海洋调查与监测技术实验课--学生讲义

1、海洋与气象学院 海洋调查与监测技术讲义 一、实验室规章制度 （1）禁止穿拖鞋和凉鞋进入实验室，以防试剂和玻璃容器等的潜在危险危及 个人安全 （2）出入实验室注意水电安全，离开实验室要关闭水电，实验过程中用电时 插头一定要保证干燥，用电时远离水源，用水时远离电源，实验过程中尤其 是加热实验时人员不能离开实验室和实验台。 （3）禁止在实验室内进食和饮水，以防受到或是误食试剂尤其是挥发性气体 和有毒试剂污染而发生人身安全事故 （4）实验室内禁止大声喧哗和嬉戏 （5）酸碱以及挥发性和强氧化性的试剂要戴手套并在通风橱内进行 （6）拿取试剂时要通过老师的批准，精密仪器不宜随便触摸。 （7）标签遵循详细清晰

2、的原则，务必记录完整相关信息。 Cruise-Station-Cast-Niskin No.-Depth-Date-Sampler 例如： 973-A01-1-1-20131112-WB （8）维持好个人实验桌面卫生情况，值日生及时清除垃圾并清扫地面 二、实验要求 1、实验报告（ 100 分制，占总实验成绩的 50%）： （1）思路清晰、条理清楚、图表并茂、书写整洁、简明扼要； （2）实事求是，采用真实的原始数据，不可使用编改数据； （3）实验目的（ 5 分）、实验原理（ 10分）、实验仪器与试剂（ 10 分）、实验 步骤（20 分）、实验数据的处理（ 20分）、实验数据的分析与讨论（ 根据自

3、己 在实验课中的实际操作来判断实验结果的好坏，并结合实际的操作分析所得 结果误差的来源，同时讨论涉及的误差对结果影响的大小 ）（20 分）、实验注 意事项（ 5 分）、思考题（ 5分），卷面完整以及整洁（ 5 分） 3、实验操作（ 100 分制，占总实验成绩的 50%） （1）操作规范占 60 分、数据记录占 20分（数据记录表主要记录原始数据以 及实验过程中出现的现象，需要修改时双线划掉在其上方重新记录。原始数 据是整个实验结果的判定以及分析讨论的依据，在一个实验当中占据极其重 要的位置，因此数据以及现象要记录清晰并且不要涂抹 ）、实验纪律占 10 分 （迟到早退5分、饮食喧哗嬉戏5分）、实

4、验卫生清洁与维持（包括小组个人 和值日生）（10分） （2必须经任课老师审阅实验数据后方能离开实验室，否则算作操作零分 （3）实验数据必须记录在讲义中所附记录表中，该记录表在实验课前打 印，以便在实验课上使用。 三、实验分组 总共分为12个实验小组，按照学号顺序由前往后划分，最多不超过4人，最 少不少于2人。 实验课内容列表 实验编号 实验名称 课时 实验一 海水氯度和盐度的测定 4 实验二 硫代硫酸钠溶液的标定 4 实验三 海水中COD的测定 4 实验四 海水中活性硅酸盐的测定 4 实验五 海水中活性磷酸盐的测定 4 实验六 海水中总磷的测定 4 实验一海水氯度和盐度的测定 一、实验目的 1

5、、掌握氯度定义及其与盐度的关系 2、学会氯度的测定方法和操作 二、实验原理 1、定义： （1）氯度：沉淀 0.3285234千克海水中的卤素所需银的克数。 （2）盐度：海水的盐度是海水含盐量的一个度量，有绝对盐度、克纽森盐度， 氯度盐度，电导盐度以及 78实用盐度。 绝对盐度：1Kg海水中所含盐分的克数，加热蒸发法获得，无法测到。 克纽森盐度（ 1902）： 1Kg 海水中，所有的碳酸盐全部变成氧化物，而所有的溴 和碘都被等当量的氯所替换，这个时候海水中留下的固体物质的含量就是盐度。 氯度盐度：1Kg海水中所有的溴和碘为等当量的氯所取代后，海水中氯的克数为 氯度。其与盐度的关系为 S%o =0

6、.030+1.805CI%o 由于上述公式采集的样品涉及到陆源输入的影响而存在一个 0.030的常数，因此 没定义出 0 盐度，后将此公式修正为 S%=1.80655CI% 电导盐度：标准为“1个大气压，15C下盐度为35的标准海水”，相对电导率或 是电导率比值R15 =C （一个大气压下，15C, S） / C （一个大气压下，15C,S=35 标准海水），通过公式再计算出盐度。 78 实用盐度（目前公认使用的盐度定义） ：以高纯度的 KCI 配置一个浓度为 32.4356%。，相对电导率或是电导率比值 K15 =C （一个大气压下，15C, S） / C （一 个大气压下，15C, KCI

7、% =32.4356%。的氯化钾纯溶液） 2、测定原理： 氯度的测定主要依据沉淀反应和指示反应两个反应过程： 沉淀反应：Ag+ + X- AgXj （X 为 Cl，Br，I） 指示反应：AgNO 3 AgX X- + F- （AgX ） F- Ag+ F-为指示剂阴离子集团，当选用铬酸钾作为指示剂时，等当点后，溶液为浅桔红 色，且 30s 内不褪去。 根据硝酸银标准溶液消耗的量和海水的质量， 计算得出所测海水样品的氯度， 进 而根据经验公式计算出对应盐度。 三、实验仪器与试剂 1、实验仪器： （1）10mL 和 5mL 移液管各 1 只 （2）普通棕色酸式滴定管（ 25mL）1 只 （ 3）容

8、量瓶 100mL1 只 （4）锥形瓶 4 只 （5）吸耳球和移液管架各 1 个 （6）100mL 塑料瓶 1 只 （7）250mL透明玻璃瓶和250mL棕色玻璃瓶1只 （ 8） 30mL 棕色滴瓶 1 只 （ 9）小坩埚 1 只 2、实验试剂 （ 1 ）硝酸银（ AgNO3 ， AR ， s） （ 2）氯化钠（ NaCl ， GR， s） （ 3）铬酸钾（ K2CrO4 ， AR ， s） 四、实验步骤 1 、硝酸银溶液的标定： （ 1）准备氯化钠基准试剂（浓度约为 0.2140.222 mol/L）： 取适量优级纯的氯化钠固体放入干净干燥的坩埚中，在500600C高温炉中灼烧 半小时后，放置

9、在 干 燥器中 冷却；然 后采用减差 法称取 氯化钠基准 物质 1.251.30g于小烧杯中，用蒸馏水溶解后转入100mL容量瓶中，稀释至刻度线， 摇匀后转移到塑料瓶中。 （2）硝酸银溶液（约0.218mol/L）的配制： 称取37.08g硝酸银溶解于1000mL不含Cl-的去离子水中，将溶液转入棕色试剂 瓶置于暗处保存，以防光解。 3)硝酸银的标定： 移取上述氯化钠溶液 10.00mL 于 250mL 锥形瓶中，平行三份，加入 10mL 水，加入 2 滴 5% K2CrO4 指示剂溶液(不要加太多，影响终点的准确到来) ，摇 匀，然后用待标定的硝酸银溶液滴定至溶液呈现浅桔红色， 且 30s

10、内不褪去 ，即 为终点。根据消耗的硝酸银体积和氯化钠的浓度，计算硝酸银的浓度。 2、K2CrO4指示剂：5% (50g/L)水溶液 将 5g 铬酸钾溶于少量去离子水中，加硝酸银溶液至有红色沉淀生成且不退色为 止，摇匀静置 12h 或是过夜，然后过滤并用去离子水将滤液稀释至 100mL。 配制过程中加入硝酸银的目的是， 去除指示剂中在测定过程中会产生影响的杂质， 比如说会生成比铬酸银更难溶的沉淀的物质。 3、测定海水样品的氯度 ( 1)洗涤 5mL 移液管、 25mL 滴定管和 250mL 锥形瓶， 检查滴定管是否漏液并 保证活塞顺滑(如果不顺滑，则均匀涂抹少量凡士林，一定避免堵塞活塞孔) 。

11、(2) 用硝酸银溶液润洗滴定管 3 次(量不能太多，少量多次) ，从试剂瓶中直接 倒出，银废液属于重金属废液，要回收到专用废液回收桶中； ( 3)将硝酸银溶液小心倒入滴定管中， 检查管下部是否充满溶液， 是否有气泡， 如存在气泡，可将滴定管稍稍放平， 然后旋开活塞，气泡自然会慢慢随液体流出； ( 4)确认无气泡且滴定管不漏液后，记录下开始刻度； ( 5)用 5mL 移液管移取 5mL 海水样品于两个锥形瓶中； ( 6)在两个盛海水样品的锥形瓶中各加入 2 滴铬酸钾溶液； ( 7)用硝酸银溶液进行滴定，并记录硝酸银溶液消耗的体积 V ； ( 8)两个样品滴定完后将滴定管中剩余的硝酸银溶液倒入原来

12、盛硝酸银的小瓶 中，用自来水洗滴定管两次， 然后用蒸馏水洗一次， 最后注满蒸馏水放在滴定管 架子上。 4、海水样品密度的确定(重量法) ：在万分之一天平上，放置一个 100mL 的干 净小烧杯，去皮，然后移取 5mL 水样转移到小烧杯中，得到 5mL 水样的重量； 重复此操作，直到两次移取液体的重量差在 0.002g 以内，那么利用这两次的质 量平均值就可以求出所测水样的密度了。 5、 使用容量瓶，分别以氯化钠的质量为 5g、10g、15g、20g、25g、30g、35g配 制成总体积为 1L 的氯化钠溶液，作为氯度测定的样品， 对应样品编号分别为 H1、 H2、H3、H4、H5、H6、H7。

13、 6、备注： (1) 硝酸银标定时每次滴定所需硝酸银溶液体积基本在10mL 左右 五、实验数据记录与处理 1、 硝酸银溶液的浓度：CAgN03 = ( CNaClXVNaCl) /V AgN03 2、 海水样品的氯度：Cl %o海水=(VAgN03*C AgN03 ) *108*0.3285234/ ( V 海水* p海水) 3、海水样品的氯度-盐度：S%o海水=1.80655CI%o海水 六、实验数据的分析与讨论 七、思考题 1 、为什么要对硝酸银溶液进行标定？ 2、硝酸银有什么危害？ 八、注意事项 1、重铬酸钾是一种有剧毒且有致癌性的强氧化剂， 使用时注意不要沾到皮肤上； 2、硝酸银有毒性

14、且具腐蚀性，使用硝酸银时要小心，不能将硝酸银溶液滴在皮 肤上、地上和衣服上，以防银附着沉淀； 3、实验结束后将实验器材放在原来的位置上； 4、不浪费试剂和去离子水； 5、移取、滴定样品和试剂时要小心，保证在操作过程中避免损失； 6、读数力求准确，不要仰视或是俯视 7、滴定时尽量保持前后两个样品的终点颜色相近； 移液管最小刻度为O.ImL,要估读到O.OImL;滴定管最小刻度为O.ImL,要估读 至U O.OImL。 实验名称 实验日期 实验人员 NaCI基准试剂的浓度（mol/L） NaCI基准试剂的体积（mL 所测样品编号 滴定管终点读数/mL 滴定管初始读数/mL 硝酸银所用体积/mL 实

15、验二硫代硫酸钠溶液的标定 一、实验目的 1、掌握碘酸钾标准溶液的配制 2、掌握硫代硫酸钠溶液的标定原理 3、熟练滴定操作以及终点的判断 二、实验原理 在酸性条件下，一定量已知浓度的碘酸钾标准溶液和过量的碘化钾会发生氧 化还原反应生成一定量的12，然后用硫代硫酸钠溶液进行滴定，当黄色变为浅黄 色时，滴入淀粉指示剂，然后滴定至浅蓝色刚好消失，且30s内颜色不回来，即 为终点。反应式如下： IO3- + 8I- + 6H+3I3- + 3H2O 3I3 + 6S2O3291 + 3S4O62 三、实验仪器与试剂 3.1、实验仪器： （1）酸式棕色滴定管（25mL） 1支 （2）锥形瓶（250mL）4

16、个 （3）移液管（10mL） 1支 （4）容量瓶（100mL） 1个 （5）塑料瓶（100mL） 1个 （6）滴瓶（60mL） 1 个 （7）电热板：煮沸去离子水，杀死其中的微生物 （8）烧杯（500mL） （9）500mL棕色试剂瓶1只 （10）250mL玻璃试剂瓶1只 3.2、试剂： （1）碘酸钾（KIO3，GR, s） （2）浓硫酸（H2SO4, AR，l） （3）硫代硫酸钠（Na2S2O3,AR，s） （4）淀粉（ AR， s） （5）碘化钾（ KI，AR ，s） 四、实验步骤 1、100mL 硫酸溶液（体积比 1:3）的配制 在搅拌的条件下，慢慢将 1 体积的浓硫酸加入到 3 体积的

17、去离子水中并且一 边进行搅拌，冷却至室温后贮存于玻璃瓶中。 2、碘酸钾溶液（ 0.001667mol/L ） 用小烧杯称取0.3567g碘酸钾（GR, s；预先在120C条件下烘2h，后置于 干燥器中冷却至室温） ，溶于去离子水中， 转移到 1L 容量瓶中， 并少量多次洗涤 小烧杯一并转入容量瓶中，定容至刻度线，混匀。 3、硫代硫酸钠溶液（Na2S2O3 0.01mol/L）: 称取25.0 g Nc2S2O3?5H2O,用少量煮沸的蒸馏水溶解后，稀释至 1 L,加入 1.0 g无水碳酸钠，混匀。储存于棕色试剂瓶中，此溶液浓度为0.1 mol/L。放置 15 d后，用刚煮沸冷却的水稀释至0.0

18、1 mol/L，储存在棕色试剂瓶中，使用前标 定。 4、淀粉指示剂（ 0.5% ，手工滴定用） : 称取 1.0 g 可溶性淀粉，在 100 mL 烧杯中加少量去离子水后加热搅拌至完 全溶解。冷却后，将该试剂保存冷藏在冰箱中，备用（也可加入水杨酸钠以防变 质）。 5、标定硫代硫酸钠溶液 （1）移取 10.00 mL 标准碘酸钾溶液沿壁流入 250 mL 锥形瓶中，用少许水 冲洗瓶碘酸钾流经的瓶壁，加入 0.5 g KI （s）溶解混匀后，加入1mL （1:3）硫 酸溶液，盖好瓶塞，混匀，封口膜封口，放暗处 2min。 （ 2）打开瓶塞，加入 50mL 去离子水，读取硫代硫酸钠溶液初始读数，然

19、后用硫代硫酸钠溶液滴定至淡黄色，加入 5-6 滴 0.5%淀粉指示剂，继续用硫代 硫酸钠溶液滴定至浅蓝色刚刚消失，并且 30s蓝色不退回，则为滴定终点，记录 终读数。 五、实验数据记录与处理 硫代硫酸钠浓度： 6?x 10.00 ?= Q?% V1 :分析空白值所消耗硫代硫酸钠溶液的体积（mL） V2 :分析样品所消耗硫代硫酸钠溶液的体积（mL） 六、实验数据的分析与讨论 七、思考题 1、为什么硫代硫酸钠溶液不能用直接法准确配制， 而且要放置10d以后再使用？ 2、滴定开始到滴定结束的整个过程，滴定速度遵循什么样的规律？ 八、注意事项 1、碘系卤族元素，碘单质有毒性和腐蚀性，实验过程中注意安全

20、，由其不要吸 入肺腑 2、碘单质易升华，所以实验过程中不要将产生了碘单质的样品长期暴露在空气 中，以防影响实验结果 3、滴定过程中，一定要等到溶液变为淡黄色时再加入淀粉，过早的加入淀粉会 影响滴定终点的准确判断 4、移液管移液过程中切忌移动和抖动，以防液体漏出 5、整个移液过程中移液管始终要保持 竖直状态，切忌倾斜 &移液管的刻度部分不要用手触摸，以防沾污 7、移液管管体本身不带有“吹”字，那么在移取液体的时候切忌将底部残留部分 液体吹出，而是应该通过将移液管停靠在接收器皿内壁上 16秒左右，来保证内 壁残留液体尽可能留出。 最后剩余部分已经不属于所移取的体积内。 硫代硫酸钠溶液标定记录表 实

21、验项目名称： 实验人员： 实验日期： 序号 编号 NqSzQ 初始读数，mL NaSzQ 终读数，mL 消耗NqSzQ 体积，mL 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 KIQ称量重量（m） =（ g） KIQ移取体积（V =（ mL 标定消耗NaSQ体积（V2） （1）（mL）（ 2）（mL）（ 2）（mL） 平均（mL） 分析者：:校对者： 审核人： 实验三 化学需氧量的测定（碱性高锰酸钾法） 一、实验目的 1、掌握化学需氧量的概念 2、掌握碱性高锰酸钾法测定化学需氧量的测定原理及实验操作 3、了解碱性高锰酸钾法的实验条件以及误差来源 二、实验原理 2.1、化学需氧量定义

22、水体中能被氧化的物质在规定条件下进行化学氧化的过程中所消耗氧化剂 的量。以1L水样消耗氧的毫克数表示，通常记为 COD。 化学需氧量主要反映水体受有机物污染的程度，测定海水中化学需氧量通常 采用碱性高猛酸碱法，因为在酸性介质中氯离子有干扰。 2.2、测定原理 在碱性环境下，用一定量的高锰酸钾溶液，将海水中的还原物质氧化，然后 在酸性条件下，加入过量的碘化钾，还原剩余的高锰酸钾和四价锰，生成相应量 的游离碘，用硫代硫酸钠溶液滴定。反应式如下： 4Mn O4- + 3C + 2H2O = 4MnO2+ 3CO2 + 2OH- 2MnO4-（剩余）+ 10+ 16H+ = 2Mn2+ +5 I2 +

23、 8H2O MnO2 + 2I- + 4H+ = Mn2+ + |2 + 2H2O 12+ 2S2O32- 2I- +S4O62- 三、实验仪器与试剂 3.1、实验仪器： （1）棕色酸式滴定管（25mL） 1支 （2）锥形瓶（250mL）4只 （3）移液管（10mL）1支 （4）容量瓶（100mL） 1只 （4）250mL玻璃试剂瓶1只、60mL玻璃试剂瓶2只 （5）60mL滴瓶1只 （6）1L 玻璃砂芯漏斗 1套 （7）电热板：煮沸去离子水，杀死其中的微生物 （ 8） 100mL 烧杯 1 只 （9）100mL 塑料瓶 2 只 3.2、试剂： （1）氢氧化钠（ AR ，s） （2）浓硫酸（

24、AR ，l） （ 3）碘酸钾（ GR，s） （4）高锰酸钾（ AR ，s） （ 5）硫代硫酸钠（ AR ， s） （6）淀粉（ AR， s） （7）碘化钾（ AR ，s） 四、实验步骤 1、氢氧化钠溶液（ 25% ）的配制 称取250g氢氧化钠（s）,溶于1L去离子水中，贮存于塑料瓶中。 2、硫酸溶液（体积比 1:3）的配制 在搅拌的条件下， 慢慢将 1 体积的浓硫酸加入到 3体积的去离子水中， 趁热 滴加 0.02mol/L 的高锰酸钾溶液，至溶液略呈微红色不褪为止 （为何如此操作？） ， 贮存于玻璃瓶中。 3、碘酸钾溶液（ 0.001667mol/L ） 用小烧杯称取0.3567g碘酸钾（

25、GR, s；预先在120C条件下烘2h，后置于 干燥器中冷却至室温） ，溶于去离子水中， 转移到 1L 容量瓶中， 并少量多次洗涤 小烧杯一并转入容量瓶中，定容至刻度线，混匀。 4、硫代硫酸钠溶液（Na2S2O3 0.01mol/L）: 称取25.0 g Nc2S2O3?5H2O,用少量煮沸的蒸馏水溶解后，稀释至 1 L,加入 1.0 g无水碳酸钠，混匀。储存于棕色试剂瓶中，此溶液浓度为 0.1 mol/L。放置 15 d后，用刚煮沸冷却的水稀释至0.01 mol/L，储存在棕色试剂瓶中，使用前标 5、淀粉指示剂（0.5%，手工滴定用）： 称取1.0 g可溶性淀粉，在100 mL烧杯中加少量去

26、离子水后加热搅拌至完 全溶解。冷却后，将该试剂保存冷藏在冰箱中，备用（也可加入水杨酸钠以防变 质）。 6标定硫代硫酸钠溶液 移取10.00 mL标准碘酸钾溶液沿壁流入 250 mL锥形瓶中，用少许水冲洗 瓶壁，加入0.5 g KI,加入1mL（ 1:3）硫酸溶液，盖好瓶塞，混匀，封口膜封口， 放暗处2min,打开瓶塞，加入50mL去离子水，用硫代硫酸钠溶液滴定至淡黄 色，加入5-6滴0.5%淀粉指示剂，继续用硫代硫酸钠溶液滴定至蓝色刚刚消失 为止，记录读数。 7、测定水样中COD含量 （1）量取100mL水样两份于两个250mL三角瓶中，加入沸石，加入1mL25% 氢氧化钠溶液，加入10.00

27、mL高锰酸钾溶液，混匀。 （2）将三角瓶置于电热板上加热至沸，准确煮沸10min （从冒第一个泡开始 计时）或在沸腾水浴中加热30min。 （3）取下三角瓶，冷却至室温，加5mL1:3硫酸溶液，加0.5gKI （s）,混匀， 放在暗处5min，用硫代硫酸钠溶液滴定至淡黄色， 加入mL0.5%淀粉指示剂，继 续用硫代硫酸钠溶液滴定至蓝色刚刚消失为止。记录读数V2，两次滴定误差小 于 0.10mL。 8、空白测定 取去离子水100mL加入250mL三角瓶中，重复步骤（1） -（3），测定空白 滴定值V1 （消耗硫代硫酸钠体积约在8mL左右）。 五、实验数据记录与处理 1、硫代硫酸钠浓度: 6?x

28、10.00 /?= 一 Q? COD(mg/L) = ? ?- ? X8 X1000 2、水样COD含量 100 V1 :分析空白值所消耗硫代硫酸钠溶液的体积（mL） V2 :分析样品所消耗硫代硫酸钠溶液的体积（mL） 六、实验数据的分析与讨论 七、思考题 1、碱性高锰酸钾测定海水中 COD 的局限性 2、测定海水为什么使用碱性高锰酸钾法？ 八、注意事项 1、水样加热完毕后需冷却至室温后再加入硫酸和碘化钾，否则会造成游离碘的 挥发而产生误差 2、本实验为条件控制实验，所以样品组和空白组的实验条件要尽量保持一致， 平行进行 3、氢氧化钠俗称烧碱，极易吸潮，遇水会释放出大量热量，所以应该用烧杯和

29、牛角勺称量，然后边搅拌边慢慢溶解到水中 4、浓硫酸具有强腐蚀性，脱水性，移取硫酸时要戴橡胶手套，并且必须将硫酸 慢慢加入到水中， 并伴随搅拌， 绝对不可以将水加到硫酸中， 否则会瞬间产生大 量热量引起硫酸飞溅，造成危险。 5、加热时必须保证溶液在 5min 内沸腾 实验名称: 实验日期: 实验人员: 碘酸钾标准溶液的配制： 碘酸钾（GR,s）g 硫代硫酸钠的标定 滴定管终读数/mL 滴定管初读数/mL 消耗 VNa2S2o/mL 海水中COD勺测定 滴定管终读数/mL 滴定管初读数/mL 空白消耗硫代硫酸钠 Vi/mL 滴定管终读数/mL 滴定管初读数/mL 海水消耗硫代硫酸钠V/mL 实验四

30、 海水中活性硅酸盐的测定 一、实验目的 1、学会使用可见分光光度计 2、掌握硅酸盐的测定原理以及测定过程 3、巩固标准曲线的配制、测定、制作和使用 二、实验原理 1、硅酸盐测定原理 硅酸盐分析原理基于以下反应： 样品先与钼酸铵溶液混合、 酸化，形成硅钼 酸，然后被L(+)抗坏血酸降解为硅钼蓝蓝色染料，后者在 810 nm或660 nm的 特定吸收波长下可被分光测定 。 2、范围与精度 测定范围在0.45卩mol/L 160 卩mol准确度达到：浓度为 20卩mol/L时, 相对误差为 土 5.0 %浓度为100卩mol/L寸，相对误差为 土 3.0 %精密度达到： 浓度为20卩mol/L时，相

31、对标准偏差为 土 6.0 %浓度为100卩mol/L时，相对标 准偏差为 4.0 %。 三、实验仪器与试剂 1 、实验仪器 ： 分光光度计(配套比色皿) ， 25 ml 比色管，容量瓶( 500mL 1 只， 100mL4 只)， 1L 量筒 1 只，移液管( 1mL、5mL 和 10mL 刻度移液管各 1 支)， 1ml 移液枪 1 支， 250mL 玻璃试剂瓶 2 只， 250mL 塑料瓶 4 只 2、试剂：四水合钼酸铵(NH4)6Mo7O24 4H2O, AR，s，草酸(C2H2O4 2H), AR，s),氟硅酸钠(N&SiF6, GR, s)，L (+)-抗坏血酸(C6HsO6, AR

32、，l )， 四、实验步骤 1、硫酸试剂(4.5M )的配制：量取750mL去离子水加入到1L的干净塑料烧杯 中，边搅拌边将 250mL 浓硫酸缓缓加入到去离子水中，待冷却后用去离子水稀 释至 1L 刻度线后转移到塑料瓶中。 2、 (H+)钼酸铵溶液的配制：称取38g四水合钼酸铵，溶解于300mL去离子水 中，将该钼酸铵溶液加入到300mL (4.5M)的硫酸试剂中，混匀后转移至棕色塑 料瓶中，冷藏保存(有效期为几个月) 3、草酸溶液的配制：称取10g草酸，溶解于100mL去离子水中(草酸固体溶解 性稍差，需低温加热，并不断搅拌使其溶解混匀)混匀后转移至塑料瓶中，室温 储存该饱和溶液。长期稳定。

33、 4、抗坏血酸溶液的配制： 称取 2.8g 抗坏血酸， 溶解于 100mL 去离子水中， 混匀 后转移到棕色玻璃瓶中，在低于 4C的环境下可储存1周。 5、 标准系列溶液的配制： 用 Si 标准储备液配制浓度 0、 12.5、 25.00、 50.00uM 的标准系列溶液。 6、测定样品： (1) 显色：向比色管中加入样品至25mL刻线，然后加入1.00mL (H +)钼酸铵 溶液，混合均匀并反应 5-10 min 左右后， 依次按顺序 加入 1.00 mL 草酸溶液和 0.50mL 抗坏血酸溶液，混匀。 ( 2)混匀后显色 60 min 后，在 812 nm 波长下测定其吸光值 A。 7、

34、空白值测定：以无盐水添加试剂，静置1 h作为空白值测定。显色后的物质不 宜在明亮光照处暴露放置。 8、标准系列溶液的配制： 分别移取一定体积的浓度为 500uM 的磷酸盐标准使用 液，加入到已清洗干净的体积为 100mL 容量瓶中，添加去离子水至刻线，塞紧 磨口旋塞，上下颠倒混匀，依次配制浓度为 5.00uM、 15.00 uM、 25.00 uM 的标 准系列溶液， 9、 标准曲线：同样移取上述所配标准系列溶液 25mL，加入到比色管中，按照样 品测定步骤显色并测定其吸光值 A 。 10、硅酸盐水样的配制： 采用 500uM 的磷酸盐标准使用液，依次配制浓度分别 为 5.00uM、10.00

35、 uM、15.00 uM、20.00 uM、25.00 uM 的样品 1L,给学生上课 时作为样品进行测定。 五、实验数据记录与处理 六、实验结果与讨论 七、注意事项 1、反应温度最好在25-30C之间，低于25T反应速率明显下降，可采取恒温水 浴的措施。 2、注意各阶段显色剂的加入顺序和显色时间 3、对于硅酸盐样品，最好加硫酸酸化保存（pH2.5,如若不能及时测定，可 在-20C条件下保存60天。 4、硅酸盐样品测定时受盐度影响较大，所以测定海水时要对其进行盐度校准。 八、思考题 1 、草酸试剂在实验中的作用是什么？ 2、硅酸盐的测定方法还有硅钼黄法，硅钼蓝法相对于硅钼黄法的优势是什么？ 实

36、验名称： 标准曲线绘制日期年月日 绘制人 序号 1 2 3 4 5 添加标准使用溶液体 积mL 标准系列浓度 CS,卩 mol/ L 吸光值As AnAsAb An为扣除空白吸光值Ab后，各标准溶液吸光值 标准使用溶液来源：仪器型号： 测定波长：nm比色皿：cm 标准曲线回归方程： 1）截距 a=2）斜率 b=3） r2： 样品编号 吸光值A 实验五 海水中活性磷酸盐的测定 一、实验目的 1、学会使用可见分光光度计 2、掌握磷酸盐的测定原理以及测定过程 3、学会标准曲线的配制 二、实验原理 1、磷酸盐测定原理 钼酸铵和酒石酸锑 (三价) 钾在酸性介质中与稀释后的磷酸盐溶液反应， 生 成锑-磷-

37、钼酸盐复合物，该复合物被L(+)抗坏血酸降解为蓝色染料物质后，在880 nm 波长下被测定。 2、范围与精度 Koroleff和Palmork (1977)给出了在低水平(0.2卩mo)L测定下磷酸盐的 相对精确度为 5 %，中间水平(0.9卩mol/L为 %，高水平(2.8卩mol/L 为 2 %。 三、实验仪器与试剂 1 、实验仪器 ： ( 1 )分光光度计(配套比色皿) 1 套 (2) 25 ml比色管10支 (3) 容量瓶(500mL 1 只，100mL4 只) (4) 100mL和10mL量筒各1只 (5) 移液管(1mL、5mL和10mL刻度移液管各1支) ( 6) 1ml 移液枪

38、 1 支 (7) 250mL玻璃试剂瓶2只 ( 8) 100mL 塑料瓶 4 只 2、实验试剂 ： (1) 四水合钼酸铵(NH4)6MO7O24 4W, AR，s) (2) 酒石酸锑钾(C4H4KO7Sb 0.5H), AR，s) (3) L( +) -抗坏血酸( C6H8O6， AR， l) ( 4)邻苯二甲酸氢钾( C8H5KO4， GR， s) （5）浓硫酸（ H2SO4，GR， l） 四、实验步骤 1、3M 硫酸溶液的配制： 取 750mL 去离子水，加入到 1L 的干净烧杯中，边搅 拌边将 150mL 浓硫酸缓缓加入到去离子水中， 冷却至室温后装入玻璃试剂瓶中。 2、 钼酸铵溶液的配

39、制：称取15.0g四水合钼酸铵（s）,加入1L的干净烧杯中， 加入 500mL 去离子水溶解混匀，转移到棕色试剂瓶中，冷藏保存。 3、酒石酸锑钾溶液的配制：称取0.42g酒石酸锑钾（s），加入到1L的干净烧杯 中，用 300mL 去离子水溶解完全并混匀，转移入塑料瓶中保存。 4、混合试剂： 将硫酸溶液、 钼酸铵溶液和酒石酸锑钾溶液按照 5:2:1 的体积比 混 合均匀（现配现用，4 C条件下可存放一周） 5、抗坏血酸溶液的配制： 称取 5.4g 抗坏血酸， 溶解于 100mL 去离子水中， 混匀 后转移到棕色玻璃瓶中，在低于 4C的环境下可储存1周。 6、测定样品： 取 25mL 样品，加入

40、2.0mL 的混合试剂和 0.5 mL 的抗坏血酸，每 加一种试剂后都应充分混合。显色 1530 min 内，在 882 nm 波长下测定其吸光 值。比色皿根据浓度需要选取15 cm （一般用5cm）。 7、标准系列溶液的配制： 分别移取一定体积的浓度为 100uM 的磷酸盐标准使用 液，加入到已清洗干净的体积为 100mL 容量瓶中，添加去离子水至刻线，塞紧 磨口旋塞，上下颠倒混匀，依次配制浓度为 1.00uM、 2.00 uM、 4.00 uM 的标准 系列溶液， 8、 标准曲线：同样移取上述所配标准系列溶液 25mL，加入到比色管中，按照样 品测定步骤显色并测定其吸光值 A 。 9、样品

41、配制：采用 100uM 的磷酸盐标准使用液，在干净的容量瓶中依次配制浓 度分别为 1.00uM、 1.50 uM、 2.00 uM、 2.50 uM、 3.00 uM、 3.50 uM 的样品 1L- 2L,给学生上课时作为样品进行测定。 五、实验数据记录与处理 六、实验结果与讨论 七、注意事项 1、对于近岸海水， 采样后需要在 2h 内完成测定。 营养盐样品需要避光保存在冰 箱中(8C),对于细菌活性比较低的样品(大洋深层水)，样品的保存时间可以 更长一些，但是最长不超过 10h。 2、用过的比色管最好用稀盐酸浸泡以后，用 Milli-Q 水清洗后使用。 3、比色管在装样品前需先用样品润洗

42、3 次。 4、磷酸盐测定时，盐度对其影响不大，不需要进行盐度校准，非常精密的分析 研究中要对盐度进行校准。 八、思考题 1、酸度对本实验有什么影响？ 2、海水样品采集后一般通过孔径为 0.45um 的醋酸纤维膜进行过滤后再进行营养 盐的测定，为何选择 0.45um 为过滤标准？ 实验名称： 标准曲线绘制日期年月日 绘制人 序号 1 2 3 4 5 添加标准使用溶液体 积mL 标准系列浓度 CS,卩 mol/ L 吸光值As AnAsAb An为扣除空白吸光值Ab后，各标准溶液吸光值 标准使用溶液来源：仪器型号： 测定波长：nm比色皿：cm 标准曲线回归方程： 1）截距 a=2）斜率 b=3）

43、r2： 样品编号 吸光值A 实验六 海水中总磷的测定(过硫酸钾法) 一、实验目的 1、了解磷酸盐的存在形态 2、掌握过硫酸钾氧化法测定海水中的总磷 3、掌握蒸汽灭菌器的使用 二、实验原理 海水样品在酸性和110C 120C条件下，用过硫酸钾氧化，有机磷化合物被 转化为无机磷酸盐， 五级聚合态磷水解为正磷酸盐。 消化过程产生的游离氯， 以 抗坏血酸还原。 消化后水样中的正磷酸盐与钼酸铵形成磷钼黄。 在酒石酸锑钾存 在下，磷钼黄被抗坏血酸还原为磷钼蓝，于 882nm 波长处进行分光光度测定。 测定范围：0.09卩M6.4M 精密度：总磷浓度为1卩M6.4M时，相对标准偏差为土 5% 准确度：以甘油

44、磷酸钠(C3H7NaO6P?51/2HO)为标准加入物，其方法回收 率为 98%100%；以六偏磷酸钠 (NaPO3) 6为标准加入物，其方法回收率为 93%98%。 三、实验仪器与试剂 1 、仪器 (1) 立式压力蒸汽灭菌器1台(压力可达1.1kPa1.4 kPa温度可达120C 124C, 公用 ) ( 2)分光光度计 1 台 (3) 消煮瓶(60mL-100mL，带螺旋盖的玻璃瓶)5个 (4) 100mL 容量瓶 1 只(加标回收液配制) ( 5) 100mL 烧杯 1 个(带玻璃棒) ( 6) 100mL 量筒 1 个 ( 7) 10mL 量筒 1 个 ( 8) 1mL 移液管 1 支

45、 2、试剂 1）浓硫酸（ H2SO4，GR， l） 2）过硫酸钾（ K2S2O3，AR ，s） （3）四水合钼酸铵（NH4）6MO7O24 42O, AR, s） 4）L（ +） -抗坏血酸（ C6H8O6， AR， l） 5）酒石酸锑钾（ C4H4KO 7Sb 0.52HO, AR, s） 6）磷酸盐标准储备液（ 5000uM , aq） （7）六偏磷酸钠 四、实验步骤 1、 300 yM的磷酸盐（以P计）加标回收标准溶液配制： 准确称取0.0306g六偏 磷酸钠固体（在称量前进行预处理，与110C条件下烘干12h,然后置于干燥器 中冷却至室温后称量）放入小烧杯中,溶于少量去离子水中,转移至

46、 1L 容量瓶 中，小烧杯洗涤 3 次一并转入容量瓶中，然后定容至刻线后混匀备用。 2、过硫酸钾： 称取 5.0g 过硫酸钾溶于 100mL 去离子水中， 混匀后贮存于棕色试 剂瓶中（以防光解），可稳定10d，低温避光保存可稳定30d 3、3M 硫酸溶液的配制： 取 75mL 去离子水，加入到 100mL 的干净烧杯中，边 搅拌边将 15mL 浓硫酸缓缓加入到去离子水中， 冷却至室温后装入玻璃试剂瓶中。 4、 钼酸铵溶液的配制：称取1.5g四水合钼酸铵（s）,加入100mL的干净烧杯 中，加入 50mL 去离子水溶解混匀，转移到棕色试剂瓶中，冷藏保存。 5、 酒石酸锑钾溶液的配制： 称取0.1

47、4g酒石酸锑钾（s）,加入到100mL的干净 烧杯中，用 100mL 去离子水溶解完全并混匀，转移入塑料瓶中保存。 6、混合试剂： 将硫酸溶液、 钼酸铵溶液和酒石酸锑钾溶液按照 5:2:1 的体积比 混 合均匀（现配现用，4 C条件下可存放一周） 7、抗坏血酸溶液的配制： 称取 5.4g 抗坏血酸， 溶解于 100mL 去离子水中， 混匀 后转移到棕色玻璃瓶中，在低于 4C的环境下可储存1周。 8、标准工作曲线绘制（ 03.20 yM） （1） 分别向 3 个 1000mL 容量瓶中移入 10.00 mL， 20.00 mL， 40.00 mL 浓度为 100 yM磷酸盐标准储备液，然后用超纯水稀释至刻线，混匀，标准系列溶液浓 度分别为 1.00 yM 2.00