观 察 到 在 23例治疗患者中, 照射治疗前 为 23166 12125, 经一次照射 治 疗 后 上 升 为 26190, 在

15、 五次、第十次治疗后分别为21123 及 14180, 其均值又有 所下降。(上述实验结果详见 表 1 及图 1)但若将上述患者从各人 免疫功能的原有实际水平进 行分组分析, 则发现原有免疫功能 n k 表达低于正常水 平者, 则有上调的作用。而原n k 表 达 高 于 正 常 水 平 者,则 有 下 调 的 趋 向。 cd+4图 1cd + 8 比值同样亦有类同的调整作用 (参见表 2 及图 2、图 3)。讨论本工作用半导体激光进行血管内照射治疗过程中, 同时测定病员照射前后的 t 淋巴细胞 cd + 3, cd + 4, cd + 8 及 n k 细胞亚群的变化。结果提示: 外周血中 cd

16、 + 3 细胞随着照射次数的 增加与照射前比较, 均有不同程度的提高。cd + 4 细胞同样在第一次及第十次照射后有所提 高。而 cd + 8 细胞在第一次与第五次照射后稍有上升。在第十次恢复到照射前水平。这些变化3表 2半导体激光 il ib 对人体 n k 细胞及 cd 4cd 8 的调整作用(x sd )n k %cd + 4cd + 8低于正常值者高于正常值者低于正常值者高于正常值者131923199(n = 11)151445141 (n= 8)201018117 (n= 8)141802154 (n= 3)3215910119( n= 12)3511318106 ( n= 10)2

17、21058196 (n = 6)110901211(n = 6)112101190 (n = 3)110901232 (n = 6)11330100 (n = 1)2120601542(n = 10)118601836 (n = 7)116801489 (n = 10)211201622 (n = 2)照射前第 1 次照射后第 5 次照射后第 10 次照射后2015761678(n = 15)11460118(n = 15)正常值图 2时相的不完全相同, 很可能与各人的个体差异及病情不同有关。但总的发现这些指标的变化以及 cd + 4cd + 8 比值在进行半导体激光内照射后其总的趋势有所提高

18、。 故本工作中半导体激 光血管内照射的实验结果与 h e- n e 激光血管内照射对 t 淋巴细胞亚群的变化趋势基本相 符1 。 外周血中 t 细胞亚群水平是反映人体免疫系统内环境稳定的一个重要指标, 测定 t 细 胞亚群数量和功能, 对判断机体免疫功能有重要的意义。尤其是 cd + 4cd + 8 比值更能反映人 体免疫功能的正常与否。因此本实验结果提示我们, 半导体激光进行 血管内照射犹如 h e- n e 激光内照射, 同样可产生免疫促进作用。在本实验中还发现在 il ib 照射治疗过程中, 外周血中 n k 表达以及 cd + 4cd + 8 比值变 化趋势具有双向调控的作用, 即高于

19、正常值的群组经照射后能向正常水平下调。而低于正常者 的群组, 亦能向正常水平上调 (参见表 2 及图 2、图 3)。其中第十次的结果由于例数太少故未列 入图中。这种双向的调节作用, 对机体维持其正常免疫功能的恒定具有重要意义。因为 n k 细第 3 期徐清等: 半导体血管内照射对人体外周血 t 淋巴细胞亚群及 n k 细胞的调节作用1109图 3胞代表体内自然杀伤亚群, n k 细胞对 b 细胞的分化和抗原诱导的分化都显示其抑制作用。n k 细胞的活性升高势必导致对 b 细胞的激活、增殖、分化和抗体产生等等的抑制能力增强,使之产生各种淋巴因子, 如 il - 2、ifn 等, 再作用于 t 细胞, 使 t 细胞增殖、活化2 3 4从而提高免疫功能。相反, 如果 n k 细胞亚群水平过高于正常群组, 一方面反映了 t 淋巴细胞亚群中自然杀伤亚群过高, 另一方面反映了由于 n k 细胞过高而导致 t 细胞增殖过快, 这样对于 维持机体免疫状态的稳定性是不利的。 因此, 本工作中观