革兰氏染色液配制_第1页
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文档简介

1、革兰氏染色液组成规格（10ml）规格(100m)规格(500ml)结晶紫10ml100ml500ml碘液10ml100ml500ml95%酒精10ml100ml500ml蕃红10ml100ml500ml保质期：28度一年.革兰氏染色法是细菌学中广泛使用的一种鉴别染色法，媒染剂碘液进入菌体后与结晶紫结合，革兰氏阳性菌对碘与结晶紫摄取量多且牢固，不易被酒精脱色。革兰氏阴性菌对碘与结晶紫摄取量少，不牢固，易被酒精脱色。为观察方便，脱色后再用一种红色染料如碱性 蕃红进行复染。阳性菌仍带紫色,阴性则被染上红色。操作步骤：1、标本处理:(1)有圉部位的标本，如痰液、粪便、各种拭子、创面等可直接涂片。(2)

2、无菌部位的标本，如脑脊液、胸水、腹水、胆汁、尿液、关节液等，应取适量标本（最高可达5-7m）,经3000rpm离心10min,取沉渣涂片染色。2涂片制作：菌液涂片时，用接种环沾取菌?（攵点在载玻片上，标本可直接在玻片上涂布；菌落涂片 时，先取生理盐水一滴，置玻片上，用接种针挑取菌落在盐水中涂布。制作的涂片应自然干燥，并经 火焰固定，固定的温度不宜过高，以玻片背面接触手背不烫为准，否则可能使细菌形态改变。将固定后的涂片进行染色。3、染色方法:革兰氏染色的关键在于严格掌握酒精脱色程度，如脱色过度,则阳性可被误染为阴性而脱色不够时，阴性菌可被误染为阳性菌。此外，菌龄也影响染色结果，如阳性菌培养时 间

3、过长，或已死亡及部分菌自行溶解了，都可能会呈阴性反应。(1) 加上结晶紫后，染色1分钟，水洗。(2) 加上碘液后染色1分钟，水洗。(3) 加上95%酒精，摇动玻片，根据涂片厚度,脱色约3060秒，水洗，吸去水分。(4) 加上蕃红后，染色1分钟，水洗。(5) 吸干或在空气中凉干后，油镜镜检。4.结果观察：紫色为革兰氏阳性，红色为革兰氏阴性。注意事项：1. 标本涂片不能太厚，严格按操作要求进行。2. 玻片通过火焰温度不能太高。3. 若涂片较厚，应延长脱色时间，直至不再出现紫色为止4. 碘液变透明，则不能使用5水洗时动作要轻柔，沿载玻片对角线方向用洗瓶冲洗，以免把菌体冲 掉。革兰氏染色液如果用量少，买现成的比较话算，如果用量大，自己配起来也溶液，就是试剂种类多了点。其配制方法如下：（1）结晶紫（crystal violet液：结晶紫乙醇饱和液（结晶紫2g溶于20mL95%乙醇中）20mL, 1 %草 酸钱水溶液80mL?各两液混匀置24h后过滤即成。 卢戈（Lugol）氏碘液：碘0.33g,碘化钾0.66g蒸f留水100mLo先将碘化钾溶于少量蒸f留水中，然 后加入碘使之完全溶解，再加蒸憎水至100mL即成。配成后贮于棕色瓶内备用，如 变为黄色即不能 使用。95%乙醇：用于脱色，脱色后可选用以下（4）或（5）的其中一项复染即可。番红溶液：番红O（safra

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