SutherlandiaFrutescens提取物抗前列腺肿瘤的研究

1、Sutherlandia Frutescens提取物抗前列腺肿瘤的研究前列腺癌是男性泌尿生殖系统的恶性肿瘤之一。 在西方国家，它仅次于肺癌， 是导致男性因癌症死亡的第二大疾病。治疗前列腺肿瘤的主要方法为激素疗法和化学疗法， 但是这两种治疗方法在 治愈后经常复发高致病力肿瘤。 因此，新的治疗方法， 如通过调节前列腺肿瘤中 异常表达的信号通路来达到抑制前列腺肿瘤的生长具有重要的临床应用前景。Gli/Hedgehog(Hh) 信号通路是癌细胞增殖和肿瘤生长所必须的， 同时它在调 节前列腺上皮生长方面也发挥着重要的作用。 此信号通路靶向基因的表达量升高 会驱使前列腺前体细胞向癌细胞转化，甚至导致癌细胞

2、扩散。已有研究表明利用 Gli/Hh 信号通路的抑制剂环巴胺可以在体内或体外显著 地抑制前列腺癌细胞的生长。但是，由于环巴胺本身存在多种缺点，如：半衰期 短，非特异性毒性和它在高剂量时的非有效靶向作用都导致其不是最佳的抑制剂。因此，筛选 Gli/Hh 信号通路的高效抑制剂可能是预防或者治疗前列腺肿瘤的一种有效方法。 Sutherlandia Frutescens(S.Frutescens )是一种传统药用 植物，它常用来治疗发热、咳嗽、感染、胃病、糖尿病和癌症等多种人类疾病。近来，它又在改善艾滋病患者的身体机能方面发挥了重要的作用。 已有研究 证明， S.Frutescens 提取物可以抑制人

3、前列腺癌细胞的增殖，但是它的作用机 理还不是十分清楚。一些来源于植物的活性成分可以通过对 Gli/Hh 信号通路的调控来抑制前列 腺癌细胞的增殖。 因此，本研究在体外检测了 S. Frutescens 甲醇提取物 (SLE) 对前列腺癌细胞中 Gli/Hh 信号通路的影响；利用稳定转染 Gli 报告基因的小鼠 胚胎成纤维细胞Shh Light II筛选SLE中抑制Gli/Hh信号通路的主要化学活性成分。在体内检测了 S. Frutescens对TRAM小鼠肿瘤的影响。得到了以下研究结果：1.利用不同浓度的SLE处理人前列腺癌细胞PC3 LNCaF和小鼠前列腺癌细胞TRAMP-C224h48h和

4、72h后，发现SLE对三种癌细胞的生长抑制与剂量和时间呈正相关，即浓度越高或作用时间越长，SLE对细胞的抑制力也越强。而且在 72h 时，它对三种癌细胞的增殖抑制达到一半。 它对三种前列腺肿瘤细胞的半数抑制浓度分别为：PC3167i g/ml、LNCaP2O(0 g/ml和TRAMP-C2100卩 g/ml。但是，SLE对人正常前列腺上皮细胞 RWPE-无影响。2.利用稳定转染Gli报告基因的小鼠胚胎成纤维细胞 Shh Light II 和小鼠前列腺癌细胞TRAMP-C2QG检测SLE对Gli/Hh信号通路的影响。荧光素酶实验检测发现，无论是否用Gli/Hh信号通路的激活剂CM或者SAG 激活

5、，SLE均抑制Gli报告基因的表达，并随着剂量增加对 Gli报告基因的抑制作用增强。但是，环巴胺(5卩M)对 Gli 报告基因在未被激活的 Shh Light II细胞中的表达没有影响。以上实验证明 S. frutescens提取物不仅可以抑制处于活化状态的 Gli/Hh信号通路， 而且对非活化状态细胞Gli 基础水平的表达也有抑制作用。 3. 利用实时定量PCF检测SLE对人和小鼠前列腺癌细胞中Gli/Hh信号通路的影响。结果显示，当小鼠前列腺癌细胞株 TRAMP-C用含有Gli/Hh信号通路配体(ShhN+的CM激活时，SLE和环巴胺都显著地抑制 Gli1和Ptch1的表达；反之,若没有C

6、M激活，SLE和环巴胺的抑制作用消失。在人前列腺癌细胞PC3上, 即使用CM激活PC细胞，环巴胺对Gli1和Ptch1的表达没有明显影响，SLE却 仍然能显著抑制 Gli1 和 Ptch1 的表达。利用免疫印迹试验得出SLE抑制蛋白GLI1在人骨髓横纹肌肉癌细胞RMS13 细胞中的表达。4.利用高效液相色谱-蒸发光散射检测法（HPLC-ELSD从SLE 中分离鉴定环木菠萝烷 Sutherlandiosides （ A-D）和黄酮类Sutherlandins （A-D） 的化合物或者同系化合物的混合物。荧光素酶实验筛选比较发现 Sutherlandioside D 对 Gli 报告基因的抑制力

7、最强，Sutherlandioside D对Gli报告基因的半数抑制浓度（IC50）为1.8卩g/ml , 而SLE的IC50则是30卩g/ml，分析发现Sutherlandioside D 在SLE中的含量约为0.3%，这些数据提示Sutherlandioside D很可能是SLE中调节Gli/Hh信 号通路的主要化学活性成分。 5. 用含有三种浓度的 S. frutescens （0.05%、0.25% 和 1%）日粮饲喂转基因前列腺癌小鼠（ TRAM：PTransgenic adenocarcinoma of the mouseprostate ），与对照组相比， 0.05%的 S. frutescens 能明显降低 TRAMP小鼠前列腺低度分化肿瘤（gross-PDC）的发生率，而且，0.05%的S. frutescens实验组的小鼠具有最小的前列腺重量。但是，在TRAMP）、鼠皮下注射环巴胺既不能明显降低前列腺肿瘤的发生率, 也不能推迟前列腺肿瘤的发生， 甚至对前列腺肿瘤的大小也没有明显的作用。 6.免疫组化检测GLI1蛋白在0.05%S. frutescens实验组TRAM小鼠不同分化类型肿瘤中的表达，结果表明GLI1蛋白的表达不会随着TRAM小鼠前列腺肿瘤的癌 性损伤而改变。研究表明， S. frutescens