GPC凝胶净化系统基础知识PPT课件

1、现状现状 食品安全、环境保护日益受到关注。 要求仪器更快、更准、更有效。 样品前处理对于保证结果的一致与准确至关重要。 第1页/共30页 牛牛文库文档分享 主要内容主要内容 凝胶色谱的原理 LabTech GPC Cleanup系统 GPC法规 GPC的应用 第2页/共30页 牛牛文库文档分享 凝胶色谱的原理凝胶色谱的原理 凝胶色谱： Gel Permeation Chromatography Size Exclusion Chromatography 是根据溶质分子大小进行分离的色谱技术。 柱填料凝胶具有不同尺寸的孔穴，凝胶孔径与分离组分分 子大小相应，当大小不同的组分分子随流动相进入凝胶，

2、 他们进入微孔的程度不同，大分子不能进入孔穴，而分子 越小进入微孔越深。因而保留时间不同。试样中各组分按 分子大小进行洗脱。 第3页/共30页 牛牛文库文档分享 第4页/共30页 牛牛文库文档分享 凝胶色谱的固定相凝胶色谱的固定相 凝胶色谱柱的固定相种类很多， 化学组成分为三类 a)有溶胀性的交联高聚物类的疏水性 有机凝胶。代表：交联聚苯乙烯。 b)水做溶剂的亲水性凝胶，如：交联 葡聚糖凝胶、琼脂。 c)非溶胀性的无机凝胶，如多空硅胶、 多孔玻璃 GPC凝胶净化净化柱固定相 EPA推荐： 多空乙烯苯二乙烯苯聚合物 Bio-Breads S-X3 200-400目 排阻极限：2000 第5页/共

3、30页 牛牛文库文档分享 凝胶色谱的流动相凝胶色谱的流动相 原则： 在选择溶剂时，应该选择与仪器、净化柱兼容的溶剂及样品 溶解性相符的溶剂。 原因： 选择性仅与分子大小的差异有关。要改进分离度只能靠凝胶 的孔径大小和孔径分布的最佳化来实现。试样的分离并不依 赖于溶剂与试样间的相互作用力（与一般色谱的不同）. 第6页/共30页 牛牛文库文档分享 什么是什么是“凝胶净化系统凝胶净化系统” 输液泵将流动相与样品带入净化柱，试样中各组分按照分子大小顺序洗脱，大分子油脂、 色素、生物碱、聚合物先淋洗出来农药等较小分子后淋洗出来，检测器检测出信号，组 分收集器收集含有目标组分的洗脱液。 第7页/共30页

4、牛牛文库文档分享 输液泵 进样阀 （自动进样器） GPC净化柱 馏分收集器 检测器 第8页/共30页 牛牛文库文档分享 LabTech GPC GPC凝胶净化系统凝胶净化系统 GPC Cleanup 600GPC Cleanup 800 第9页/共30页 牛牛文库文档分享 仪器特点仪器特点 高性能输液泵 多波长紫外检测器 可供选择多种收集管架的馏分收集器 集进样与收集于一体的自动液体处理器 多种收集模式 第10页/共30页 牛牛文库文档分享 GPC净化柱 填料：Bio-Beads SX-3 200-400目（EPA 3640） 30g, 50g, 60g、70g 净化柱：不锈钢柱、玻璃柱 尺寸

5、：25*300，25*400，25*500，25*700mm（可定制） 第11页/共30页 牛牛文库文档分享 灵活多变的灵活多变的GPC工作站工作站 第12页/共30页 牛牛文库文档分享 GPC工作示意图 LS M 溶剂溶剂废液废液 馏分馏分 第13页/共30页 牛牛文库文档分享 GPCGPC净化适用法规及推荐方法净化适用法规及推荐方法 US EPA SW-846 方法3640A FDA杀虫剂分析方法 AOAC 分析方法 DFG S19 第14页/共30页 牛牛文库文档分享 GPCGPC净化适用法规及推荐方法净化适用法规及推荐方法 方法目标物质样品基质流动相填料 USEPA 3640A USE

6、PA 625-S 半挥发有机物、BNAs(Bases Neutral Acid), 多 氯联苯、有机氯杀虫剂 环境样品、土壤、底 泥等 100% 二氯甲烷S-X3 Gel FDA Pesticide Analytical Methods有机氯杀虫剂、有机磷杀虫剂、多氯联苯、各 种杀真菌剂等 脂肪、谷物、植物材 料 50/50 乙酸乙酯/ 环己烷 S-X3 Gel FDA Pesticide Analytical Methods各种杀虫剂和除草剂脂肪食品 羊毛脂50/50 正己烷/二 氯甲烷 S-X3 Gel AOAC Methods of Analysis有机氯农药动物、鱼、家禽、 植物油品

7、50/50 环己烷/二 氯甲烷 AOAC Methods of Analysis有机氯和有机磷杀虫剂、, 三嗪化合物、氨基 甲酸盐化合物 动物、鱼、家禽、 植物油品 15/85 二氯甲烷/ 环己烷 S-X3 Gel FDA Pesticide Analytical Methods有机氯 有机磷杀虫剂、多环芳烃脂肪、谷物、植物材 料 70/30乙酸乙酯/环 戊烷 S-X3 Gel GB/T 19650-2005 动物组织中农 药多残留分析 农药动物组织50/50乙酸乙酯/环 己烷 S-X3 第15页/共30页 牛牛文库文档分享 EPA 3640EPA 3640： GPCGPC净化系统测试净化系统

8、测试 EPA SW-846 3640 方法进行校正 校准物： 玉米油（Corn oil） 双（2-乙基己基）邻苯二甲酸酯（bis-(2- ethylhexyl)phthalate） 甲氧滴滴涕（methoxychlor） 二萘嵌苯（Perylene） 硫 LabTech GPC Cleanup600LabTech GPC Cleanup600 净化柱净化柱2020* *300mm 300mm Bio-Breads SXBio-Breads SX3 3 不锈钢柱不锈钢柱 第16页/共30页 牛牛文库文档分享 应用应用 Why “GPC”? 减少对仪器的损害和待机时间 提高准确率，确保平行性。 提

9、高效率，并且回收率稳定 提高回收率 提高仪器的检出限 节约溶剂 节约人力 第17页/共30页 牛牛文库文档分享 凝胶渗透色谱净化在土样有机氯测定中的应用（环境科学与技术，vol29， 3） 第18页/共30页 牛牛文库文档分享 应用领域应用领域 农产品及食品 （农残、药残） 农残：蔬菜、水果、谷物、饲料、肉类、水产品、 茶叶、蜂蜜 二氧杂环：奶类 黄曲霉素：奶类、食油 第19页/共30页 牛牛文库文档分享 应用1 饲料中有机氯测定（农科院饲料所） 称取5.000g配合饲料若干份,分别加提取液25ml， 超声提取15min，用加有5g无水硫酸钠漏斗过滤 GPC 条件： LabTech Clean

10、up 600 二氯甲烷环己烷=11， 流速： 5.0 ml/min 波长：258nm 12.017 20.850 -80 0 80 160 240 320 400 480 560 640 720 mAU 481216202428323640 min 6.450 10.300 20.183 30.950 33.283 35.300 -100 0 100 200 300 400 500 600 700 800 900 1000 mAU 369121518212427 min 6.983 11.250 16.583 20.533 30.867 34.417 34.900 37.633 41.233

11、-100 0 100 200 300 400 500 600 700 800 900 m AU 481216202428323640 m in 标准 DDT+六六六的GPC的流出图 检测样品提取液的GPC图 检测样品溶液GC色谱图 第20页/共30页 牛牛文库文档分享 min510152025 Hz 0 500 1000 1500 2000 2500 3000 3500 4000 4500 ECD2 B, (070207003B0201.D) 8.732 9.066 9.382 9.570 19.131 22.583 23.514 24.082 24.099 27.689 组分名称组分名称 样

12、品溶液样品溶液(n=5)(n=5) 峰面积均值峰面积均值回收率均值回收率均值RSDRSD -BHC-BHC31113111154.6154.687.0587.054.044.045.05.0 -BHC-BHC147714776161106.5106.55.85.84.14.1 -BHC-BHC2796279612312394.1694.164.14.14.44.4 -BHC-BHC3085308514614697.7497.744.74.74.84.8 p,pp,p-DDE-DDE2401240111211299.6699.664.64.64.74.7 o,po,p-DDT-DDT284828

13、48133133101.1101.14.54.54.74.7 p,pp,p-DDD-DDD15401540107107105.9105.97.47.47.07.0 p,pp,p-DDT-DDT176717677777102.6102.64.54.54.44.4 第21页/共30页 牛牛文库文档分享 应用2： 仪器系统： LabTech GPC Cleanup800 GPC条件： 流动相：二氯甲烷； 检测波长：254nm； 流速：3ml/min； 进样量5ml。 oil-5ml-10ug -200 0 200 400 600 800 1000 1200 1400 1600 1800 mV 369

14、121518212427min oil-5ml -300 0 300 600 900 1200 1500 1800 2100 2400 2700 mV 24681012141618202224min 图1 食用油（含邻苯二甲酸二辛酯） 图2 食用油（空白） 第22页/共30页 牛牛文库文档分享 食用油中增塑剂HPLC谱图 浓度 添加值/ugml-1测定值/ugml-1平均回收率/ % 555.37883.96 10109.53281.754 202025.46120.71 回收率结果(n=3) 第23页/共30页 牛牛文库文档分享 环保 多环芳烃（PHAs）：污水、土壤 多氯联苯（PCBs）：

15、废水 第24页/共30页 牛牛文库文档分享 应用实例： 在土壤样品中加入16种多环芳烃混合标准品，萃取浓缩后以LabTech GPC Cleanup 进行净化，对收集部分进行分析。 A: mixture of 16 PAHs B: Soil extraction mixture of 16 PAHs and Soil extraction HPLC谱图 第25页/共30页 牛牛文库文档分享 经GPC净化后16种多环芳烃的回收率 CompoundRecovery (%) Naphthalene89.6 Acenaphthylene93.4 Acenaphthene90.4 Fluorene96.

16、4 Phenanthrene92.1 Anthracene91.2 Fluoranthene97.6 Pyrene94.2 Benzo (a)anthracene92.1 Chrysene97.5 Benzo(b)fluoranthene95.1 Benzo(k)fluoranthene90.1 Benzo(a)pyrene98.6 Dibenzo(a,h)anthracene86.4 Benzo(g,h,i)perylene90.6 Indeno(1.2.3-.cd)pyrene95.2 第26页/共30页 牛牛文库文档分享 土壤中应用2 土壤中有机氯GPC净化图片 第27页/共30页 牛牛

17、文库文档分享 “过程过程” 典型的典型的GPC净化残留农药制备过程净化残留农药制备过程 第28页/共30页 牛牛文库文档分享 有机样品净化、浓缩全套解决方案有机样品净化、浓缩全套解决方案 第29页/共30页 牛牛文库文档分享 第30页/共30页 牛牛文库文档分享 灵活多变的灵活多变的GPC工作站工作站 第12页/共30页 牛牛文库文档分享 凝胶渗透色谱净化在土样有机氯测定中的应用（环境科学与技术，vol29， 3） 第18页/共30页 牛牛文库文档分享 应用领域应用领域 农产品及食品 （农残、药残） 农残：蔬菜、水果、谷物、饲料、肉类、水产品、 茶叶、蜂蜜 二氧杂环：奶类 黄曲霉素：奶类、食油

18、 第19页/共30页 牛牛文库文档分享 min510152025 Hz 0 500 1000 1500 2000 2500 3000 3500 4000 4500 ECD2 B, (070207003B0201.D) 8.732 9.066 9.382 9.570 19.131 22.583 23.514 24.082 24.099 27.689 组分名称组分名称 样品溶液样品溶液(n=5)(n=5) 峰面积均值峰面积均值回收率均值回收率均值RSDRSD -BHC-BHC31113111154.6154.687.0587.054.044.045.05.0 -BHC-BHC147714776161106.5106.55.85.84.14.1 -BHC-BHC2796279612312394.1694.164.14.14.4