性病的实验室检验与质量控制

1、性病的实验室检验与质量控制 人民医院检验科 一、什么是性病 性病 是一组传染性疾病， 通过性接触 而传播的疾病。 我国重点防治的八种性病 n梅毒、梅毒螺旋体 n淋病、淋球菌 n软下疳、杜克雷嗜血杆菌 n性病性淋巴肉芽肿、衣原体 n生殖道沙眼衣原体感染、沙眼衣原体 n尖锐湿疣、乳头瘤病毒 n生殖器疱疹、生殖器疱疹病毒 n艾滋病 、HIV病毒 性病实验室在性病疫情监测中的 任务 疾病准确诊断 * 梅毒 * 淋病 * 沙眼衣原体感染 淋球菌耐药监测 实验室检测 专项性病患病率调查 实验室质量控制 性病实验室在性病防治中的作用 临床服务疫情监测 实验室诊断 效果评价 科学研究 主要常见性病实验室检测介

2、绍 n梅毒 n淋病 n生殖道沙眼衣原体 常用梅毒检测方法 n病原学检测 n血清学检测 病原学检测 n原理：查找梅毒螺旋体 n方法：暗视野显微镜检查、镀银染色法、 直接荧光法、PCR 暗视野显微镜检查 n制片：标本置于载玻片上，加一滴生理 盐水，盖上盖玻片，在暗视野显微镜上 油镜观察。 n观察：由于光线从聚光器的边缘斜射到 涂片上的梅毒螺旋体而发出光亮。 梅毒螺旋体特征 n螺旋整齐 n折光性强 n运动缓慢而有规律，有三种运动方式： 1.围绕其长轴旋转运动 2.伸缩其螺旋间距离移动 3.弯曲扭动如蛇形 病原学检查的临床意义 n可以确诊为梅毒 n及时治疗、预后、尽早切断传染源 n注意：未找到梅毒螺旋

3、体，不能排除患 梅毒的可能性。 梅毒血清学检测 一、非梅毒螺旋体抗原血清学试验 二、梅毒螺旋体抗原血清学试验 非梅毒螺旋体抗原血清学试验 1、原理：检测人体感染梅毒螺旋体产生的 抗类脂抗原的抗体 2、方法： 性病研究实验室试验（VDRL） 不加热血清反应素试验（USR） 快速血浆反应素环状卡片试验（RPR） 甲苯胺红不加热血清试验（TRUST） RPRRPR 定性试验 n在纸卡圆圈中加入50L待检血清，涂满整待检血清，涂满整 个圆圈个圆圈 n使用滴管和专用针头（60滴滴/mL），加），加1滴滴 抗原悬液抗原悬液 n旋转100rpm 8min n立即判断结果 RPRRPR 定量试验 n待检血清用

4、等渗盐水在纸卡圆圈中作6个个 稀释度：原血清，稀释度：原血清，1:2，1:4，1:8， 1:16，1:32 n按定性试验步骤操作，以出现阳性反应 的最高稀释度报告结果 RPRRPR定量试验定量试验 n中等至大的凝块为阳性（圈4和7）有明 确但很小的凝块为弱阳性（圈2和3）颗 粒均匀分布（圈1,5,8-10）或稍粗糙（圈 6）为阴性 非梅毒螺旋体抗原血清试验的优缺点非梅毒螺旋体抗原血清试验的优缺点： 优点： *敏感性特异性好敏感性特异性好 *不需要昂贵设备，简单易行不需要昂贵设备，简单易行 *适用于大量人群的血清筛查适用于大量人群的血清筛查 *有效治疗后血清滴度可下降并阴转，故可作疗效观察、有效

5、治疗后血清滴度可下降并阴转，故可作疗效观察、 判愈、复发。判愈、复发。 *20分钟可获得实验结果。分钟可获得实验结果。 *试剂与方法均已标化，各实验室间结果可比较。试剂与方法均已标化，各实验室间结果可比较。 *试验可被内部质控和外部质控监控进行。试验可被内部质控和外部质控监控进行。 缺点：缺点： *敏感性和特异性低于螺旋体抗原试验，敏感性和特异性低于螺旋体抗原试验，BFP反应和前带反应和前带 现象现象 非梅毒非梅毒 抗原血清试验的敏感性和特异性抗原血清试验的敏感性和特异性 敏感性敏感性特异性特异性 试验试验一期一期二期二期 潜伏潜伏 晚期晚期 VDRL VDRL 78%78% (74-87)

6、(74-87) 100%100%96%96% (88-100)(88-100) 71%71% (34-94)(34-94) 98%98% (96-99) (96-99) USRUSR80%80% (72-88)(72-88) 100%100%95%95% (88-100)(88-100) 73%73%98%98% (93-99)(93-99) RPRRPR86%86% (77-99)(77-99) 100%100%98%98% (95-100)(95-100) 99%99% TRUSTTRUST85%85% (77-86)(77-86) 100%100%98%98% (95-100)(95-1

7、00) 99%99% (98-99)(98-99) 未经治疗的各期梅毒的敏感性未经治疗的各期梅毒的敏感性 非梅毒螺旋体抗原血清试验临床意义非梅毒螺旋体抗原血清试验临床意义 n简单、快速 n硬下疳出现1周-2周可呈阳性 n适用于大量人群的筛查 n疗效观察、复发或再感染判断 非梅毒螺旋体抗原血清试验临床意义非梅毒螺旋体抗原血清试验临床意义 v早期梅毒（一期、二期）经足量规则抗梅毒治 疗后3个月，VDRL试验抗体滴度下降2个稀释 度，6个月下降4个稀释度。 v 一期梅毒1年后转为阴性 v 二期梅毒2年后转为阴性。 v 晚期梅毒 治疗后血清滴度下降缓慢，2年后约 50%病人血清反应仍为阳性。 生物学假

8、阳性生物学假阳性 l滴度常滴度常1:81:8 分为急性（分为急性（6 6个月内消失）个月内消失） 慢性（持续慢性（持续6 6个月以上）个月以上） 生物学假阳性生物学假阳性 l急性反应见于：急性反应见于： 发热性疾病如肺炎、上呼吸道感染、疟疾、心内膜发热性疾病如肺炎、上呼吸道感染、疟疾、心内膜 炎、传染性单核细胞增多症等；炎、传染性单核细胞增多症等； 疫苗接种；疫苗接种； 妊娠。妊娠。 l慢性反应见于慢性反应见于 自身免疫学疾病如自身免疫学疾病如SLESLE； 抗磷脂综合征；抗磷脂综合征； 瘤型麻风；瘤型麻风； 吸毒者；吸毒者； 老年人。老年人。 生物学假阳性生物学假阳性 前带现象前带现象 l发

9、生率发生率22 当抗体滴度高，原倍血清只是弱阳性甚或阴性，如当抗体滴度高，原倍血清只是弱阳性甚或阴性，如 将血清稀释后再做，则见高滴度反应将血清稀释后再做，则见高滴度反应 梅毒螺旋体抗原血清学试验梅毒螺旋体抗原血清学试验 原理：用梅毒螺旋体抗原检测特异性抗梅毒螺旋体抗体 方法： n 梅毒螺旋体颗粒凝集试验 (TPPA) n 梅毒螺旋体血球凝集试验 (TPHA) n 梅毒酶联免疫吸附试验（ELISA） n 荧光螺旋体抗体吸收试验（FTA-ABS） n 梅毒IgM抗体检测（IgM） n 梅毒螺旋体蛋白印迹试验（WB） 梅毒螺旋体抗原血清试验梅毒螺旋体抗原血清试验 nTPPA 梅毒螺旋体抗原血清学试

10、验临床意义梅毒螺旋体抗原血清学试验临床意义 n作为非梅毒螺旋体抗原血清试验作为非梅毒螺旋体抗原血清试验( (如如RPRRPR等等) )初初 筛阳性标本的确证试验。筛阳性标本的确证试验。 n梅毒患者经过抗梅治疗后，梅毒患者经过抗梅治疗后，TPPATPPA等梅毒螺旋等梅毒螺旋 体抗体试验试验仍可阳性，故体抗体试验试验仍可阳性，故TPPATPPA等试验阳等试验阳 性不能作为疗效观察的指标。性不能作为疗效观察的指标。 nTPPATPPA等阳性不能区分既往感染和现症感染，等阳性不能区分既往感染和现症感染， 应结合非梅毒螺旋体抗原血清试验结果进行应结合非梅毒螺旋体抗原血清试验结果进行 诊断。诊断。 梅毒血

11、清学试验结果的临床意义总汇梅毒血清学试验结果的临床意义总汇 TRUST _ _ _ _ 排除梅毒排除梅毒 一期梅毒的早期一期梅毒的早期 + + + + 现症梅毒现症梅毒( (梅毒孕妇所生梅毒孕妇所生 的婴儿除外的婴儿除外) ) + - + - 生物学假阳性生物学假阳性 - + - + 早期梅毒、经治疗后早期梅毒、经治疗后 梅毒实验室检测策略选择梅毒实验室检测策略选择 n根据目的选择检测方法及检测策略。 n可采用任何一类梅毒血清学检测方法作为筛查试验。 方法选择依据 n敏感性、特异性（试剂评估） n操作流程（可及性） n试剂的价格、结果时间（可接收性） 淋淋 病病 常用淋病检测方法常用淋病检测方

12、法 n直接显微镜检查 n分离培养淋球菌 直接显微镜检查直接显微镜检查 n原理：男性淋菌性尿道炎的分 泌物中，多形核白细胞内可找 到革兰染色阴性的双球菌。 直接显微镜检查的临床意义直接显微镜检查的临床意义 n男性淋菌性尿道炎的尿道标本 敏感性及特异性可高达95%99%，具诊断价值。 n宫颈标本、无症状男性尿拭子及取自直肠的涂片时 敏感性仅4070%。 n不推荐直接显微镜检查诊断直肠和咽部淋球菌感染 n不能用于疗后判愈 n多形核细胞外见到形态典型的革兰阴性双球菌，需做培 养进行确证 淋球菌培养淋球菌培养 1原理：淋球菌在适宜的培养基上可生长出特征性的菌落， 根据菌落大小、形态、光泽、边缘、颜色等情

13、况，可以 作为淋球菌的鉴定依据之一。 2、方法特点： n敏感性 81100%。 n 特异性 100% 淋球菌培养淋球菌培养 n培养条件 ： 35 36，含 5%10% CO2，湿润（70%湿度） 的环境。 nCO2环境可由CO2培养箱、CO2产 气袋及烛缸提供。使用烛缸时，应 使用白色、无芳香味的无毒性蜡烛。 在烛缸底部放些浸水棉球以保持一 定的湿度。 n培养时间：2448小时 淋球菌的初步鉴定淋球菌的初步鉴定 初步鉴定淋球菌的依据 n菌落特征 n氧化酶试验 n革兰染色 淋球菌培养的临床意义淋球菌培养的临床意义 n培养法为诊断淋病的金标准. n用于女性感染者、亚临床感染者、以及 来自直肠和咽部

14、的感染的确诊试验。 生殖道沙眼衣原体感染生殖道沙眼衣原体感染 常用生殖道衣原体感染检测方法常用生殖道衣原体感染检测方法 n抗原检测抗原检测 酶联免疫吸附试验（酶联免疫吸附试验（ELISAELISA） 免疫层析快速检测免疫层析快速检测 n核酸检测核酸检测 酶联免疫吸附试验酶联免疫吸附试验 原理：与衣原体特异性单克隆抗体形成抗原抗体复合物， 通过酶联显色反应检测衣原体抗原。 方法特点 n 敏感性：7997 n 特异性: 9799 n试验结果阴性时，不能完全排除沙眼衣原体感染，有可 能是沙眼衣原体数量不足或标本采集不当的缘故 n结果判读客观性强，适宜于大样本沙眼衣原 体感染的检测。 n在沙眼衣原体高

15、流行率的人群临床和健康体 检；低流行率（小于5%）的人群中应用时， 结果解释应慎重。 酶联免疫吸附试验临床意义酶联免疫吸附试验临床意义 抗原快速检测抗原快速检测 原理：利用免疫层析法原理，采用胶体金标记的沙眼衣 原体抗体滤纸条或卡，快速检测标本中的沙眼衣原体抗 原。 方法特点 n简易，方便，快速，尤其适用于基层单位 n标本中需要足够数量的沙眼衣原体抗原，否则有假阴性 结果 抗原快速检测临床意义抗原快速检测临床意义 n该方法主要适用于女性患者宫颈标本的检测，敏 感性较低。 n该法快速、简便，无需特殊仪器，因此，较适合 基层实验室开展。 核酸扩增检测核酸扩增检测 原理：核酸扩增技术是通过扩增沙眼衣

16、原体的多拷 贝基因（如隐蔽性质粒、染色体和RNA）检测病原 体。 方法： 包括聚合酶链反应（PCR）、连接酶链反应 （LCR）、等温链置换扩增技术（SDA）、转录介 导扩增技术（TMA）等。目前国内广泛使用的有实 时荧光PCR。 核酸扩增检测临床意义核酸扩增检测临床意义 n核酸扩增检测具有很高的敏感性和特异性，世界卫生组 织已推荐为扩大的生殖道沙眼衣原体感染实验室诊断的 “金标准”。 n核酸扩增检测不仅可用于宫颈、尿道标本中沙眼衣原体 的检测，也可用于男女性尿液标本的检测。 n开展核酸检测的实验室应通过有关部门考核取得开展临 床核酸检测技术资格证。 方法评价方法评价 n核酸检测 是目前为止最好的检测方法但存在检测敏感性 上的局限性 nELISA抗原检测 严格按操作说明进行操作是非常好的检测方法高通 量，自动化 n快速抗原检测 操作时间短，单人份操作，但敏感性极低 性病实验室的质量控制 n内部质量控制 n外部质量控制 1. 有实验室负责人，实验人员分工明确 2. 实验室人员应该定期参加培训、进修 或专业研讨会 3. 有实验室各项管理制度 4. 制定常规实验室标准操作程序（SOP） 性病实验室的质量管理性病实验室的质量管理 性病实验室