菌种的保藏概述

1、菌种的保藏和防止衰退的措施菌种保藏的要点：选择适宜的培养基、培养温度和菌龄，以便得到健壮的细胞或抱子；保 存于低温、隔氧、干燥、避光的环境中，尽量降低或停止微生物的代谢活动， 减慢或停止生长繁殖；不被杂菌污染，在较长时期内保持著生活能力。方法和原理定期移植法：将菌种接种于所要求的培养基上，在最适温度中培养，至静止期或产生 成熟的抱子时，置入 5C的冰箱（或冰库）保存。在培养和保存的过程中，由 于代谢产物的累积而改变了原菌的生活条件，结果菌落群体中的个体就不断 衰老和死亡，因此每515天或14个月重新移植一次，具体间隔时间因种 而异。凡能人工培养的微生物都可用此法保存。此法不需特殊设备，但烦琐，

2、 费时，而且经常移植容易引起菌种退化。矿油封藏法：将化学纯的液体石蜡（矿油）经高压蒸气灭菌，放在 40C恒温箱中蒸发其 中的水分，然後注入斜面培养物中，使液面高出斜面约1厘米。将试管直立,放在1520C室温中保存。由于在斜面培养物上覆盖一层液体，既能隔绝空 气，又能防止培养基因水分蒸发而干燥，可以延长菌种保藏的时间。但注入 的液体必须不与培养基混溶、对菌种无毒，不易被利用和挥发。此法适用于 酵母菌、芽抱杆菌；不适用于固氮菌、乳酸杆菌、明串珠菌、法门氏菌和毛 黴目中的大多数属种。此法简便易行，但必须注意防火和污染。沙土管法：将沙或土过筛、烘干、装管、灭菌、然後将菌种制成抱子悬液滴入其中 混匀，放

3、到盛氯化钙的干燥器里吸除水分，干燥後保存或用火焰封管後保存。 吸附在干燥沙土上的抱子因缺水而处于休眠状态，可保存较长时期。此法适 用于芽抱杆菌、梭状芽抱杆菌、放线菌、镰刀菌等。麸皮法：将麸皮制成培养基，培养要保存的菌种，待生长良好後，置干燥器中保 存。这是根据中国酿造酒、醋、酱时制麴的经验所采用的一种保藏方法，适 用于谷物微生物区系中的种类。L 干燥法：又称液体干燥法或真空干燥法，用含3%谷氨酸钠的0. 1M磷酸缓冲溶液(pH7.0)做分散媒，将待保藏的微生物制成高浓度的细胞悬液，滴入无菌安瓿 瓶中，每管0.05毫升；将安瓿瓶固定在多歧管上，并以水浴保持安瓿瓶内样品温 度为10C,在13.31

4、.3帕的真空度下干燥，火焰封管保存。此法不经冻结， 用真实泵迅速抽乾，可避免菌种的冻伤或死亡。广泛应用于病毒、噬菌体、 细菌、酵母菌、蓝澡、原生动物等。梭氏法：将容有1滴细胞悬液的小管，置于盛有氢氧化钾或五氧化二磷吸水剂的 大试管中，用真空泵抽至 1.3帕时，将大试管密封保存。这是为减少细胞死 亡率而采取的一种不经冻结、缓慢脱水的干燥保藏法，适用于多种细菌、真 菌。冷冻真空干燥法：将细胞悬液每0.10.2毫升注入一无菌安瓿瓶，于 -40C预冻1小时， 再于-2030C、真空度为13.3帕的条件下脱水。在脱水过程後期，安瓿瓶 外温度可逐渐升至25C。脱水後的样品含水量应在3%以下。最後，将安瓿瓶

5、保持真空度1.3帕，用火焰溶封，置10C保存。为防止细胞在冻结和脱水过 程中损伤或死亡，要用保护剂制备细胞悬液。保护剂有脱脂牛奶、血清、10%蔗糖或葡萄糖溶液等，其作用是通过氧和离子键对水和细胞所产生的亲合力 来稳定细胞成分的构型。此法适用于病毒、衣原体、枝原体、细菌、放线菌、酵母菌、丝状真菌等的长期保存，是当前保藏菌种的一个重要方法。但是， 盐杆菌、发光杆菌、黏杆菌、阿舒囊黴、多囊黴、担子菌中的大多数属种不 适用于此法保存。液态氮超低温冻结法：用甘油或二甲亚(DMSO作保护剂制备细胞悬液，分装入无菌安瓿瓶，每 管0.2毫升，在控制温度下降速率为1C/分钟的条件下预冻至-40C，然後立即放入液

6、氮生物贮存罐中气相(-150C)保存。恢复培养时，先直接侵入38 C水浴中解冻510分钟，再种植于适宜培养基内培养。 这是根据在低于-130C 时一切生化反应处于停止状态、微生物也不能进行代谢活动而设计的冻结 法。为避免冻死、冻伤和细胞内形成大量冰晶，用保护剂制备悬液并控制预 冻时的冷却速率和解冻时融化速率。微生物的大多数属种适于慢速冻结和快 速解冻。此法适用于病毒、枝原体、各种细菌、放线菌、酵母菌、丝状真菌、蓝澡等。分工和机构：菌种保藏可按微生物各分支学科的专业性质分为普通、工业、农业、医 学、兽医、抗生素等保藏管理中心。此外，也可按微生物类群进行分工，如 沙门氏菌、弧菌、根瘤菌、乳酸杆菌、

7、放线菌、酵母菌、丝状真菌、藻类等 保藏中心。目前，世界上约有550个菌种保藏机构。其中著名的有美国典型菌种保 藏中心（简称ATCC马里兰）；1925年建立，是世界上最大的、保存微生物种 类和数量最多的机构，保存病毒、衣原体、细菌、放线菌、酵母菌、真菌、藻类、原生动物等约29000株，都是典型株；荷兰真菌菌种保藏中心（简称CBS得福特）：1904年建立，保存酵母菌、丝状真菌约 8400种、18000株，大多是模式株；英国全 国菌种保藏中心（简称NCTC伦敦）：保存医用和兽医用病原微生物约2740株;英联邦真菌研究所（简称CMI,里郡）：保存真菌模式株、生理生化和有机合成 等菌种2763种，8000株；日本大阪发酵研究所（简称IFO,大阪）：保存普通 和工业微生物菌种约 9000株；美国农业部北方利用研究开发部（北方地区研 究室，简称NRRL伊利诺伊州皮契里亚）：收藏农业、工业、微生物分类学所 涉及的菌种，包括细菌 5000株，丝状真菌1700株、酵母菌6000株。1970年8月在墨西哥城举行的第 10届国际微生物学代表大会上成立了 世界菌种保藏联合会（简称WFCC）同时确定澳大利亚昆士兰大学微生物系为 世界资料中心。这个中心用电子计算机储存全世界各菌种保藏机构的有关情 报和资料，1972年出版世界菌种保藏名录。中国于1979年成立了中国