组织工程学：实验5 SDS-PAGE分析小鼠不同组织细胞的蛋白组成差异

1、1 SDS-PAGESDS-PAGE分析小鼠不分析小鼠不 同组织细胞的蛋白组成差异同组织细胞的蛋白组成差异 组织工程学实验组织工程学实验5 SDS-PAGE分析 小鼠不同组织细胞的蛋白组成差异 基本概念基本概念 电泳的概念：电场中的带电质点在电电泳的概念：电场中的带电质点在电 场力的作用下向着与其自身所带电荷场力的作用下向着与其自身所带电荷 相反的电极移动的现象叫做电泳。相反的电极移动的现象叫做电泳。 带电质点所处的介质如果是凝胶，质带电质点所处的介质如果是凝胶，质 点迁移的速率为质点所受的电场力和点迁移的速率为质点所受的电场力和 凝胶介质阻力的综合效果。凝胶介质阻力的综合效果。 重新分为三大

2、组：重新分为三大组： 1组：学号组：学号 2组：学号组：学号 3组：学号组：学号 今日实验分组今日实验分组 5 再次强调，注意：再次强调，注意： 加样枪使用注意事项加样枪使用注意事项 1.看量程，看刻度，确定旋转方向。 2.旋转到适当的刻度。 3.按到第一档，枪尖放入液面下，缓慢 放手，看，不要有气泡吸入。 4.将液体吹入配制容器，慢吹，手按压 至第二档。 5.枪尖在烧杯壁上靠一下，使最后一滴 液体流下。 实验目的实验目的 1.1.学习学习SDS-PAGESDS-PAGE测定蛋白质组成的基本原测定蛋白质组成的基本原 理。理。 2.2.掌握垂直板掌握垂直板SDS-PAGESDS-PAGE的操作方

3、法。的操作方法。 3.3.从分子水平认识大鼠不同组织的蛋白质从分子水平认识大鼠不同组织的蛋白质 组成特点。组成特点。 6 SDS-PAGE电泳简介电泳简介 （POLYACRYLAMIDE GEL ELECTROPHORESIS） SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳聚丙烯酰胺凝胶电泳是多种电泳方是多种电泳方 法中的一种，具有非常优异的特性，分离法中的一种，具有非常优异的特性，分离 效果极佳，尤其适合于蛋白质的分析。效果极佳，尤其适合于蛋白质的分析。 7 8 SDS-PAG电泳的介质电泳的介质: 聚丙烯酰胺凝胶聚丙烯酰胺凝胶 是一种可以由人工任意制作的凝是一种可以由人工任意制作的凝 胶胶,由丙烯酰胺单体和

4、甲叉双丙烯酰由丙烯酰胺单体和甲叉双丙烯酰 胺交联剂，在催化剂胺交联剂，在催化剂(过硫酸铵及四过硫酸铵及四 甲基乙二胺甲基乙二胺)作用下形成的凝胶。凝作用下形成的凝胶。凝 胶孔径大小可以通过调节单体的浓胶孔径大小可以通过调节单体的浓 度和交联度控制。度和交联度控制。 以聚丙烯酰胺凝胶聚丙烯酰胺凝胶作为介质的电泳称聚丙烯酰胺凝胶电泳聚丙烯酰胺凝胶电泳 （PAGEPAGE）。 当在样品介质和电泳液体系统中加入SDS后，称为SDS-SDS-聚丙烯酰聚丙烯酰 胺凝胶电泳（胺凝胶电泳（SDS-PAGESDS-PAGE）。 SDS:十二烷基硫酸钠(Sodium dodecylsulfate) ， 分子式：C

5、12H25O4SNa 分子量：288.38 分子结构： 9 实验器材：实验器材： 1.垂直电泳装置；垂直电泳装置； 2.直流稳压电源；直流稳压电源； 3.水平摇床；水平摇床； 4.加样器；加样器； 5.离心机；离心机； 6.冰箱；冰箱； 7.滤纸。滤纸。 10 1.取材：大鼠脑、心、肺、肌、肝、脾、取材：大鼠脑、心、肺、肌、肝、脾、 肾、血，肾、血，-70冻存。冻存。 2.样品制备；样品制备； 3.测定各样品的蛋白质含量；测定各样品的蛋白质含量； 4.样品处理：样品蛋白样品处理：样品蛋白2mg/ml，1：1加入加入 样品样品buffer，沸水浴加热，沸水浴加热5min，-20贮存贮存 待用。待

6、用。 11 实验步骤实验步骤 实验步骤实验步骤 5.配胶：配胶： 分离胶：浓度分离胶：浓度:10%, 作用：组分分离。作用：组分分离。 浓缩胶：浓度：浓缩胶：浓度：4%，作用：上样与，作用：上样与 样品浓缩。样品浓缩。 12 电泳胶示意图电泳胶示意图 13 电泳凝胶电泳凝胶 （内含缓冲液，可导电，可以加样品）（内含缓冲液，可导电，可以加样品） 浓缩胶浓缩胶 分离胶分离胶 加样孔加样孔 操作操作1：配制分离胶、灌胶：配制分离胶、灌胶 10%分离胶配方分离胶配方 1）H2O 2.4ml 2）40%Acr/Bis 1.25ml 3）1.5M Tris-Hcl pH8.8 1.3ml 4）10%SDS

7、 50ul 5）10%APS（过硫酸铵）（过硫酸铵） 50ul 6）TEMED 3ul 注：已经配制、灌制完注：已经配制、灌制完 14 4%浓缩胶配方：浓缩胶配方： 1）H2O： 1.58ml 2) 40%ACR/Bis： 0.25ml 3) 0.5mol/L pH6.8 Tris-HCl： 0.63ml 4) 10% SDS： 25l 5) 10% APS： 25 l 6) TEMED： 5l 15 操作操作2：配浓缩胶：配浓缩胶 红字红字的两种试剂先不加。 将分离胶上面的水倒掉，用吸水纸吸净剩余的水。将分离胶上面的水倒掉，用吸水纸吸净剩余的水。 将胶板正立于灌胶架上，放上梳子，可先将梳子将

8、胶板正立于灌胶架上，放上梳子，可先将梳子 一面抬高。一面抬高。 加入红字红字的两种试剂，立即摇匀，用枪将胶加到 分离胶的上面，放平样品梳，注意避免气泡。 静置8min。胶凝，不要拔出梳子。 16 注意！注意！ 两个电泳板合成内槽两个电泳板合成内槽 1.1.短板朝内，注意卡位，保证密闭。短板朝内，注意卡位，保证密闭。 2.2.放入卡套。放入卡套。 3.3.加入电极液，液体要略高于加央孔，加入电极液，液体要略高于加央孔， 试验是否漏水。试验是否漏水。 4.4.确认不漏后，标出加样位置。确认不漏后，标出加样位置。 5.5.加样。加样。 17 单板电泳怎样做单板电泳怎样做 如果是单板电泳，对侧要用一个

9、专用的挡如果是单板电泳，对侧要用一个专用的挡 板卡住，避免漏水。板卡住，避免漏水。 18 将挡板与胶板和好后，试水，加样。将挡板与胶板和好后，试水，加样。 加样顺序：加样顺序： 1号孔：预染分子量标准（号孔：预染分子量标准（Marker）2ul 2号孔：脑（号孔：脑（Brain）8ul 3号孔：心（号孔：心（Heart）8ul 4号孔：肺（号孔：肺（lung）8ul 5号孔：肝（号孔：肝（Liver）8ul 6号孔：肾（号孔：肾（Kidney）8ul 7号孔：脾（号孔：脾（spleen）8ul 8号孔：肌（号孔：肌（Muscle）8ul 9号孔：血清（号孔：血清（serum）8ul 10号孔：

10、空号孔：空 19 向电泳槽外槽加注电极缓冲液，超过向电泳槽外槽加注电极缓冲液，超过 玻板玻板 中线以上。中线以上。 用导线连接电泳槽与电泳仪，注意正负极，用导线连接电泳槽与电泳仪，注意正负极， 使电泳槽上负下正。打开电泳仪电源，设使电泳槽上负下正。打开电泳仪电源，设 定电压定电压80V。 Running开始，注意观察电泳现象开始，注意观察电泳现象: 1.首先是浓缩效应，即加入的蓝色样品在首先是浓缩效应，即加入的蓝色样品在 浓缩胶中由宽变窄，后变成一条线状。改浓缩胶中由宽变窄，后变成一条线状。改 电压为电压为120V。 2.待溴酚蓝泳至胶的下缘，终止电泳。待溴酚蓝泳至胶的下缘，终止电泳。 20

11、电泳结果的观察电泳结果的观察 1.染色：染色： 用染色液（考马斯亮蓝用染色液（考马斯亮蓝R-250）染）染 30min。 2.脱色：脱色： 用脱色液（乙醇，醋酸，水）脱色，用脱色液（乙醇，醋酸，水）脱色， 摇床摇动摇床摇动3060min。 21 结果及分析： 22 解释解释 每一个体中所有细胞中的基因组都是同样每一个体中所有细胞中的基因组都是同样 的；的； 但每一种组织细胞中的蛋白质组是不一样但每一种组织细胞中的蛋白质组是不一样 的，各有各的特点。的，各有各的特点。 原因原因:细胞内基因的选择性表达。细胞内基因的选择性表达。 23 实验原理实验原理 SDS-PAGE 的特点的特点 主要由聚丙烯

12、酰胺凝胶特性而体现：主要由聚丙烯酰胺凝胶特性而体现： (1)(1)在一定浓度时，凝胶透明，有弹性，机械性在一定浓度时，凝胶透明，有弹性，机械性 能好；能好； (2)(2)化学性能稳定，与被分离物不起化学反应，化学性能稳定，与被分离物不起化学反应， 在很多溶剂中不溶；在很多溶剂中不溶； (3)(3)对对pHpH和温度变化较稳定；和温度变化较稳定； (4)(4)几乎无吸附和电渗作用，只要几乎无吸附和电渗作用，只要AcrAcr纯度高，操纯度高，操 作条件一致，则样品分离重复性好；作条件一致，则样品分离重复性好； 25 (5)(5)样品不易扩散，且用量少，其灵敏度样品不易扩散，且用量少，其灵敏度 可达

13、可达1010-6 -6g g (6)(6)凝胶孔径可调节，根据被分离物的分凝胶孔径可调节，根据被分离物的分 子量选择合适的浓度，通过改变单体及子量选择合适的浓度，通过改变单体及 交联剂的浓度调节凝胶的孔径；交联剂的浓度调节凝胶的孔径； (7)(7)分辨率高，尤其在不连续凝胶电泳中，分辨率高，尤其在不连续凝胶电泳中， 集浓缩、分子筛和电荷效应为一体。因集浓缩、分子筛和电荷效应为一体。因 而较醋酸纤维薄膜电泳、琼脂糖电泳等而较醋酸纤维薄膜电泳、琼脂糖电泳等 有更高的分辨率。有更高的分辨率。 电泳原理电泳原理 1 27 电泳凝胶 （可以加样品，内含缓冲液，可导电） 浓缩胶浓缩胶 分离胶分离胶 电泳原

14、理电泳原理 2 28 缓冲液密闭槽 （上） 缓冲液密闭槽 （下） 电流方向 电泳仪 电流方向 电流方向 电泳仪电泳仪 29 聚丙烯酰胺凝胶聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺 (简称Acr) 和交联剂N，N亚甲基双丙烯酰胺（简 称Bis）在催化剂催化剂（过硫酸铵和四甲基乙 二胺（TEMED）的作用下，聚合交联 而成的具有网状立体结构的凝胶，这种 凝胶具有分子筛作用。 30 以此为支持物进行电泳时，可根据不同蛋以此为支持物进行电泳时，可根据不同蛋 白质分子所带电荷的差异及分子大小的不白质分子所带电荷的差异及分子大小的不 同所产生的不同迁移率将蛋白质分离成若同所产生的不同迁移率将蛋白质分离成若 干条区带，分

15、子量低并带负电荷多的分子干条区带，分子量低并带负电荷多的分子 可有较高的迁移率（迁移距离大）。可有较高的迁移率（迁移距离大）。 31 如果分离纯化的样品中只含有同一种蛋白如果分离纯化的样品中只含有同一种蛋白 质，样品电泳后，就应只分离出一条区带。质，样品电泳后，就应只分离出一条区带。 PAGE电泳的分离结果是样品分子的分子量电泳的分离结果是样品分子的分子量 大小和所带电荷多少这两个因素的综合结大小和所带电荷多少这两个因素的综合结 果。果。 32 SDS是一种阴离子表面活性剂，能打断蛋白 质的氢键和疏水键，并按一定的比例和蛋 白质分子结合成复合物，使蛋白质带负电 荷的量远远超过其本身原有的电荷，

16、掩盖 了各种蛋白分子间天然的电荷差异。因此， 在PAGE中加入SDS后，各种蛋白质-SDS 复 合物在电泳时的迁移率，不再受原有电荷 和分子形状的影响，而只是棒长的函数。 这是SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（简称SDS PAGE）的一个重要特征。 33 SDS的重要作用的重要作用 由于由于SDS-PAGE 可将电泳时蛋白质电荷差异这可将电泳时蛋白质电荷差异这 一因素除去或减小到可以略而不计的程度，一因素除去或减小到可以略而不计的程度， 因此常用来鉴定蛋白质分离样品的纯化程度，因此常用来鉴定蛋白质分离样品的纯化程度， 如果被鉴定的蛋白质样品很纯，只含有一种如果被鉴定的蛋白质样品很纯，只含有一种 具三

17、级结构的蛋白质或含有相同分子量亚基具三级结构的蛋白质或含有相同分子量亚基 的具四级结构的蛋白质，那么的具四级结构的蛋白质，那么SDSPAGE 后，后， 就只出现一条蛋白质区带。就只出现一条蛋白质区带。 34 PAGE 有三种效应：有三种效应： 1.浓缩效应浓缩效应 2.电荷效应电荷效应 3.分子筛效应分子筛效应 SDS-PAGE也具有以上三种效应，但有些不也具有以上三种效应，但有些不 同，需要注意！同，需要注意！。 35 1.浓缩效应：浓缩效应： 样品在通过浓缩胶时被高度浓缩成薄层的作用，样品在通过浓缩胶时被高度浓缩成薄层的作用， 称为样品的浓缩效应。这是称为样品的浓缩效应。这是PAGE的独特

18、优点。的独特优点。 （3种负离子：种负离子：Cl-、蛋白质、蛋白质-、Gly-） 在浓缩胶中，缓冲液是在浓缩胶中，缓冲液是pH值为值为6.8的的Tris-HCl，电，电 泳时，缓冲系统中的泳时，缓冲系统中的HCl 几乎全部解离成几乎全部解离成Cl-；而；而 在两槽中的的电极缓冲液是在两槽中的的电极缓冲液是Tris-Gly，pH8.3 的缓的缓 冲液，由于冲液，由于Gly 的的pI6.0，当，当Gly进入浓缩胶后，进入浓缩胶后， 在在pH=6.8的条件下只有很少部分解离成的条件下只有很少部分解离成Gly 的负的负 离子，且电荷微弱；离子，且电荷微弱； 36 酸性蛋白质在酸性蛋白质在pH6.8的条

19、件下也可解离出负离子。的条件下也可解离出负离子。 这三种负离子在电泳时都向正极移动，但有效泳这三种负离子在电泳时都向正极移动，但有效泳 动率是不同的，（有效泳动率动率是不同的，（有效泳动率=泳动率泳动率m * 解离解离 度度）：）： m Cl * ClmPro- * Pro- mGly- * Gly- 37 由于蛋白质样品的有效迁移率恰好介于快、慢由于蛋白质样品的有效迁移率恰好介于快、慢 离子之间，因此也就聚集在这个移动的界面附离子之间，因此也就聚集在这个移动的界面附 近，被浓缩形成一个狭小的中间层近，被浓缩形成一个狭小的中间层.原来原来1cm的的 样品层此时可被浓缩为样品层此时可被浓缩为0.

20、25m的厚度。的厚度。 这是在电泳过程中形成的电位梯度的不连续性，这是在电泳过程中形成的电位梯度的不连续性， 导致蛋白质和导致蛋白质和Gly 离子加快移动，结果使蛋白离子加快移动，结果使蛋白 质在进入分离胶之前，快、慢离子之间浓缩成质在进入分离胶之前，快、慢离子之间浓缩成 一薄层，有利于提高电泳的分辨率。一薄层，有利于提高电泳的分辨率。 38 这里将有效泳动率最大的（这里将有效泳动率最大的（Cl-）称为快离子，最）称为快离子，最 小的（小的（Gly-）称为慢离子。电泳开始前，浓缩胶）称为慢离子。电泳开始前，浓缩胶 和分离胶中都含有快离子，只有电泳槽中的缓冲和分离胶中都含有快离子，只有电泳槽中的

21、缓冲 液含有慢离子。电泳开始后，由于快离子的泳动液含有慢离子。电泳开始后，由于快离子的泳动 率最大，就会很快超过蛋白质，因此在快离子的率最大，就会很快超过蛋白质，因此在快离子的 后面形成了一个离子浓度低的区域，即低电导区。后面形成了一个离子浓度低的区域，即低电导区。 电导与电位梯度是成反比的。电导与电位梯度是成反比的。 E=I/(伏伏/厘米厘米) （E=电位梯度，电位梯度，I=电流密度，电流密度，= 电导率）电导率） 39 浓缩效应浓缩效应 所以低电导区就有了较高的电位梯度。这种高电所以低电导区就有了较高的电位梯度。这种高电 位梯度使蛋白质和慢离子在快离子后面加速移动。位梯度使蛋白质和慢离子在

22、快离子后面加速移动。 当快离子、慢离子和蛋白质迁移率和电位梯度的当快离子、慢离子和蛋白质迁移率和电位梯度的 乘积彼此相等时，则三种离子移动速度相同。在乘积彼此相等时，则三种离子移动速度相同。在 快离子和慢离子的移动速度相等的稳定状态建立快离子和慢离子的移动速度相等的稳定状态建立 之后，则在快离子和慢离子之间形成一个稳定而之后，则在快离子和慢离子之间形成一个稳定而 又不断向阳极移动的界面。也就是说在高电位梯又不断向阳极移动的界面。也就是说在高电位梯 度区和低电位梯度区之间的地方形成一个迅速移度区和低电位梯度区之间的地方形成一个迅速移 动的界面（图动的界面（图15-6）。）。 40 由于蛋白质样品

23、的有效迁移率恰好介于快、由于蛋白质样品的有效迁移率恰好介于快、 慢离子之间，因此也就聚集在这个移动的界慢离子之间，因此也就聚集在这个移动的界 面附近，被浓缩形成一个狭小的中间层面附近，被浓缩形成一个狭小的中间层.原原 来来1cm的样品层此时可被浓缩为的样品层此时可被浓缩为0.25m的厚的厚 度。度。 这是在电泳过程中形成的电位梯度的不连续这是在电泳过程中形成的电位梯度的不连续 性，导致蛋白质和性，导致蛋白质和Gly 离子加快移动，结果离子加快移动，结果 使蛋白质在进入分离胶之前，快、慢离子之使蛋白质在进入分离胶之前，快、慢离子之 间浓缩成一薄层，有利于提高电泳的分辨率。间浓缩成一薄层，有利于提

24、高电泳的分辨率。 41 2.电荷效应：电荷效应： 1)在在PAGE中，蛋白质混合物在浓缩胶中被高中，蛋白质混合物在浓缩胶中被高 度浓缩，堆积成层，形成一个狭小的高浓度度浓缩，堆积成层，形成一个狭小的高浓度 的蛋白质区，但由于每种蛋白质分子所载有的蛋白质区，但由于每种蛋白质分子所载有 效电荷不同，因而泳动率不同，有效电荷多效电荷不同，因而泳动率不同，有效电荷多 的，泳动的快，反之则慢。因此，各种蛋白的，泳动的快，反之则慢。因此，各种蛋白 质就以一定的顺序排列成一个一个的线状区质就以一定的顺序排列成一个一个的线状区 带。带。 42 这是这是PAGE电泳的独特现象。同时，电泳的独特现象。同时，PAG

25、E电泳电泳 的分离胶中，蛋白质解离出的电荷与蛋白质的分的分离胶中，蛋白质解离出的电荷与蛋白质的分 子量两个因素同时在影响着蛋白质的最终泳动距子量两个因素同时在影响着蛋白质的最终泳动距 离。离。 43 2)在在SDS-PAGE中，由于中，由于SDS对蛋白质分子的对蛋白质分子的 作用，形成蛋白质作用，形成蛋白质-SDS复合物。这时大量复合物。这时大量 SDS与蛋白质结合使蛋白质带上大量的、密与蛋白质结合使蛋白质带上大量的、密 度均一的负电荷，即蛋白质的分子量与但度均一的负电荷，即蛋白质的分子量与但 其表面电荷成正比，同时掩盖了蛋白质分其表面电荷成正比，同时掩盖了蛋白质分 子之间原有的电荷差异。子之

26、间原有的电荷差异。 44 所以，虽然在电泳中蛋白质的表面电荷也受到电所以，虽然在电泳中蛋白质的表面电荷也受到电 场力的作用，但由于所有蛋白质分子都具有均一场力的作用，但由于所有蛋白质分子都具有均一 的电荷密度，所以其表面电荷的差异在电泳中不的电荷密度，所以其表面电荷的差异在电泳中不 能表现出来，表现出来的只有蛋白质分子量的差能表现出来，表现出来的只有蛋白质分子量的差 异。异。 45 在浓缩胶中，由于胶浓度较低，网孔较大，不足在浓缩胶中，由于胶浓度较低，网孔较大，不足 以形成分子筛效应，于是在低电导区仅形成唯一以形成分子筛效应，于是在低电导区仅形成唯一 的一个蛋白区带。这是的一个蛋白区带。这是S

27、DS-PAGE的一个特点。在的一个特点。在 分离胶中，蛋白质的带电状态没有改变，电荷效分离胶中，蛋白质的带电状态没有改变，电荷效 应仍可被忽略。但由于凝胶的浓度和交联度发生应仍可被忽略。但由于凝胶的浓度和交联度发生 了改变，凝胶形成了较细的网状结构，于是表现了改变，凝胶形成了较细的网状结构，于是表现 出有效的分子筛效应。这是出有效的分子筛效应。这是SDS-PAGE不同于单纯不同于单纯 的的PAGE的一个重要方面。的一个重要方面。 46 3.分子筛效应：分子筛效应： 当蛋白质通过浓缩胶进入分离胶时，分离胶的当蛋白质通过浓缩胶进入分离胶时，分离胶的pH升高（升高（8.8），浓缩），浓缩 效应消失。

28、而分离胶的网状结构细密，网孔较小，分子量或构象不效应消失。而分离胶的网状结构细密，网孔较小，分子量或构象不 同的蛋白质通过分离胶，受阻的程度不同，因此表现同的蛋白质通过分离胶，受阻的程度不同，因此表现 出不同的泳动率，颗出不同的泳动率，颗 粒小的移动快，颗粒粒小的移动快，颗粒 大的移动慢，此即凝大的移动慢，此即凝 胶的分子筛作用。胶的分子筛作用。 47 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）：由）：由 于于SDS的作用，各种蛋白质都带上相同密度的作用，各种蛋白质都带上相同密度 的负电荷，使蛋白质带负电荷的量远远超过的负电荷，使蛋白质带负电荷的量远远超过 其本身原有的

29、电荷，掩盖了各种蛋白分子间其本身原有的电荷，掩盖了各种蛋白分子间 天然的电荷差异。因此，各种蛋白质天然的电荷差异。因此，各种蛋白质-SDS 复复 合物在电泳时的迁移率，不再受原有电荷的合物在电泳时的迁移率，不再受原有电荷的 影响。电泳结果只与蛋白质的分子量有关。影响。电泳结果只与蛋白质的分子量有关。 SDS-PAGE电泳结果只与蛋白质的分子量有关。电泳结果只与蛋白质的分子量有关。 48 SDS的作用原理：的作用原理： 十二烷基硫酸钠（十二烷基硫酸钠（sodium dodecyl sulfate,SDS）是一种阴离子表面活性剂能）是一种阴离子表面活性剂能 打断蛋白质的氢键和疏水键，并按一定的打断

30、蛋白质的氢键和疏水键，并按一定的 比例结合到蛋白质的疏水部分，形成蛋白比例结合到蛋白质的疏水部分，形成蛋白 质质-SDS复合物。复合物。SDS与蛋白质结合的比例为与蛋白质结合的比例为 1.4克克SDS/1克蛋白质。由于十二烷基硫酸克蛋白质。由于十二烷基硫酸 根带负电荷，并按一定比例与蛋白质结合，根带负电荷，并按一定比例与蛋白质结合， 所以各种蛋白质都带上相同密度的负电荷，所以各种蛋白质都带上相同密度的负电荷， 使蛋白质带负电荷的量远远超过其本身原使蛋白质带负电荷的量远远超过其本身原 有的电荷，足以掩盖各种蛋白分子间天然有的电荷，足以掩盖各种蛋白分子间天然 的电荷差异。的电荷差异。 49 因此，

31、各种蛋白质因此，各种蛋白质-SDS 复合物在电泳时的迁移率，不再复合物在电泳时的迁移率，不再 受原有电荷的影响。受原有电荷的影响。 SDS与蛋白质结合后，还引起了蛋白质构象的一系列改与蛋白质结合后，还引起了蛋白质构象的一系列改 变，其主要表现是：各种变，其主要表现是：各种SDS-蛋白质复合物的构象趋于蛋白质复合物的构象趋于 一致，使具有四级结构的蛋白质拆解成组成它们的亚单一致，使具有四级结构的蛋白质拆解成组成它们的亚单 位（亚基）。实验证明，蛋白质的位（亚基）。实验证明，蛋白质的SDS复合物在水溶液中均复合物在水溶液中均 呈长椭圆棒状，不同蛋白质的呈长椭圆棒状，不同蛋白质的SDS复合物的短轴长

32、度都一样，复合物的短轴长度都一样， 约为约为18，而长轴则随蛋白质的分子量成正比地变化。，而长轴则随蛋白质的分子量成正比地变化。 50 这样的蛋白质这样的蛋白质-SDS复合物在凝胶电泳中的迁移率，复合物在凝胶电泳中的迁移率， 不再受蛋白质原有电荷和形状的影响，而只是椭不再受蛋白质原有电荷和形状的影响，而只是椭 圆棒的长度，即蛋白质分子量的函数。圆棒的长度，即蛋白质分子量的函数。 由于由于SDS-PAGE 可将电泳时蛋白质电荷差异这一可将电泳时蛋白质电荷差异这一 因素除去或减小到可以略而不计的程度，因此常因素除去或减小到可以略而不计的程度，因此常 用来鉴定蛋白质分离样品的纯化程度，如果被鉴用来鉴定蛋白质分离样品的纯化程