关于PTH检测的分子片段

1、关于PTH检测罗氏电化学发光有三种 PTH检测试剂盒Elecsys PTH,PTHstat和PTH1-84ElecsysPTH 和 PTHstat生物素化单克隆抗体和N-端片段(1-37)反应以及钉复合体a标记的单克隆抗体和C- 端片段(38-84)反应。本试剂盒中使用的抗体与氨基酸区域26-32和37-42抗原决定簇反应。临床应用：用于辅助高钙血症与低钙血症的鉴别诊断，可用于甲状旁腺瘤外科手术和 慢性肾衰的PTH监控。Elecsys PTH1-84生物素化单克隆抗体和N末端片段反应以及钉复合体a标记的单克隆抗体和C末端片 段反应。临床应用：PTH1-84biointact更适合应用于甲状腺瘤

2、切除外科手术和慢性肾功能衰竭 等恶性疾病时的PTH监控。DPC in tactPTH临床应用：试剂盒仅用于辅助高钙血症与低钙血症的鉴别诊断，而不用于恶性肿瘤的 诊断或治疗监控。Cen taur in tactPTH试剂盒仅用于辅助高钙血症与低钙血症和恶性高钙血症的鉴别诊断。PTH在体内的片段形式完整 PTH184(i ntact PTH)N 端 PTH 134 (PTH-N )C 端 PTH 5484 ( PTH-C )不同试剂盒位点及参考范围比较:中段 PTH，有 4468、3948 和 2854 等Elecsys PTH in tact15-65 pg/mL (1.6-6.9 pmol/L

3、)一抗位点26-32（N端），二抗位点37-42仲间端）Elecsys PTH in tact stat15-65 pg/mL(1.6-6.9 pmol/L)一抗位点26-32（N端），二抗位点37-42仲间端）Elecsys PTH （ 1-84）biointact一抗位点（N末端），二抗位点（C末端）DPC2000 in tactPTH一抗位点1-34 （N端）,二抗位点44-4814.9-56.9pg/mL(1.58-6.03pmol/L)12 65pg/mL (1.3 6.8pmol/L )仲间端)Cen taur in tactPTH14 72 pg/mL (1.48 7.63 pm

4、ol/L)一抗位点1-34 （N端），二抗位点39-84 （C端）甲状旁腺素错误!未定义书签。（PTH错误!未定义书签。）简介循环血中的活性PTH水平很低，而血液中存在浓度比活性 PTH高得多的无活性PTH片断甚至前PTH原、PTH原等物质干扰了 PTH的测定。另外，肾小球滤过率和 甲状旁腺的PTH分泌率的改变也对血 PTH值有明显影响。因此，分析结果时必须考虑血PTH测定的敏感性和代表甲状旁腺功能活动的特异性。近年，人们使用双位点夹 心法来测定PTH，目的是精确分开 PTHi-84、PTH-C和PTH-N片断。提高了 PTH测 定的诊断效率。目前用双位点法测定PTH的敏感性已经达到鉴别原发性

5、甲旁亢和非甲状旁腺性高钙血症的要求。PTH在血循环中主要有四种存在形式：一是完整的PTHi84，占5%20%，具有生物活性；二是N端PTHi-34（即PTH-N），量很少；三是 C端PTH5684（即卩PTH-C，其 中又可分为若干种不同长度的片断）；四是中段PTH（即PTH-M）。后二者占PTH的 75%95%，半衰期时间长，但无生物活性；前二者半衰期时间短，不超过10min。此外还有少量的PTH原、前PTH原等。（一）方法目前国内外已有不同PTH片段的试剂盒供应，至少有四种类型的PTH成品盒供临床检测。 完整PTH 184（intact PTH）。1987年国外首先报道了使用免疫方法测定

6、PTH i84， N端PTH134（ PTH-N ）。测此片段对评价急慢性肾功能衰竭病人的甲状旁腺功能 有一定帮助。 C端PTH5484（ PTH-C）。半衰期长，但无生物活性，在区别甲状旁腺功能正常 与异常方面比PTH-N更为灵敏。 中段PTH，即PTH-M，氨基酸片段有4468、3948和2854，与PTH-C 一样 占PTH量多，半衰期时间长，无生物活性，但准确性高，可达95%100%。在区别原发性甲旁亢、继发性甲旁亢、原发性甲状旁腺功能减退症和继发性甲状旁腺功能减 退症方面有一定意义。以上四种形式的PTH均可用放射免疫法测定，但任何一种片段都与PTH184有交叉反应，实际上也包括PTH

7、184的浓度，不过前两种形式的PTH由于制备抗血清和标记 抗原比较困难，开展较少，后两种形式的PTH对代谢性骨病的意义不大。血浆 PTH易被玻璃面吸附，在20 C以上时极不稳定，故测定过程中操作应严格，避免误差。一 些生理因素及药物对PTH水平有影响。肾上腺素、胰泌素、酒精、前列腺素E2、维生素A、降钙素及皮质醇均能增加 PTH分泌。普奈洛尔、低镁血症、1 a,25-（OH） 2D3 则降低血PTH。近年发现PTH 7-84可干扰PTH1-84的生物活性，其机制未明。可能 PTH 7-84与 PTH/PTHrP受体竞争性结合有关，认为血清或骨组织中的高浓度PTH7-84是骨组织产生PTH抵抗的

8、原因之一，但也有不同意见，认为测定PTH 7-84或PTH7-84/PTH1-84比值无任何临床意义。在慢性肾衰时，血清中的PTH-C明显升高，可占PTH总量的50%，PTH-C来源于甲状旁腺的分泌和外周PTHi-84的裂解。在甲状腺甲状旁腺切除大鼠中，PTH7-84可引起低钙血症（非手术所致），PTH7-84还可阻滞PTH1-84或PTHl-34的升高血钙作用，而其他小分子的 PTH-C （如PTH 39-84 ）或PTH53-84与PTH7-84有协同作用， 但它们均无升高CAMP作用，不能与PTH/PTHrp受体结合，故它们可能有自己的客 观存在体存在（PTH-C受体）。看来PTH存在两

9、类受体。（二）正常范围由于测定片段不同和季节对 PTH均有影响，各单位报道的正常值差异较大，如PTH-C值比PTH-N值大数倍。但是在诊断原发性甲旁亢时无论是 PTH-C、PTH-N还是PTH-M，其测定值都升高，在发病早期增高的幅度已很明显， 可达正常值的10倍，准确性95%100%。故各实验室应建立自己所测地区人群和所 采用方法的正常范围。免疫反应性 PTH（ iPTH）2.5 ）.8pmol/L , PTH-N 1.312 pmol/L。PTH的浓度在不同的年龄和性别以及季节也不完全一样，因此在临床应用中 除了要注意避免不同PTH片断间的交叉反应外，还应注意年龄、性别、季节等对测定 值的

10、影响，作出合理的分析。ICIMA采用了两个单克隆抗体分别针对人 PTH的N-末端和C-末端，该方法检测 hPTH （ 134 ）与 hPTH（184）有交叉反应，但与 hPTH（46）、（ 2848 ）、（3984 ）、（ 4468 ）、（ 5384 ）以及hPTHrP（186）没有交叉反应。最低检测下 限可达0.4 pmol/L或0.2 pmol/L。该方法可对绝大多数正常人循环 PTH进行测定，很 少受肾功能减退的影响，能够有效区分 PTH与非PTH介导的高钙血症。血循环中PTH分子的不均一性，以及所用抗血清来源及抗原的不同，使各实验室 报告的血清PTH正常值有很大差异，而且所用的单位也不

11、统一。正常人血PTH1-84为1065 pg/ml （ng/L）； PTH-M （中间片断）为 50330 pg/ml ； PTH-N 为 824 pg/ml ; PTH-C 为 28693 pg/ml （21 50 岁者）或 40285 pg/ml（5170 岁者）。由此可见， 正常情况下 PTH 1-84/PTH-M/PTH-N/PTH-C 的重量比约为 1 : 5 : 0.8 : 3040。如按 克分子量计，它们的比值为 1 : 24 : 3 : 4055。因此，活性 PTH （ PTH1-84和某些 PTH-N ）在血液中所占PTH总量的比例很低。如测定误差大，加上肾小球滤过率和甲 状

12、旁腺分泌率的影响，将使PTH测定的价值下降。用PTH1-84/PTH-C来作为分析指标 可部分避免误差，但分析结果时仍要密切结合临床。（三）PTH升高的常见原因 PTH升高主要见于原发性甲旁亢、继发性甲旁亢、糖 尿病等；亦常见于OP、单纯性甲状腺肿、乳腺癌、暴发性脑膜炎球菌血症等 。如血 清PTH明显升高，而临床上并无甲旁亢表现，甚至出现甲旁减的症状与体征，称为假性甲旁减，这是由于靶组织对 PTH抵抗所致，详见第4篇第12章。相反，假性甲旁 减病人的血清PTH明显升高。若在血清钙增高的同时，iPTH值也升高，说明PTH分 泌功能未受咼血钙抑制，提示原发性甲旁亢。在手术证实的甲状旁腺腺瘤病人中，有5%25%病人iPTH值不升高。如果肾小球功能不良，肾小球滤过率 （GFR）小