蛋白质印迹缓冲液和母液

1、蛋白质印迹缓冲液和母液 RIPA缓冲液 RIPA缓冲液含有离子去垢剂脱氧胆酸钠作为活性成分，特别适用于破坏核膜提取细胞核内 物质。RIPA缓冲液产生的背景低，但可使激酶变性。它还能破坏蛋白质与蛋白质的相互作 用，因此可能会给免疫沉淀分析和 pull-dow n实验带来一些问题。 50 mM Tris HCl ，pH 8.0 150 mM NaCI 1% NP-40 0.5%脱氧胆酸钠 0.1% SDS 10%脱氧胆酸钠母液（5 g脱氧胆酸钠溶于50 mL溶液中）避光保存。 NP-40缓冲液 20 mM Tris HCl ，pH 8.0 137 mM NaCl 10%甘油 1% NP-40 2

2、mM EDTA 细胞骨架结合蛋白提取缓冲液 10 mM Tris ， pH 7.4 100 mM NaCl 1 mM EDTA 1 mM EGTA 1 mM NaF 20 mM Na4P=O) 2 mM NaVO 1% Triton X-100 10%甘油 0.1% SDS 0.5%脱氧胆酸盐 可溶蛋白缓冲液 20 mM Tris-HCI , pH 7.5 1 mM EGTA（ CaP+ 螯合剂） 制备原钒酸钠 所有流程必须在通风橱中进行。 1. 用双蒸水制备100 mM原钒酸钠溶液 2. 用HCI将pH调节至9.0 3. 煮沸至无色 4. 冷却至室温 5. 再次将pH调节至9.0 6. 再次

3、煮沸至无色 7. 重复以上循环，直到煮沸并冷却溶液之后的 pH保持9.0 8. 用水补至初始体积 9. 分装之后保存于-20 C 10. 如果样品变黄，丢弃样品 避免煮沸期间体积变化过大，可用盖子稍微盖住容器上方，减少蒸发 TBS 10X（浓缩Tris 缓冲盐溶液） 1 L溶液： 24 g Tris 碱（式量：121.1 g ） 88 g NaCl （式量：58.4 g ） 溶于900 mL蒸馏水中 用12 N HCl 将pH调节至7.6 加入蒸馏水至终体积为1 L 要制备1X溶液，将1份10X溶液与9份蒸馏水混合，并再次将pH调节至7.6 o 1X 溶液的最终摩尔浓度为20 mM Tris

4、和150 mM NaCI 。 Tris缓冲液的替代配方同时含有Tris 碱和Tris-HCI 。这可避免大量使用具有潜在危险性 的盐酸来中和单独的 Tris 碱。 TBS 10X替代配方（浓缩 Tris缓冲盐溶液） 1 L溶液： 24 g Tris-HCl（式量：157.6 g ） 5.6 g Tris 碱（式量：121.1 g ） 88 g NaCl （式量：58.4 g ） 溶于900 mL蒸馏水中 1. 在室温下将溶液pH调节至约7.6。如果溶液过碱，用浓HCI将pH调 节至7.6 ;如果溶液过酸，用浓 NaOH将pH调节至7.6 。 2. 加入蒸馏水至终体积为 1 L o 3. 要制备

5、1X溶液，将1份10X溶液与9份蒸馏水混合，并再次将 pH调节至7.6 o 4. 1X 溶液的最终摩尔浓度为 20 mM Tris 和150 mM NaCI 。 TBST （Tris 缓冲盐溶液，0.1% Tween 20） 1 L溶液： 100 mL TBS 10X 900 mL蒸馏水 1 mL Twee n 20 中强膜再生液 15 g甘氨酸 1 g SDS 10 mL Twee n 20 1. 用超纯水将体积调节至 800 mL o 2. 将pH调节至2.2 o 3. 加蒸馏水至1 L 。 高强膜再生液 需要在通风橱中进行。 100 mL溶液： 20 mL SDS 10% 12.5 mL

6、 Tris HCI ，pH 6.8，0.5 M 67.5 mL蒸馏水 在通风橱中加入 0.8 mL 3 -巯基乙醇 细胞核分离实验方案试剂缓冲液A 10 mM HEPES 1.5 mM MgCl 2 10 mM KCl 0.5 DTT 0.05% NP-40 (或 0.05% Igepal 或 Tergitol ), pH 7.9 要制备250 mL缓冲液A的母液： HEPES 1 M = 238.3 g/L，因止匕 10 mM = 0.59 g/250 mL MgCl2： 1 M = 203.3 g/L，因止匕 1.5 mM = 0.076 g/250 mL KCl: 1 M = 74.5

7、g/L，因止匕 10 mM = 0.187 g/250 mL DTT: 1 M = 154.2 g/L ，因此 0.5 mM = 0.019 g/250 mL NP-40: 0.05% 细胞核分离实验方案试剂缓冲液B 5 mM HEPES 1.5 mM MgCl2 0.2 mM EDTA 0.5 mM DTT 26% 甘油(v/v), pH 7.9 要制备250 mL缓冲液B的母液： HEPES 1 M = 238.3 g/L，因止匕 5 mM = 0.295 g/250 mL MgCI2: 1 M = 203.3 g/L，因此 1.5 mM = 0.076 g/250 mL EDTA 1 M

8、 = 372.2 g/L，因此匕 0.2 mM = 0.0186 g/250 mL DTT: 1 M = 154.2 g/L ，因此 0.5 mM = 0.019 g/250 mL 26% 甘油(v/v) = 65 mL TBS 0.025% Triton X-100 1 L溶液： 250 卩 L Triton X -100 1 L TBS , pH 7.6 - 7.8 1.6% H2O2 (过氧化氢)的 TBS溶液 400 mL溶液： 6.4 mL H 2O (GPR = 30% w/w) 393.6 mL TBS , pH 7.6 - 7.8 一抗的TBS溶液（含1% BSA） 以使用稀释

9、度为1:10的一抗为例。 1 mL溶液： 100卩L 一抗 10 mg BSA 900 卩 L TBS, pH 7.6 - 7.8 生物素化二抗的 TBS 溶液(含 1% BSA) 以使用稀释度为1:200的生物素化二抗为例。 1 mL溶液： 5卩L生物素化二抗 995 卩 L TBS, pH 7.6 - 7.8 ABC（抗生物素-生物素复合物）的TBS溶液 以每种组分的使用稀释度为 1:100的ABC为例。 1 mL溶液： 10卩L链霉亲和素 10卩L HRP （或AP）-生物素 980 卩 L TBS, pH 7.6 - 7.8 碳酸氢盐/碳酸盐包被缓冲液（100 mM） 3.03 g Na 2CO 6