WI-03-21洁净室浮游菌测试方法

1、恩施金凰新材料有限公司 文件编号 WI-03-21 版号 A.0 洁净室（区）浮游菌检验方法 页次 1/6 生效日期 2020/01/02 1.目的 制订洁净室（区）浮游菌检验方法，对从事测试的工作人员进行培训指导，规范检验 方法及操作。 2. 适用范围 本方法适用于洁净室（区）或无茵区域（包括超净工作台）浮游茵的检测和环境的验证。 3. 职责 质检部对本规程实施负责。 4. 程序 4.1仪器：恒温培养箱、分析天平、干燥箱、超净工作台、高压蒸汽灭菌器、电热恒温 水浴锅 4.1.1浮游茵采样器使用要点 4.1.1.1必须按照测试仪器的检定周期，定期对仪器作检定，使用校验合格，且在使用 有效期内的

2、仪器。 4.1.1.2在100级洁净区内不能用铅笔和橡皮。 4.1.13使用测试仪器是应严格按照仪器说明书操作。 4.1.1.4仪器开机，预热至稳定方可按仪器说明书的规定对仪器进行校正，同时检 查釆样流量，并根据釆样量设定采样时间。 4.1.2恒温培养箱：必须定期对恒温培养箱进行校验。 4.2器具：烧杯、量筒、三角瓶（250ml、500ml）、硅胶寒、培养皿（4）150mm） 4.3培养总：大豆酪蛋白琼脂（TSA）培养基 4.4器具灭菌： 器具（如培养皿等）应按下述方法灭函：置手提式压力蒸汽消毒器内121C20分 钟高压灭茵，或置于电热恒温鼓风干燥箱内160C2小时干热灭菌。 4.5测试条件

3、4.5.1测试前，被测试洁净室（区）的温、湿度须达到规定的要求，风速致压差必须控 制在规定值范围内。 4.5.2温度和湿度：洁净室（区）的温度和相对湿度应与其生产及工艺要求相适应（温 度控制在18C26C,相对湿度控制在45%65%之间为宜）。 4.5.3压差：空气洁净度不同的洁净室（区）之间的压差应M5.0Pa,空气洁净度级别 要求高的洁净室（区）对相邻的空气洁净度级别低的洁净室（区）一般要求呈相 对正压。 恩施金凰新材料有限公司 文件编号 WI-03-21 版号 A.0 洁净室（区）浮游菌检验方法 页次 2/6 生效日期 2020/01/02 4.5.4测试时间 4.5.4.1在空态或静态

4、a测试时： 1）对单向流，测试应在净化空气调节系统正常运行时间不少于lOmin后开始； 2）对非单向流，测试应在净化空气调节系统正常运行时间不少于30min后开始。 4.5.4.2在静态b测试时: 1）对单向流，测试宜在生产操作人员撤离现场并经过lOmin自净后开始： 2）对非单向流，测试宜在生产操作人员撤离现场并经过20min自净后开始。 4.5.43在动态测试时，则须记录生产开始时间以及测试时间。 4.5.5测试人员 4.5.5.1测试人员必须穿戴符合环境洁净度级别的工作服。 4.5.5.2空态和静态测试时，室內测试人员不得多于2人，当而积超过lOOnf又需快速完 成测定任务时，可适当增加

5、人数。 4.5.53测试人员应位于测点下风侧并远离测点，动作要轻，保持静止。 4.6测试方法 4.6.1制培养皿（平板） 4.6.1.1配制培养基（按瓶签上的用法进行配制）以下配制量为1000ml: a. 称量：称取瓶签上用法标示的大豆酪蛋白琼脂（TSA）培养基粉末的量，倒 入1000ml烧杯中。 b. 溶解：在装有大豆酪蛋白琼脂（TSA）培养基粉末的烧杯中加入蒸饰水1000ml, 搅拌均匀后，加热煮沸至完全溶解。 c. 冷却:冷却至232Co d. 测pH值：使灭菌后为pH7.30.2o e. 分装：分装于三角瓶中，盖上硅胶寒，包好。 f. 灭菌：121C15分钟高压灭茵。 4.6.1.2将

6、已灭菌的大豆酪蛋白琼脂（TSA）培养基，冷至60C左右，在无菌操作要求下， 倾注约20ml至无菌培养皿中（90mm）,加盖后室温放置凝固后。 注：如采用其他规格的平皿，可适当増减培养基的量，使之在平皿中形成至少2mm 厚的琼脂层。 4.6.13制备好的培养基平皿如需存放E使用，应标记名称、制备日期等，存放在2C 8C环境下，1周内使用有效。 恩施金凰新材料有限公司 文件编号 WI-03-21 版号 A.0 洁净室（区）浮游茵检验方法 页次 3/6 生效日期 2020/01/02 4.6.1.4使用前应仔细检查每个培养皿的质量，培养基及培养皿有变质、破损致污染 的不能使用。 4.6.2测试前仪器

7、、培养皿表面必须严格消毒。 4.6.2.1采样器进入被测洁净区域前先用消毒剂擦拭外表面致紫外线消毒后，从传递 窗传入洁净区域。 4.6.2.2用消毒剂擦净培养皿的外表面。 4.6.23采样前，先用消毒剂清洗采样器的顶盖、转盘以及罩子的内外表面、采样结 束，再用消毒剂轻轻喷射罩子的内壁和转盘。 4.6.2.4采样口及采样管，使用前必须严格消毒。如用消毒剂对采样管的外壁及内壁 进行消毒时，应将管中的残留液倒掉并晾干。 4.6.2.5釆样者应穿戴与被测洁净区域相应的工作服，在转盘上放入或条换培养皿 前，双手用消毒剂消毒或戴无茵手套操作。 4.6.2.6釆样仪器经消毒后先不放入培养皿，开启浮游菌采样器

8、，使仪器中的残余消 毒剂蒸发，吋间不少于5分钟，并检查流量及根据釆样量调整设定采样时间。 4.6.3釆样 4.6.3.1关闭浮游菌采样器，放入培养皿，盖上盖子，将采样器采样口置于采样点后， 开启采样器进行釆样。 4.6.3.2采样器操作方法：按浮游菌釆样器操作规程WI-03-W-01-14采样。 4.6.33最少釆样点数目及其布置： a.最少采样点数目： 而积 (m2) 洁净度级别 100 10 000 100 000 300 000 10 23 2 2 2 N10V20 4 2 2 2 M20V40 8 2 2 2 M40V100 16 4 10 20 2 3 6 2 3 6 M 100 V

9、 200 N200V400 40 80 N 400 V 1000 160 40 13 13 M 1000 V 2000 400 100 32 32 $2000 800 200 63 63 注：表中的而积，对于100级的净化工作台，指的是送风口而积；对于10 000 级，100000级的非单向流洁净室， 指的是房间而积。 恩施金凰新材料有限公司 文件编号 WI-03-21 版号 A.0 洁净室（区）浮游菌检验方法 贞次 4/6 生效日期 2020/01/02 0 b.采样点的布置: *为采样点 4.63.4釆样点位置 a）工作区测点位置离地0.81.5m左右（略髙于工作面） b）送风口测点位置离

10、开送风面30cm左右 O可在关键设备或关键工作活动范甫处增加测点 注：仪器采样量为每分钟50升 4.63.5釆样时间及最少采样量： 洁净级别 100级 10 000 级 100 000 级 300 000 级 采样量（L/次） 1000 500 100 100 采样时间（min） 20 10 2 2 4.6.3.6釆样次数 每个采样点采样一次 4.63.7釆样注意事项 a）对于单向流或送风口，采样器采样管朝向应正对气流方向：对于非单向流，采样管口向上； b）布置采样点时，至少应离开尘粒较集中的回风口 lm以上： c）釆样时，测试人员应站在采样口的下风侧，并尽量少走动： d）应防止采样过程的污染和其他可能对样本的污染； 4.6.4培养 全部采样结束后的培养IDL,倒宜于30C35C恒温培养箱中，培养48h。 4.6.5阴性对照 培养皿在用于检测时，为避免培养皿运输或搬运过程造成的影响，采样同时进行阴性对照试验，每 次放2个对照皿，与采样皿同法操作但不许暴露采样.然后与采样皿一起放入培养箱内培养，结果 应无菌落生长。 4.6.6菌落计数 4.6.6.1用肉眼直接计数，然后用510倍放大镜检查，是否有遗漏。 4.6.6.2若平板上有2个或2个以上的菌落重叠.可分辨时仍以2个或2个以上菌落计数。 恩施金凰新材料有限公司 文件编号 WI-03-21 版号 A.0 洁净