含量与有关物质分析方法验证可接受标准

1、含量与有关物质分析方法验 证可接受标准 含量与有关物质分析方法 验证可接受标准 本文介绍了在对含量及有关物质测定所本文介绍了在对含量及有关物质测定所 用的分析方法进行方法学验证时，各项指用的分析方法进行方法学验证时，各项指 标的可接受标准，以利于判断该分析方法标的可接受标准，以利于判断该分析方法 的可行性。的可行性。 内容包括：准确度、线性、精密度、专内容包括：准确度、线性、精密度、专 属性、检测限、定量限、耐用性和系统适属性、检测限、定量限、耐用性和系统适 应性应性 。 含量与有关物质分析方法 验证可接受标准 1.准确度 含量：含量： 该指标主要是通过回收率来反映。验证时该指标主要是通过回收

2、率来反映。验证时 一般要求分别配制浓度为一般要求分别配制浓度为80、100和和 120的供试品溶液各三份，分别测定其含的供试品溶液各三份，分别测定其含 量，将实测值与理论值比较，计算回收率。量，将实测值与理论值比较，计算回收率。 可接受的标准为：各浓度下的平均回收可接受的标准为：各浓度下的平均回收 率均应在率均应在98.0%-102.0%之间，之间，9个回收率数个回收率数 据的相对标准差（据的相对标准差（RSD）应不大于）应不大于2.0%。 含量与有关物质分析方法 验证可接受标准 有关物质：有关物质： 验证时一般要求根据有关物质的定量限与验证时一般要求根据有关物质的定量限与 质量标准中该杂质的

3、限度分别配制三个浓质量标准中该杂质的限度分别配制三个浓 度的供试品溶液各三份（例如某杂质的限度的供试品溶液各三份（例如某杂质的限 度为度为0.2%，则可分别配制该杂质浓度为，则可分别配制该杂质浓度为0.1 、0.2和和0.3的杂质溶液），分别测定的杂质溶液），分别测定 其含量，将实测值与理论值比较，计算回其含量，将实测值与理论值比较，计算回 收率，并计算收率，并计算9个回收率数据的个回收率数据的RSD。 含量与有关物质分析方法 验证可接受标准 准确度准确度 可接受的标准为：各浓度下的平均回可接受的标准为：各浓度下的平均回 收率均应在收率均应在80%-120%之间，如杂质的浓之间，如杂质的浓 度

4、为定量限，则该浓度下的平均回收率可度为定量限，则该浓度下的平均回收率可 放宽至放宽至70%-130%，相对标准差应不大于，相对标准差应不大于 10%。 含量与有关物质分析方法 验证可接受标准 准确度准确度 2.线性 含量：含量： 线性一般通过线性回归方程的形式来线性一般通过线性回归方程的形式来 表示。具体的验证方法为：在表示。具体的验证方法为：在80至至120 的浓度范围内配制的浓度范围内配制6份浓度不同的供试液，份浓度不同的供试液， 分别测定其主峰的面积，计算相应的含量。分别测定其主峰的面积，计算相应的含量。 以含量为横坐标（以含量为横坐标（X），峰面积为纵坐标），峰面积为纵坐标 （Y），进

5、行线性回归分析。），进行线性回归分析。 含量与有关物质分析方法 验证可接受标准 可接受的标准为：回归线的相关系数（可接受的标准为：回归线的相关系数（R） 不得小于不得小于0.998，Y轴截距应在轴截距应在100响应值响应值 的的2以内，响应因子的相对标准差应不大以内，响应因子的相对标准差应不大 于于2.0%。 含量与有关物质分析方法 验证可接受标准 线性线性 有关物质：有关物质： 在定量限至一定的浓度范围内配制在定量限至一定的浓度范围内配制6份份 浓度不同的供试液，分别测定该杂质峰的浓度不同的供试液，分别测定该杂质峰的 面积，计算相应的含量。以含量为横坐标面积，计算相应的含量。以含量为横坐标

6、（X），峰面积为纵坐标（），峰面积为纵坐标（Y），进行线性），进行线性 回归分析。回归分析。 可接受的标准为：相关系数（可接受的标准为：相关系数（R）不得）不得 小于小于0.990，Y轴截距应在轴截距应在100响应值的响应值的 25以内，响应因子的相对标准差应不大以内，响应因子的相对标准差应不大 于于10%。 含量与有关物质分析方法 验证可接受标准 线性线性 3.精密度 含量：含量： 1）重复性）重复性 配制配制6份相同浓度的供试品溶液，由一个分析份相同浓度的供试品溶液，由一个分析 人员在尽可能相同的条件下进行测试，所得人员在尽可能相同的条件下进行测试，所得6份份 供试液含量的相对标准差应不大

7、于供试液含量的相对标准差应不大于2.0%。 2）中间精密度）中间精密度 配制配制6份相同浓度的供试品溶液，分别由两个份相同浓度的供试品溶液，分别由两个 分析人员使用不同的仪器与试剂进行测试，所得分析人员使用不同的仪器与试剂进行测试，所得 12个含量数据的相对标准差应不大于个含量数据的相对标准差应不大于2.0%。 含量与有关物质分析方法 验证可接受标准 有关物质：有关物质： 1）重复性）重复性 配制配制6份杂质浓度（一般为份杂质浓度（一般为0.1%）相同的供）相同的供 试品溶液，由一个分析人员在尽可能相同的条件试品溶液，由一个分析人员在尽可能相同的条件 下进行测试，所得下进行测试，所得6份供试液

8、含量的相对标准差份供试液含量的相对标准差 应不大于应不大于15%。 2）中间精密度）中间精密度 配制配制6份杂质浓度（一般为份杂质浓度（一般为0.1%）相同的供）相同的供 试品溶液，分别由两个分析人员使用不同的仪器试品溶液，分别由两个分析人员使用不同的仪器 与试剂进行测试，所得与试剂进行测试，所得12个含量数据的相对标准个含量数据的相对标准 差应不大于差应不大于20%。 含量与有关物质分析方法 验证可接受标准 精密度精密度 4.专属性 含量：含量： 可接受的标准为：空白对照应无干扰，可接受的标准为：空白对照应无干扰， 主成分与各有关物质应能完全分离，分离主成分与各有关物质应能完全分离，分离 度

9、不得小于度不得小于2.0。以二极管阵列检测器进行。以二极管阵列检测器进行 纯度分析时，主峰的纯度因子应大于纯度分析时，主峰的纯度因子应大于980。 有关物质：有关物质： 可接受的标准为：空白对照应无干扰，可接受的标准为：空白对照应无干扰， 该杂质峰与其它峰应能完全分离，分离度该杂质峰与其它峰应能完全分离，分离度 不得小于不得小于2.0。 含量与有关物质分析方法 验证可接受标准 5.检测限 含量：含量： 主峰与噪音峰信号的强度比应不得小于主峰与噪音峰信号的强度比应不得小于3 。 有关物质：有关物质： 杂质峰与噪音峰信号的强度比应不得小于杂质峰与噪音峰信号的强度比应不得小于3。 含量与有关物质分析

10、方法 验证可接受标准 6.定量限 含量：含量： 主峰与噪音峰信号的强度比应不得小于主峰与噪音峰信号的强度比应不得小于10。 另外，配制另外，配制6份最低定量限浓度的溶液，所测份最低定量限浓度的溶液，所测6份份 溶液主峰的保留时间的相对标准差应不大于溶液主峰的保留时间的相对标准差应不大于2.0%。 有关物质：有关物质： 杂质峰与噪音峰信号的强度比应不得小于杂质峰与噪音峰信号的强度比应不得小于10。 另外，配制另外，配制6份最低定量限浓度的溶液，所测份最低定量限浓度的溶液，所测6份份 溶液杂质峰保留时间的相对标准差应不大于溶液杂质峰保留时间的相对标准差应不大于2.0%， 峰面积的相对标准差应不大于

11、峰面积的相对标准差应不大于5.0%。 含量与有关物质分析方法 验证可接受标准 7.耐用性 含量：含量： 分别考察流动相比例变化分别考察流动相比例变化5、流动、流动 相相pH值变化值变化0.2、柱温变化、柱温变化5、流速、流速 相对值变化相对值变化20时，仪器色谱行为的变时，仪器色谱行为的变 化，每个条件下各测试两次。可接受的标化，每个条件下各测试两次。可接受的标 准为：主峰的拖尾因子不得大于准为：主峰的拖尾因子不得大于2.0，主峰，主峰 与杂质峰必须达到基线分离；各条件下的与杂质峰必须达到基线分离；各条件下的 含量数据（含量数据（n=6）的相对标准差应不大于）的相对标准差应不大于 2.0%。

12、含量与有关物质分析方法 验证可接受标准 有关物质：有关物质： 分别考察流动相比例变化分别考察流动相比例变化5、流动相、流动相pH 值变化值变化0.2、柱温变化、柱温变化5、检测波长变化、检测波长变化 5nm、流速相对值变化、流速相对值变化20以及采用三根不以及采用三根不 同批号的色谱柱进行测定时，仪器色谱行为的变同批号的色谱柱进行测定时，仪器色谱行为的变 化，每个条件下各测试两次。可接受的标准为：化，每个条件下各测试两次。可接受的标准为： 各杂质峰的拖尾因子不得大于各杂质峰的拖尾因子不得大于2.0，杂质峰与其他，杂质峰与其他 成分峰必须达到基线分离；各条件下的杂质含量成分峰必须达到基线分离；各

13、条件下的杂质含量 数据（数据（n=6）的相对标准差应不大于）的相对标准差应不大于2.0%，杂质，杂质 含量的绝对值在含量的绝对值在0.1以内。以内。 含量与有关物质分析方法 验证可接受标准 耐用性耐用性 8.系统适用性 含量：含量： 配制配制6份相同浓度的供试品溶液进行分份相同浓度的供试品溶液进行分 析，主峰峰面积的相对标准差应不大于析，主峰峰面积的相对标准差应不大于 2.0%，主峰保留时间的相对标准差应不大，主峰保留时间的相对标准差应不大 于于1.0%。另外，主峰的拖尾因子不得大于。另外，主峰的拖尾因子不得大于 2.0，主峰与杂质峰必须达到基线分离，主，主峰与杂质峰必须达到基线分离，主 峰的

14、理论塔板数应符合质量标准的规定。峰的理论塔板数应符合质量标准的规定。 含量与有关物质分析方法 验证可接受标准 有关物质：有关物质： 配制配制6份相同浓度的杂质溶液进行分析，份相同浓度的杂质溶液进行分析， 该杂质峰峰面积的相对标准差应不大于该杂质峰峰面积的相对标准差应不大于 2.0%，保留时间的相对标准差应不大于，保留时间的相对标准差应不大于 1.0%。另外，杂质峰的拖尾因子不得大于。另外，杂质峰的拖尾因子不得大于 2.0，理论塔板数应符合质量标准的规定。，理论塔板数应符合质量标准的规定。 含量与有关物质分析方法 验证可接受标准 系统适用性系统适用性 9.溶液稳定性 有关物质：有关物质： 按照分

15、析方法分别配置对照品溶液与供试品按照分析方法分别配置对照品溶液与供试品 溶液，平行测定两次主成分与杂质的含量，然后溶液，平行测定两次主成分与杂质的含量，然后 将上述溶液分别贮存在室温与冰箱冷藏室（将上述溶液分别贮存在室温与冰箱冷藏室（4） 中，在中，在1、2、3、5和和7天时分别平行测定两次主天时分别平行测定两次主 成分与杂质的含量。成分与杂质的含量。 可接受的标准为：主成分的含量变化的绝对可接受的标准为：主成分的含量变化的绝对 值应不大于值应不大于2.0%，杂质含量的绝对值在，杂质含量的绝对值在0.1 以内，并不得出现新的大于报告限度的杂质。以内，并不得出现新的大于报告限度的杂质。 含量与有

16、关物质分析方法 验证可接受标准 化学药品溶出度方法研究 文章来源：审评二部文章来源：审评二部 唐素芳唐素芳 含量与有关物质分析方法 验证可接受标准 化学药品普通口服固体制剂化学药品普通口服固体制剂 溶出度方法验证易忽视的几个问题溶出度方法验证易忽视的几个问题 文章来源：文章来源：审评四部审评八室审评四部审评八室 郑国钢郑国钢 溶出度研究试验主要包括以下内容：溶出度研究试验主要包括以下内容： （1）溶出介质的选择）溶出介质的选择 （2）溶出介质体积的选择）溶出介质体积的选择 （3）溶出方法（转篮法与桨法）的选择）溶出方法（转篮法与桨法）的选择 （4）转速的选择）转速的选择 （5）溶出度测定方法的

17、验证）溶出度测定方法的验证 （6）溶出度均一性试验（批内）溶出度均一性试验（批内） （7）重现性试验（批间）重现性试验（批间） 含量与有关物质分析方法 验证可接受标准 （1）溶出介质的选择 溶出介质通常采用水、溶出介质通常采用水、0.1mol/L盐酸盐酸 溶液、缓冲液（溶液、缓冲液（pH值值38为主）。对在上为主）。对在上 述溶出介质中均不能完全溶解的难溶性药述溶出介质中均不能完全溶解的难溶性药 物，可加入适量的表面活性剂，如十二烷物，可加入适量的表面活性剂，如十二烷 基硫酸钠（基硫酸钠（0.5%以下）等，应有文献依据，以下）等，应有文献依据， 并尽量选用低浓度，必要时应做生物利用并尽量选用低

18、浓度，必要时应做生物利用 度考察。度考察。 含量与有关物质分析方法 验证可接受标准 （2）溶出介质体积的选择 溶出介质的体积需使药物符合漏槽条溶出介质的体积需使药物符合漏槽条 件，大杯法（第一、二法）常用体积为件，大杯法（第一、二法）常用体积为500、 900和和1000ml，小杯法（第三法）常用体，小杯法（第三法）常用体 积为积为100250ml。部分品种为满足在溶出。部分品种为满足在溶出 量测定时药物浓度的需要，可采用低于上量测定时药物浓度的需要，可采用低于上 述限度范围的溶剂。述限度范围的溶剂。 含量与有关物质分析方法 验证可接受标准 漏槽条件即做溶出的最佳条件，是指漏槽条件即做溶出的最

19、佳条件，是指 药物所处释放介质的浓度远小于其饱和浓药物所处释放介质的浓度远小于其饱和浓 度，生理学解释为药物在体内被迅速吸收，度，生理学解释为药物在体内被迅速吸收， 制剂的体外包括释放度等测定需要模仿体制剂的体外包括释放度等测定需要模仿体 内生理条件的，满足药物溶解内生理条件的，满足药物溶解-吸收的过程，吸收的过程， 漏槽条件起到了修正作用，一般释放介质漏槽条件起到了修正作用，一般释放介质 的体积为药物饱和溶液所需介质体积的的体积为药物饱和溶液所需介质体积的3 5倍。倍。 含量与有关物质分析方法 验证可接受标准 溶出介质体积的选择溶出介质体积的选择 （3）转篮法与桨法的选择 一般情况下，片剂多

20、选择桨法，转篮一般情况下，片剂多选择桨法，转篮 法多用于胶囊剂或漂浮的制剂，研究资料法多用于胶囊剂或漂浮的制剂，研究资料 应进行两种方法的对比试验，以确定最佳应进行两种方法的对比试验，以确定最佳 方法。方法。 含量与有关物质分析方法 验证可接受标准 （4）转速的选择 目前，各国药典中收载的溶出度测定方法中目前，各国药典中收载的溶出度测定方法中 的转速，大部分在的转速，大部分在50100转转/分。转篮法以分。转篮法以100 转转/分为主；桨法以分为主；桨法以50转转/分为主。一般认为桨法分为主。一般认为桨法 50转转/分相当于转篮法分相当于转篮法100转转/分。转速的设置与具分。转速的设置与具

21、体品种有关，通常，药物制剂的溶出速度随着转体品种有关，通常，药物制剂的溶出速度随着转 速的增加而增大。转速过快，可能会导致对不同速的增加而增大。转速过快，可能会导致对不同 制剂溶出行为的区分能力差，所以不推荐选择过制剂溶出行为的区分能力差，所以不推荐选择过 高转速。转速的选择应以能区分不同处方和生产高转速。转速的选择应以能区分不同处方和生产 工艺的产品为宜，工艺的产品为宜， 如确实需要选择高转速，应进如确实需要选择高转速，应进 行充分的验证。行充分的验证。 含量与有关物质分析方法 验证可接受标准 （5）溶出度测定方法的验证 方法学验证内容与含量测定基本相同。方法学验证内容与含量测定基本相同。

22、应该注意的是，在方法学验证中，试验所应该注意的是，在方法学验证中，试验所 用的溶媒应为溶出介质，即应考查辅料、用的溶媒应为溶出介质，即应考查辅料、 胶囊壳在溶出介质中的干扰，药物在溶出胶囊壳在溶出介质中的干扰，药物在溶出 介质中的线性、回收率及稳定性等。介质中的线性、回收率及稳定性等。 含量与有关物质分析方法 验证可接受标准 应该注意的问题：应该注意的问题： 1. 对于溶出度，范围规定为限度的对于溶出度，范围规定为限度的20 （回收率高、中、低常设为（回收率高、中、低常设为50、限度、限度 浓度、浓度、100）。）。 2. 测定干扰测定干扰2%以下可忽略不计，以下可忽略不计，25% 可考虑在限

23、度上适当提高，超过可考虑在限度上适当提高，超过5%以上测以上测 定方法不可取，如是空胶囊产生的应进行定方法不可取，如是空胶囊产生的应进行 囊壳的消除试验。如空胶囊干扰大于标示囊壳的消除试验。如空胶囊干扰大于标示 量的量的25%，实验无效，如干扰不大于标示，实验无效，如干扰不大于标示 量的量的2% ,可忽略不计。可忽略不计。 含量与有关物质分析方法 验证可接受标准 溶出度测定方法的验证溶出度测定方法的验证 3.滤膜吸附的验证滤膜吸附的验证 一般认为吸附量在一般认为吸附量在2%以下时可忽略不以下时可忽略不 计，超过计，超过2%时应考虑选用其他滤过方法或时应考虑选用其他滤过方法或 更换适宜的溶出介质

24、。更换适宜的溶出介质。 含量与有关物质分析方法 验证可接受标准 溶出度测定方法的验证溶出度测定方法的验证 （6）取样点和限度的确定 通过溶出度均一性试验（通过溶出度均一性试验（ 考察同一批考察同一批 样品的溶出曲线）和重现性试验（样品的溶出曲线）和重现性试验（ 考察至考察至 少少3批样品的溶出曲线），确定合理的溶出批样品的溶出曲线），确定合理的溶出 度测定取样点和限度。为避免多次取样造度测定取样点和限度。为避免多次取样造 成的误差，测定溶出曲线时取样点不宜过成的误差，测定溶出曲线时取样点不宜过 多，通常为多，通常为56个点，小规格的制剂因采个点，小规格的制剂因采 用用100250 ml溶出介质，所以溶出曲线一溶出介质，所以溶出曲线一 般可选般可选34个时间点。限度应综合考虑溶个时间点。限度应综合考虑溶 出曲线拐点和一般性要求。出曲线拐点和一般性要求。 含量与有关物质分析方法 验证可接受标准 总结及个人观点： 1. 在进行分析方法的验证时，首先还是在进行分析方法的验证时，首先还是 要参考中国药典和指导原则，文章中提到要参考中国药典和指导原则，文章中提到 的试验方法和可接受标准也是专家的一些的试验方法和可接受标准也是专家的一些 经验总结，我们在进行研究时应根据具体经验总结，