HPLC色谱柱的种类

1、高效液相色谱柱大致可分为五类 、高效反相液相色谱柱 以 C18 为代表的高效反相液相色谱柱一直被描述为药物发现、 开发、方法验证 (validation) 的心 脏！高效反相液相色谱柱也极其广泛应用在药物代谢及动力学、生命科学、医疗健康、生物分析检测、毒 品和兴奋剂检测、食品安全分析、环境分析、军事、国土安全等领域 ！ 高效反相液相色谱制备柱也是最重 要的分离纯化技术之一 ! 无论是过去，现在和可预见的未来，以球形B型硅胶(5um 或 3um)为材料骨架的高效反相液相色谱 柱在实际应用中永远占有统治地位！常规HPLC方法的开发几乎总是从 C18作为出发点，反相色谱占了80% 以上的应用。 过去

2、数十年来 , 无数努力集注于 : 1) 改善硅胶的品质 , 优化键合化学 ; 2) 开发新颖的材料骨架替代硅胶。 十多年前 , 使用有机硅材料取代无机硅材料作为起始原料生产球形硅胶代表一个划时代的革命 球形硅胶命名为B型球形硅胶。无机A型硅胶重金属含量很高，硅胶表面若干位置严重酸化及螯合效应等 生产的 球形B型硅胶重金属含量很低，在非常大的程度上消除了 A型无机硅胶表 导致高效液相色谱柱产 导致许多碱性化合物回收率低。 面若干位置严重酸化及螯合效应等问题。用B型球形硅胶合成高效液相色谱填料 品质量有质的飞跃 ! 然而，另一方面， 基于客户的大量反馈和我们对几乎所有色谱厂商产品的评估 有获得很好

3、的解决。具体体现在 : 我们相信键合化学问题没 (1)“纯粹”反相机理的键合相例如C18和C8市场上仍然是单功能，三功能和聚合物键合相-鱼目混杂 H (2) 键合相封端问题没有获得很好的解决 获得有限的成功。 一直是困扰色谱领域最大的问题 ! 迄今为止全部的尝试只 (3)极性嵌入式(POlarembedded)键合相 极性嵌入式(POlarembedded)键合相是C18高效反相液相色谱-卫星群中最重要的产品，是C18和C8键 合相最重要的补充。 极性嵌入式(P Olarembedded)键合相起源于Su pelco AB乙Su pelco ABZ的键合方法是用 amino propyl 键合

4、相和长链羧酸缩合反应形成一个C16酰胺。 那么市场上的极性嵌入式(P Olarembedded)键合相群的主要问题是什么 ？极性嵌入式键合相和所 谓的水相C18主要问题是键合相泄漏，键合相不稳定等。两者之间的内在差异是：极性嵌入式键合相键 合相泄漏和键合相不稳定等问题能够获得很好的解决，但使用极性硅烷试剂封端的所谓的水相 C18键合 相键合相泄漏和键合相不稳定等问题是不可逆转的。 在类似C18链长度的硅烷试剂中嵌入极性酰胺或酰酯 使得键合相亲水 ， 在 100%水相条件下稳 定。但按照类似C18的键合化学，键合覆盖率低，键合相不稳定。 Chrom-Matrix InnovationTMPEG键

5、合相是非常极性的产品，但测试结果表明：PEG键合 相非常稳定，在LC-MS测试中没有检测到泄漏。这一成功和我们在胶体与界面科学领域的长期经验帮助我 们成功开发了新型催化条件下新的键合化学。加上超临界流体技术封 端， Chrom-MatrixInnovationTM极性酰胺或酰酯键合相比那么市场上的极性嵌入式 (Polarembedded)键合相群稳定得多。色谱柱产品质量和寿命有质的飞跃！即使这样，LC-MS测试显 示： Chrom-MatrixInnovationTM极性酰胺或酰酯键合相仍然有非常低的泄漏。 (4) 无泄漏低孔和高比表面积 制备型高效反相液相色谱柱 谱(flashchromat

6、ogra py) C 1 8键合相等是小分子化合物分离纯化的终端保证 制备型高效正相液相色谱柱 , 制备型高效离子交换色谱柱和对应的闪光色 是小分子化合物分离纯化最重要的终端保证 ! 但是市场上大多数色谱产品和闪光色谱 (flash chrOmatOgrapy) 键合相有明显的泄漏。尽管泄漏在紫外可 见检测器中是看不见的，LC-MSB号非常明显！最重要的是泄漏的硅烷实实在在洗脱到顾客的终端纯化 产品中 , 而且没有考虑在内。 Chrom-Matrix 公司成功地解决了上述所有问题 Innovation TM所有反相高效液相色谱产品都使用B型球形 硅胶合成，使用最优化个性化合成工艺，使用超临界流

7、体封端，使用LC-MS/MS和表面电荷滴定等多种 独特技术配合多种色谱测试保证产品的品质和批次重现性。其中大部分产品LC-MS/MS测试无泄漏，极性 嵌入式(POlarembedded)键合相非常低的泄漏。 二、高效正相液相色谱柱 正相液相色谱是最早的色谱模式。直到现在 ， 合成后通过硅胶柱做进一步纯化仍然是有机化学家 日常工作的一个重要组成部分。 在理论上 ， 几乎所有的溶于正己烷， 乙酸乙酯或异丙醇的有机化合物都可 以用高效正相液相色谱分析。但在实际应用中，高效正相液相色谱的应用比高效反相色谱少得多。这是因 为正己烷 , 乙酸乙酯没有像水，甲醇或乙腈那样受欢迎。此外 , A 型硅胶正相液相

8、色谱给客户一个惯性 思维 : 高效正相液相色谱的平衡时间很长。 事实上 , 高效正相液相色谱在制备规模的色谱纯化中一直发挥了重要作用。这是因为 (1) 高效正相液相色谱比高效反相色谱柱压低得多。 (2) 高效正相液相色谱用的溶剂例如正己烷 乙酸乙酯很容易通过旋转蒸发除去。 (3) 形。 此外, 不管制备规模或分析测试 , 吡咯等蒸发性溶剂彻底改善了碱性有机化合物在B型球形硅胶，Diol和PEG正相液相色谱柱上的峰 (1) 结构异构体分离分析必须使用正相液相色谱或超临界流体色谱。 (2) 环境中腐殖酸的结构鉴定必须使用甲基化或硅烷化消除小分子聚集 界流体色谱。这种小分子聚集的自然现象一定相当广泛

9、。 然后使用正相液相色谱或超临 PEG正相液相色谱键合相等将让客户重新评估高效正相液相色谱的价值。 三、高效亲水液相色谱柱 高效亲水液相色谱是一个介于正相和反相高效液相色谱之间的运作模式。这个模式最早来自 NH2色谱柱的 糖分析应用。在此之后，逐步在 Diol, 硅胶和亲水性高分子键合相找到了一些有价值的应用。 近年来，高效亲水液相色谱成为比较流行的色谱的运作模式 效亲水液相色谱在LC-MS/MS中的应用。 主要是因为亲水性化合物有良好的保留和高 尽管如此，迄今为止没有权威的论文 评论和教科书揭示了高效亲水液相色谱真正的价值和局限性。 近年来，我们帮助客户采用高效亲水液相色谱的运作模式成功地开

10、发和验证了数以百计的 HPLCn LC-MS/MS 应用 我们总结出 : (1) 高效亲水液相色谱是 LC-MS/MS应用的第一选择。请参阅我们的LC-MS/MS产品手册应用案例。 (2) 除了 Innovation TM TX 多功能色谱柱 , 所有亲水液相色谱仅可用于分析，而不是制备规模的分离。 高效亲水液相色谱流动相 A是乙腈(pH值用少量的甲酸或其他调节), 流动相B是水(pH值用少量的 疏水性化合物首先洗脱 , 然后是亲水化合物。 (3) 甲酸或其他调节 ) 。化合物洗脱秩序类似于正相液相色谱 流动相 A 一般不使用甲醇或丙酮或其他有机溶剂。 (4) 进样体积太大会导致一些峰值扭曲或

11、分裂。柱承载能力通常是非常小的。 (5) Innovation TM TX, HP Amide, Silica 三种高效亲水液相色谱覆盖99 %以上的应用，NH2色谱 柱用于简单糖分析应用。 (6) 除了 Innovation TM TX多功能色谱柱，所有亲水高效液相色谱柱柱效不如正相和反相高效液相色谱。 四、高效强阳离子交换液相色谱柱 离子交换液相色谱是生物分离最常见最有用的一种色谱模式。 另一方面， 小分子分离分析极少使用 高效离子交换液相色谱。这是因为 (1)新颖的反相和多功能键合相例如Innovation TM Polar-EmbeddedStableAmide和TX连续出现， 在 很

12、大的程度上补偿了常规 C18键合相的缺点。C18, C8键合相也有重大进展。高效亲水液相色谱柱也覆 盖了许多分析应用。 (2) 相比之下 , 硅胶基质的高效离子交换键合相近几十年来产品质量没有取得质的突破。硅胶基质的高 效离子交换键合相柱寿命普遍短 , 疏水相互作用明显。 (3) 聚合物基质的高效离子交换键合相在生物分析上面的应用比较广泛 对小分子分离分析难有吸引力。 但其柱效过低，表面积太小， 科学发明往往来自现实世界的挑战 有效成分的分离纯化过程中 在对海洋毒素 , 微生物代谢产物和天然植物 ( 包括中草药 ) 我们深深感到高质量的硅胶基质的高效离子交换键合相是必不可少的 ! 因 此，我们

13、开发了硅胶基质的 SCX, WCX, DEAE和SAX高效离子交换键合相。 五、 InnovationTM 高效多功能液相色谱柱 我们介绍四种高效多功能液相色谱柱 Innovation TMrX毒品分析HPLC柱 Innovation TM TX毒品分析HPLC柱是实际应用中最有价值的一种色谱柱。由于其在毒品分析上出 色的表现，DEA专家称它毒品分析 HPLC柱。Innovation TM TX是一个多功能色谱柱，具有反相，弱阳离 子离子交换 , 亲水等作用 , 能够使用在 100%水相或 100%有机相。由于它的弱阳离子离子交换机 理， Innovation TM TX对碱性化合物的分离效果

14、是所有色谱柱中最好的。它对碱性化合物有完美的峰形。 它的绝对柱效和反相色谱分析柱相同的，甚至优于反相 远胜传统的亲水色谱分析柱。 , 内表面疏水。血浆，血清 , 尿样可以直接进样。蛋白质等生物流 小分子化合物可以扩散到内表面通过反相保留最后洗脱。 限制进入键合相 体通过亲水外表面时没有保留 (Restricted access 相当少。 media) 在学术领域比较欢迎 , 但随着固相萃取产品的发展 在工业领域的应用 , 血浆，血清 , 尿样可以直接进样的限制进入键合 media), 尤其是Innovation TM PEG色谱柱在药物代谢领域具有独特价值。药物代 尤其是全盲条件下的早期药物代

15、谢研究 但我们最后发现 (Restricted access 谢研究 , 追求绝对回收率 ! 一种药物代谢之后 , 打破成许多 (2) Innovation TM DNPH HPLC柱 Innovation TM DNPH HPLC柱主要用于环境中醛和酮 DNPH衍生物分析。在特定的 DNPH衍生物分析 应用中 , 任何其他色谱柱没有它优越的选择性。 (3) Innovation TM PAH HPLC柱 (4)血浆，血清直接进样的Innovation TM PEG色谱柱 限制进入键合相 (Restricted access media) 最早由 Merck 公司发明。一个典型的方法是首先制

16、造 Diol 键合相 , 然后通过酰酯或酰胺反应嵌入疏水链。硅胶外表面的酰酯或酰胺链使用酶切断开。但酶 不能扩散到内表面。由此外表面亲水 小分子化合物。全盲条件下不可能使用固相萃取回收全部小分子代谢产物。最理想的方法是, 血浆，血 清，尿样可以直接进样，每毫升收集液使用14C同位素检测，然后建立一个明确的代谢概况。 同时，使用乙醇取代储 Innovation TM PEG色谱柱是一种多功能色谱柱。它是最好的正相色谱柱 补充 ：HPLC 色谱柱的种类 根据色谱柱的填料不同。目前市面上有以下色谱柱类型： P H2.0-7.5的条件下使用, 1、硅胶柱：硅胶是液相色谱法最早普及使用的色谱谱柱填料。其

17、适用范围广。但是它只能在 且使用温度一定要小于 60度。 2、化学键合固定相的色谱柱 2.1非极性的键合的色谱柱：是应用最广的色谱柱C1到C22。其中C18是最常用的非极性反相色谱柱，它的适用范围广 泛。而且分离效果好。 2.2极性键合的色谱柱：常用的氨基（NH2）柱、氰基（CN）柱、二醇基（DIOL ）、离子柱 2.2.1 氨基柱的选择性首先表现为强的氢键结合能力， 然后是是在酸性介质中为弱阴离了交换作用， 叔胺基和粮分子的羟 基有相互作用，用乙腈：水系统可以分离闪单糖、双糖、多糖等。 2.2.2氰基柱的分离特性与硅胶柱相似，但极性相对较弱，优点是梯度洗脱或流动相组成改变时平衡快。 2.2.3 二醇基键合柱一般是缩甘油氧丙基硅烷键合相的水解产物， 对有机酸和某些高聚物有较好的分离效果， 也可用于某 些蛋白质的水系体积排阻色谱。 3、高分子球色谱柱 4、包覆聚合物的色谱柱。 5、微粒多孔碳填料的色谱柱。 6. 根据所有的担体材料分为三种： （1）硅胶型：机械强度高，易制成小颗粒，理论塔板数高。 （2）聚全物型：在广