高中生物微生物的培养

1、 1.1.了解有关培养基的基础知识，掌握无菌操作技术的有关内容。了解有关培养基的基础知识，掌握无菌操作技术的有关内容。 2.2.了解消毒和灭菌常用的方法及二者的区别。了解消毒和灭菌常用的方法及二者的区别。 3.3.学会以大肠杆菌为材料进行微生物培养与分离纯化的方法。学会以大肠杆菌为材料进行微生物培养与分离纯化的方法。 一一 目标导航目标导航 一、培养基与无菌技术一、培养基与无菌技术 1 1培养基培养基 (1)(1)概念：人们按照微生物对概念：人们按照微生物对_的不同需求，配制的不同需求，配制 出供其出供其_的的_。 (2)(2)成分：一般含有成分：一般含有_、_、_、_，此，此 外还要满足微生

2、物对外还要满足微生物对_(_(即生长因子即生长因子) )、 _以及氧气的需求。以及氧气的需求。 营养物质营养物质 生长繁殖生长繁殖营养基质营养基质 水水无机盐无机盐 碳源碳源氮源氮源 特殊营养物质特殊营养物质 phph 营养营养 物质物质 定义定义作用作用主要来源主要来源 碳源碳源 能提供所需能提供所需 _的物质的物质 构成生物体的构成生物体的_和和 一些一些_，有些是异，有些是异 养生物的养生物的_ 无机化合物无机化合物：co2co2、 nahco3nahco3等；等；有机化合物有机化合物： 糖类、脂肪酸、花生粉糖类、脂肪酸、花生粉 饼、石油等饼、石油等 氮源氮源 能提供所需能提供所需 _的

3、物质的物质 合成合成蛋白质、核酸以及含蛋白质、核酸以及含 氮的代谢产物氮的代谢产物 无机化合物无机化合物：n2n2、nh3nh3、 铵盐、硝酸盐等；铵盐、硝酸盐等；有机有机 化合物化合物：尿素、牛肉膏、：尿素、牛肉膏、 蛋白胨等蛋白胨等 生长生长 因子因子 生长必不可少的生长必不可少的 _ 酶和核酸酶和核酸的组成成分的组成成分 维生素、氨基酸、碱基维生素、氨基酸、碱基 等等 水水 在生物体内含量在生物体内含量 很高，在低等生很高，在低等生 物体内含量更高物体内含量更高 不仅是优良的溶剂，而且不仅是优良的溶剂，而且 可维持生物大分子结构的可维持生物大分子结构的 稳定稳定 无机无机 盐盐 为微生物

4、提供除为微生物提供除 碳、氮以外的各碳、氮以外的各 种重要元素种重要元素 细胞内的组成成分，生理细胞内的组成成分，生理 调节物质，某些化能自养调节物质，某些化能自养 菌的能源，酶的激活剂菌的能源，酶的激活剂 微量有机物微量有机物 碳元素碳元素 细胞物质细胞物质 代谢产物代谢产物 能源物质能源物质 氮元素氮元素 (1)不同种类的微生物，对碳源的需要差别较大。不同种类的微生物，对碳源的需要差别较大。 (2)微生物最常利用的碳源是糖类，尤其是葡萄糖；最常利用微生物最常利用的碳源是糖类，尤其是葡萄糖；最常利用 的氮源是铵盐、硝酸盐。的氮源是铵盐、硝酸盐。 (3)对异养微生物来说，含对异养微生物来说，含

5、 c、h、o、n 的化合物既是碳源又的化合物既是碳源又 是氮源和能量来源。是氮源和能量来源。 (4)微生物之所以需要补充生长因子，往往是由于缺乏合成微生物之所以需要补充生长因子，往往是由于缺乏合成 这些物质所需要的酶或合成能力有限。这些物质所需要的酶或合成能力有限。 备注：备注： 拓展深化拓展深化 .葡萄糖、氨基酸、氨气、牛肉膏、玉米粉等物质在微生物营养中葡萄糖、氨基酸、氨气、牛肉膏、玉米粉等物质在微生物营养中 的作用？的作用？ 葡萄糖葡萄糖 提供提供c源和能源源和能源,构成生物体的细胞物质和代谢产物构成生物体的细胞物质和代谢产物. 氨基酸氨基酸提供生长因子提供生长因子,n源源,c源和能源源和

6、能源 氨气氨气 提供提供n源和能源（硝化细菌的化能合成作用）源和能源（硝化细菌的化能合成作用） 微生物培养与植物组织培养的营养成分区别？微生物培养与植物组织培养的营养成分区别？ 大肠杆菌、硝化细菌、乳酸菌等微生物营养类型。大肠杆菌、硝化细菌、乳酸菌等微生物营养类型。 牛肉膏牛肉膏 天然培养基，主要提供天然培养基，主要提供c源源、磷酸盐和维生素磷酸盐和维生素、n源。源。 玉米粉玉米粉 主要提供主要提供c源与能量源与能量 植物组织培养植物组织培养微生物培养微生物培养 培养培养 基成基成 分分 水、矿质元素、蔗糖、维生素、水、矿质元素、蔗糖、维生素、 有机添加物和植物激素等有机添加物和植物激素等 水

7、、无机盐、碳源、水、无机盐、碳源、 氮源等氮源等 大肠杆菌：异养兼性厌氧型大肠杆菌：异养兼性厌氧型硝化细菌：自养需氧型硝化细菌：自养需氧型 乳酸菌：异养厌氧型乳酸菌：异养厌氧型 根据不同的微生物营养类型不同，选择配制不同的培养基。根据不同的微生物营养类型不同，选择配制不同的培养基。 由由可以得到什么结论？可以得到什么结论？ 1不同的微生物对营养物质的需要各不相同。下列有关一种以不同的微生物对营养物质的需要各不相同。下列有关一种以 co2为唯一碳源的自养微生物营养的描述中，不正确的是为唯一碳源的自养微生物营养的描述中，不正确的是() a氮源物质为该微生物提供必要的氮素氮源物质为该微生物提供必要的

8、氮素 b碳源物质也是该微生物的能源物质碳源物质也是该微生物的能源物质 c无机盐是该微生物不可缺少的营养物质无机盐是该微生物不可缺少的营养物质 d水是该微生物的营养要素之一水是该微生物的营养要素之一 营养型营养型碳源碳源氮源氮源生长因子生长因子举例举例 自养型自养型 微生物微生物 co2、nahco3 n2、nh3、铵、铵 盐、盐、硝酸盐等硝酸盐等 一般不需一般不需 要要 硝化细菌硝化细菌 异养型异养型 微生物微生物 糖类、脂肪酸等糖类、脂肪酸等 铵盐、硝酸盐、铵盐、硝酸盐、 蛋白胨等蛋白胨等 有些种类有些种类 需要需要 乳酸菌乳酸菌 自养微生物与异养微生物的营养什么区别呢？自养微生物与异养微生

9、物的营养什么区别呢？ (3) (3)培养基的种类培养基的种类 划分划分 标准标准 培养基种类培养基种类特点特点用途用途 物理物理 性质性质 _培养基培养基 加凝固剂，如加凝固剂，如 _ 半固体培养基半固体培养基观察微生物的运动、分类、鉴定观察微生物的运动、分类、鉴定 _培养基培养基 微生物微生物_、_、活菌计数、活菌计数、 保藏菌种保藏菌种 化学化学 成分成分 _培养基培养基 含化学成分不明确的含化学成分不明确的 天然物质天然物质 工业生产工业生产 _培养基培养基 培养基成分明确培养基成分明确(用化学成分用化学成分 已知的化学物质配成已知的化学物质配成) 分类、鉴定分类、鉴定 用用 途途 _培

10、养基培养基 培养基中加入某种化学物质，培养基中加入某种化学物质， 以以_ _不需要的微生不需要的微生 物的生长，物的生长，_ 所需要的所需要的 微生物的生长微生物的生长 培养、培养、_出特定微生物出特定微生物(如培养酵如培养酵 母菌和霉菌，可在培养基中加入青母菌和霉菌，可在培养基中加入青 霉素或链霉素；培养固氮菌可用无霉素或链霉素；培养固氮菌可用无 氮培养基氮培养基) _培养基培养基 根据微生物的代谢特点，在根据微生物的代谢特点，在 培养基中加入某种指示剂或培养基中加入某种指示剂或 化学药品化学药品 _不同种类的微生物，如可用伊不同种类的微生物，如可用伊 红红美蓝培养基鉴别饮用水或乳制美蓝培养

11、基鉴别饮用水或乳制 品中是否有大肠杆菌品中是否有大肠杆菌(若有，菌落呈若有，菌落呈 深紫色，并带有金属光泽深紫色，并带有金属光泽) 液体液体 固体固体 工业生产工业生产 分离分离 鉴定鉴定 琼脂琼脂 天然天然 合成合成 选择选择抑制抑制 促进促进 分离分离 鉴别鉴别 鉴别鉴别 纯化大肠杆菌、分离分解尿素微生物、分离细菌与真菌混合菌纯化大肠杆菌、分离分解尿素微生物、分离细菌与真菌混合菌 的培养基类型是什么？的培养基类型是什么？ 拓展深化拓展深化 病毒目前的利用人工培养基来培养方法？病毒目前的利用人工培养基来培养方法？ 需接种在动、植物组织细胞中才能繁殖。常用于培养病毒的是活需接种在动、植物组织细

12、胞中才能繁殖。常用于培养病毒的是活 鸡胚。鸡胚。 2 2下列说法正确的是下列说法正确的是( () ) a a培养基是为微生物的生长繁殖提供营养的基质培养基是为微生物的生长繁殖提供营养的基质 b b培养基只有两类：液体培养基和固体培养基培养基只有两类：液体培养基和固体培养基 c c除水以外的无机物只能提供无机盐除水以外的无机物只能提供无机盐 d d无机氮源不可能提供能量无机氮源不可能提供能量 选择培养基选择培养基 植物组织培养技术、微生物培养技术和无土栽培技术植物组织培养技术、微生物培养技术和无土栽培技术 的比较的比较 植物组织培养植物组织培养微生物培养微生物培养无土栽培无土栽培 含义含义 培养

13、培养 基成基成 分分 特殊特殊 操作操作 要求要求 在在无菌条件无菌条件下，将下，将离体离体 的植物体器官或组织的植物体器官或组织接接 种在适当的培养基上进种在适当的培养基上进 行培养，最终发育成完行培养，最终发育成完 整整植物体植物体 在在无菌条件无菌条件下，下， 在适宜的营养和在适宜的营养和 环境条件下环境条件下对微对微 生物的培养生物的培养 将植物生长发育过程将植物生长发育过程 中所需中所需各种矿质元素各种矿质元素 按一定比例配成营养按一定比例配成营养 液液，并利用这种营养，并利用这种营养 液液栽培植物栽培植物 水水、矿质元素矿质元素、蔗糖蔗糖、 维生素维生素、有机添加物有机添加物 和和

14、植物激素植物激素等等 水水、无机盐无机盐、碳碳 源源、氮源氮源（异养（异养 微生物还加生长微生物还加生长 因子）因子）等等 水水、必需矿质元素必需矿质元素 严格控制无菌操作严格控制无菌操作，在培，在培 养过程中要养过程中要更换培养基更换培养基， 调节调节细胞分裂素和生长素细胞分裂素和生长素 的比例的比例和和添加顺序添加顺序。 严格控制无菌操严格控制无菌操 作作，整个培养过，整个培养过 程程无需更换培养无需更换培养 基基 适宜的环境条件，基质适宜的环境条件，基质 垫底并固定幼苗，垫底并固定幼苗，不需不需 要保证无菌条件，要保证无菌条件，注意注意 溶氧和矿质元素的浓度溶氧和矿质元素的浓度。 3.3

15、.下列关于植物组织培养、微生物培养和无土栽培技术的比较的下列关于植物组织培养、微生物培养和无土栽培技术的比较的 有关说法中，不正确的是有关说法中，不正确的是（ ） a a 微生物培养和无土栽培技无需更换培养基，植物组织培养需微生物培养和无土栽培技无需更换培养基，植物组织培养需 更换培养基更换培养基 b b 植物组织培养、微生物培养需要严格控制无菌操作，植植物组织培养、微生物培养需要严格控制无菌操作，植 物组织培养不需要物组织培养不需要 c c 三者都需要加入水、矿质元素和一些必要的有机物三者都需要加入水、矿质元素和一些必要的有机物 d d 三者培养的目的和原理各不相同三者培养的目的和原理各不相

16、同 1.加入青霉素的培养基加入青霉素的培养基: 分离酵母菌、霉菌等真菌分离酵母菌、霉菌等真菌 2.加入高浓度食盐的培养基加入高浓度食盐的培养基: 分离金黄色葡萄球菌分离金黄色葡萄球菌 3.不加氮源的无氮培养基不加氮源的无氮培养基: 分离固氮菌分离固氮菌 4.不加含碳有机物的无碳培养基不加含碳有机物的无碳培养基: 分离自养型微生物分离自养型微生物 5.如何鉴定饮用水和奶制品中含有大肠杆菌？如何鉴定饮用水和奶制品中含有大肠杆菌？ 加入伊红加入伊红-美蓝试剂，如果菌落出现深紫美蓝试剂，如果菌落出现深紫 色并伴有金属光泽，就证明有大肠杆菌。色并伴有金属光泽，就证明有大肠杆菌。 【配对练习 2】关于配制

17、培养基的叙述中，正确的是() a制作固体培养基必须加入琼脂 b加入青霉素可得到放线菌 c培养自生固氮菌不需氮源 d发酵工程一般用半固体培养基 解析：固体培养基需加入凝固剂，琼脂是常用的，但不是 唯一的；青霉素可抑制细菌和放线菌的生长；发酵工程一般用 液体培养基；自生固氮菌能够将空气中的氮还原成氨，故培养 基配制时不需加氮源。 答案：c (1)概念：防止一切外来杂菌的侵入，并保持灭菌物品及无菌区域不再被污染的概念：防止一切外来杂菌的侵入，并保持灭菌物品及无菌区域不再被污染的 方法，称为无菌技术。方法，称为无菌技术。 注意在微生物的实验室培养中，无菌技术的核心是注意在微生物的实验室培养中，无菌技术

18、的核心是_， _。 (2)无菌技术的具体内容无菌技术的具体内容 对实验操作的对实验操作的_、操作者的、操作者的_进行清洁和消毒。进行清洁和消毒。 将用于微生物培养的将用于微生物培养的_、接种用具和培养基等进行、接种用具和培养基等进行_。 为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在_进行。进行。 实验操作时应避免已实验操作时应避免已_处理的材料用具与周围的物品相接触。处理的材料用具与周围的物品相接触。 (3)消毒和灭菌的概念消毒和灭菌的概念 消毒：消毒是指使用消毒：消毒是指使用_的物理或化学方法杀死物体表面或内部的的物理或化学方法杀死物体表面或内部的 _

19、(不包括芽孢和孢子不包括芽孢和孢子)。 灭菌：灭菌是指使用灭菌：灭菌是指使用_的理化因素杀死物体内外的理化因素杀死物体内外 _，包括，包括_。 消毒与灭菌的区别：两者最大的区别是消毒与灭菌的区别：两者最大的区别是_。 2无菌技术无菌技术 防止杂菌污染防止杂菌污染 保证培养的纯度保证培养的纯度 空间空间 衣着和手衣着和手 器皿器皿灭菌灭菌 酒精灯火焰附近酒精灯火焰附近 灭菌灭菌 较温和较温和 部分微生物部分微生物 强烈强烈 所有的微生物所有的微生物芽孢和孢子芽孢和孢子 芽孢和孢子是否存活芽孢和孢子是否存活 拓展深化拓展深化 某些细菌在其生长发育后期，可在细胞内形成一个圆形的抗逆性休眠体，称为芽某

20、些细菌在其生长发育后期，可在细胞内形成一个圆形的抗逆性休眠体，称为芽 孢。每个细菌细胞仅形成一个芽孢，故它无繁殖功能。芽孢有极强的抗热、抗辐孢。每个细菌细胞仅形成一个芽孢，故它无繁殖功能。芽孢有极强的抗热、抗辐 射、抗化学药物和抗静水压的能力。芽孢的休眠能力十分惊人，可保持几年到几射、抗化学药物和抗静水压的能力。芽孢的休眠能力十分惊人，可保持几年到几 十年的生活力。十年的生活力。 孢子是微生物产生的一种有繁殖或休眠作用的细胞。一般是单细胞，个体微小，孢子是微生物产生的一种有繁殖或休眠作用的细胞。一般是单细胞，个体微小， 通常是适应于从不利环境条件中存活下来，并在条件改变时产生新的营养体，能通常

21、是适应于从不利环境条件中存活下来，并在条件改变时产生新的营养体，能 直接发育成新个体。直接发育成新个体。 (4)消毒与灭菌的常用方法消毒与灭菌的常用方法 方法方法条件条件作用对象作用对象 消消 毒毒 100，煮沸，煮沸56 min 杀死微生物的营养细胞和一杀死微生物的营养细胞和一 部分芽孢部分芽孢 7075煮煮30 min或或80煮煮15 min不耐高温的液体不耐高温的液体（如牛奶如牛奶） 70%的酒精的酒精对双手消毒对双手消毒 50%的石炭酸、来苏水的石炭酸、来苏水对空气消毒对空气消毒 一定浓度的乳酸、食醋一定浓度的乳酸、食醋通过熏蒸对空气进行消毒通过熏蒸对空气进行消毒 紫外紫外 线法线法

22、紫外线照射紫外线照射30 min物体表面或空气中的微生物物体表面或空气中的微生物 煮沸法煮沸法 巴氏消巴氏消 毒法毒法 化学药化学药 剂法剂法 灭灭 菌菌 在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧 对接种环、接种针或其他金属对接种环、接种针或其他金属 工具灭菌，也可以对试管口、工具灭菌，也可以对试管口、 瓶口灭菌瓶口灭菌 在干热灭菌箱内，在干热灭菌箱内，160170条条 件下，加热件下，加热12 h 耐高温且需保持干燥的物品，耐高温且需保持干燥的物品， 如玻璃器皿和金属用具等如玻璃器皿和金属用具等 在高压蒸汽灭菌锅内，在高压蒸汽灭菌锅内，121， 100 kpa，灭菌，灭菌15

23、30 min 30 w照射照射30 min小型接种室、接种箱等小型接种室、接种箱等 紫外线紫外线 灭菌灭菌 灼烧灼烧 灭菌灭菌 干热干热 灭菌灭菌 高压蒸高压蒸 汽灭菌汽灭菌 (一一)配制培养基配制培养基 1配制原则配制原则 (1)_(根据微生物的种类、培养目的等根据微生物的种类、培养目的等)，如培养基可由简单的无，如培养基可由简单的无 机物组成；生产用培养基内可加入化学成分不明确的天然物质，而分类鉴定用机物组成；生产用培养基内可加入化学成分不明确的天然物质，而分类鉴定用 培养基内必须加入已知化学成分的物质。培养基内必须加入已知化学成分的物质。 (2)_，注意各种营养物质的浓度和比例。，注意各

24、种营养物质的浓度和比例。 (3)_，各种微生物适宜生长的，各种微生物适宜生长的ph范围不同，细菌范围不同，细菌6.57.5、放线、放线 菌菌7.58.5、真菌、真菌5.06.0。 二、实验操作二、实验操作 目的要明确目的要明确 营养要协调营养要协调 ph要适宜要适宜 判断下列各项是否需要消毒或灭菌。如需要，判断下列各项是否需要消毒或灭菌。如需要， 选择合适方法。选择合适方法。 （1 1）豆浆）豆浆 （2 2）游泳池）游泳池 （3 3）超净工作台）超净工作台 （4 4）玻棒、试管、吸管、锥形瓶）玻棒、试管、吸管、锥形瓶 （5 5）培养细菌用的培养皿）培养细菌用的培养皿 （6 6）无菌水）无菌水

25、（7 7）牛肉膏蛋白胨培养基）牛肉膏蛋白胨培养基 （8 8）接种针和接种环）接种针和接种环 （9 9）实验操作者的双手）实验操作者的双手 灭菌灭菌（灼烧）（灼烧） 消毒消毒（巴氏）（巴氏）消毒消毒（化学）（化学） 消毒消毒（先化学后紫外线）（先化学后紫外线） 消毒消毒（化学）（化学） 消毒消毒（化学）（化学） 灭菌灭菌（干热）（干热） 灭菌灭菌（高压蒸汽）（高压蒸汽） 灭菌灭菌（高压蒸汽）（高压蒸汽） ) 【例 3】下列操作与灭菌无关的是( a接种前用火焰灼烧接种环 b接种前用酒精擦拭双手 c接种在酒精灯火焰旁完成 d将平板倒置，放入培养箱中培养 无菌操作是微生物培养的必要前提，学生必 须树立

26、“无菌概念”。前三项都是无菌操作的规范要求，第四 项将平板倒置(为了防止皿盖上的冷凝水落入培养基中，造成污 染)，放入培养箱中培养与灭菌无关。 【答案】：d 注意注意 不同微生物对营养需求不同，因此，首先根据不同微生物的营养需求配制针对性强不同微生物对营养需求不同，因此，首先根据不同微生物的营养需求配制针对性强 的培养基。的培养基。 营养物质浓度过低不能满足微生物营养需要，过高对微生物的生长有抑制作用，另外，营养物质浓度过低不能满足微生物营养需要，过高对微生物的生长有抑制作用，另外， 培养基中各营养物质浓度比直接影响微生物的生长繁殖和代谢产物的形成和积累，其中培养基中各营养物质浓度比直接影响微

27、生物的生长繁殖和代谢产物的形成和积累，其中 碳氮比碳氮比(c/n)的影响较大。例如，在谷氨酸生产中，当培养基中的碳源与氮源的比为的影响较大。例如，在谷氨酸生产中，当培养基中的碳源与氮源的比为4 1 时，菌体大量繁殖，而产生的谷氨酸少；当碳源与氮源的比为时，菌体大量繁殖，而产生的谷氨酸少；当碳源与氮源的比为3 1时，菌体繁殖受抑制，时，菌体繁殖受抑制， 但谷氨酸合成量大增。但谷氨酸合成量大增。 2配制方法配制方法(以制备牛肉膏蛋白胨固体培养基为例以制备牛肉膏蛋白胨固体培养基为例) 培养基组分培养基组分 提供的主要营养物质提供的主要营养物质 牛肉膏牛肉膏5.0 g碳源、磷酸盐和维生素碳源、磷酸盐和

28、维生素 蛋白胨蛋白胨10.0 g氮源和维生素氮源和维生素 nacl 5.0 g无机盐无机盐 h2o定容至定容至1 000 ml氢元素、氧元素氢元素、氧元素 琼脂琼脂 (1)培养异养菌的牛肉膏蛋白胨固体培养基的营养构成培养异养菌的牛肉膏蛋白胨固体培养基的营养构成 (2)实验流程实验流程 倒平板倒平板 计算计算 称量称量 溶化溶化 调节调节ph 分装分装 灭菌灭菌 先加牛肉膏少量水，加热，溶化取出称量先加牛肉膏少量水，加热，溶化取出称量 纸；再加蛋白胨和氯化钠，玻棒搅拌溶解；纸；再加蛋白胨和氯化钠，玻棒搅拌溶解； 加琼脂，玻棒搅拌，完全熔化，补加蒸馏加琼脂，玻棒搅拌，完全熔化，补加蒸馏 水至水至1

29、00100毫升。毫升。 合格的培养基必须灭菌效果好。培养基配制好后，要放在恒温箱中合格的培养基必须灭菌效果好。培养基配制好后，要放在恒温箱中 保温保温12 d，若无菌落生长则说明制备的培养基是合格的。，若无菌落生长则说明制备的培养基是合格的。 提醒提醒 4下列为某同学在培养金黄色葡萄球菌实验中的部分操作步骤，其中正下列为某同学在培养金黄色葡萄球菌实验中的部分操作步骤，其中正 确的是确的是() a培养基中蛋白胨、牛肉膏溶化后，直接补充蒸馏水至培养基中蛋白胨、牛肉膏溶化后，直接补充蒸馏水至100 ml b培养基配制完毕可直接使用培养基配制完毕可直接使用 c加压至加压至100 kpa之前，要彻底排出

30、锅内的冷空气之前，要彻底排出锅内的冷空气 d将接种环放在酒精灯火焰上灼烧，灭菌后立即伸入菌液试管内挑取少将接种环放在酒精灯火焰上灼烧，灭菌后立即伸入菌液试管内挑取少 量菌种量菌种 纯化大肠杆菌就是为了获得大肠杆菌的纯种菌落，这需在培养时，尽量使菌落中纯化大肠杆菌就是为了获得大肠杆菌的纯种菌落，这需在培养时，尽量使菌落中 的菌体来自于一个大肠杆菌的分裂，即这个菌落的细菌群体由一个大肠杆菌繁殖的菌体来自于一个大肠杆菌的分裂，即这个菌落的细菌群体由一个大肠杆菌繁殖 而来，这就需接种时尽量接种单个的大肠杆菌。而来，这就需接种时尽量接种单个的大肠杆菌。 (二二)纯化大肠杆菌纯化大肠杆菌 1微生物接种的方

31、法微生物接种的方法 微生物接种的方法最常用的是微生物接种的方法最常用的是_和和_两两 种。种。 (1)_通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操 作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。 将将_放在酒精灯火焰上灼烧，直到接种环烧红。放在酒精灯火焰上灼烧，直到接种环烧红。 在火焰旁冷却接种环，并打开盛有菌液的试管的在火焰旁冷却接种环，并打开盛有菌液的试管的_。 将试管口通过酒精灯的将试管口通过酒精灯的_。 将已冷却的接种环伸入菌液中，将已冷却的接种环伸入菌液中，_一环菌液。一环菌液。 将试管口通过酒精灯的

32、火焰，并迅速塞上棉塞。将试管口通过酒精灯的火焰，并迅速塞上棉塞。 _将培养皿皿盖打开一条缝隙，将培养皿皿盖打开一条缝隙，_将沾有菌种的将沾有菌种的 接种环迅速伸入接种环迅速伸入_，划三至五条平行线，盖上皿盖。注意，划三至五条平行线，盖上皿盖。注意 不要划破培养基。不要划破培养基。 灼烧接种环，待其冷却后，从第一区域划线的末端开始往第二区灼烧接种环，待其冷却后，从第一区域划线的末端开始往第二区 域内划线。重复以上操作，在三、四、五区域内划线。注意不要将域内划线。重复以上操作，在三、四、五区域内划线。注意不要将 _的划线与的划线与_相连。相连。 将将_，放入培养箱中培养。，放入培养箱中培养。 平板

33、划线法平板划线法稀释涂布平板法稀释涂布平板法 平板划线法平板划线法 接种环接种环 棉塞棉塞 火焰火焰 沾取沾取 左手左手右手右手 平板内平板内 最后一区最后一区第一区第一区 平板倒置平板倒置 (2)_则是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将则是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将 不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。 系列稀释操作系列稀释操作 a取盛有取盛有9 ml水的水的6支试管灭菌，并按支试管灭菌，并按101106的顺序编号。的顺序编号。 b用用_吸取吸取1 ml培养的菌液，注入培养的菌液，注入101倍稀释的试管中

34、。倍稀释的试管中。 用手指轻压移液管上的橡皮头，吹吸三次，使菌液与水充分混匀。用手指轻压移液管上的橡皮头，吹吸三次，使菌液与水充分混匀。 c从从101倍稀释的试管中吸取倍稀释的试管中吸取1 ml稀释液，注入稀释液，注入102倍稀释的试管倍稀释的试管 内吹吸均匀，获得内吹吸均匀，获得102倍液。依此类推。倍液。依此类推。 涂布平板操作涂布平板操作 a将将_浸在盛有酒精的烧杯中。浸在盛有酒精的烧杯中。 b取不超过取不超过0.1 ml的的_，滴加到培养基表面。，滴加到培养基表面。 c将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃，待酒精燃尽后，冷却将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃，待酒精燃尽后，冷却 810

35、s。 d用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。涂布时可转动培养用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。涂布时可转动培养 皿，使菌液分布均匀。皿，使菌液分布均匀。 稀释涂布平板法稀释涂布平板法 移液管移液管 涂布器涂布器 菌液菌液 2注意事项注意事项 (1)平板划线法平板划线法 操作第一步即取菌种之前及每次划线之前都需要进行操作第一步即取菌种之前及每次划线之前都需要进行_， 划线操作结束时，仍需灼烧划线操作结束时，仍需灼烧_。 从第二次以后的划线操作总是从从第二次以后的划线操作总是从_开始，能使细菌的数目开始，能使细菌的数目 随着划线次数的增加逐渐减少，最终得到由单个细菌繁殖而来的菌落随着划线次数

36、的增加逐渐减少，最终得到由单个细菌繁殖而来的菌落 (2)稀释涂布平板法稀释涂布平板法 稀释涂布平板的操作比较复杂，且各个细节均需保证稀释涂布平板的操作比较复杂，且各个细节均需保证“_”，应特，应特 别注意：别注意： 酒精灯与培养皿的距离要合适。酒精灯与培养皿的距离要合适。吸管头不要接触任何其他物体。吸管头不要接触任何其他物体。 吸管要在酒精灯火焰周围使用。吸管要在酒精灯火焰周围使用。 3微生物分离纯化培养的结果作出分析与评价微生物分离纯化培养的结果作出分析与评价 (1)培养未接种培养基的作用是对照培养未接种培养基的作用是对照，若有菌落形成，说明培养基灭菌不彻底。，若有菌落形成，说明培养基灭菌不

37、彻底。 (2)在肉汤培养基上，在肉汤培养基上，大肠杆菌菌落呈白色，为圆形，光滑有光泽，边缘整齐大肠杆菌菌落呈白色，为圆形，光滑有光泽，边缘整齐。 (3)培养培养12 h和和24 h后的菌落大小不同，菌落分布位置相同。原因是时间越长，后的菌落大小不同，菌落分布位置相同。原因是时间越长， 菌落中细菌繁殖越多，菌落体积越大，而菌落的位置不动，只是菌落数增多。菌落中细菌繁殖越多，菌落体积越大，而菌落的位置不动，只是菌落数增多。 (4)频繁使用的菌种利用频繁使用的菌种利用临时保藏法临时保藏法保存，长期保存菌种的方法是保存，长期保存菌种的方法是甘油管藏法甘油管藏法。 前者利用固体斜面培养基培养后，保存在前

38、者利用固体斜面培养基培养后，保存在4冰箱中，第冰箱中，第36个月转种培养一个月转种培养一 次，缺点是保存时间较短，菌种容易被污染或产生变异；后者将菌种与无菌甘次，缺点是保存时间较短，菌种容易被污染或产生变异；后者将菌种与无菌甘 油等量混合后保存在油等量混合后保存在20的冷冻箱中。的冷冻箱中。 火焰灼烧灭菌火焰灼烧灭菌 接种环接种环 上一次划线末端上一次划线末端 无菌无菌 4菌种的保存菌种的保存 为了保持菌种的纯净，需对菌种进行保藏。对于频繁使用的菌种，为了保持菌种的纯净，需对菌种进行保藏。对于频繁使用的菌种， 我们可以采用我们可以采用_法；对于需要长期保存的菌种，法；对于需要长期保存的菌种，

39、可以采用可以采用_法。将菌种放在低温环境中保藏的目法。将菌种放在低温环境中保藏的目 的是的是_，但时间长了菌种还是要老化，但时间长了菌种还是要老化 的，因此对临时保存的菌种的，因此对临时保存的菌种_个月后需重新接种。个月后需重新接种。 4有关平板划线操作的叙述，不正确的是有关平板划线操作的叙述，不正确的是() a第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染 培养物培养物 b每次划线前，灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环每次划线前，灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环 上的菌种上的菌种 c在第二区域内划线时，接种环上的

40、菌种直接来源于菌液在第二区域内划线时，接种环上的菌种直接来源于菌液 d划线结束后，灼烧接种环，能及时杀死接种环上的菌种，避免划线结束后，灼烧接种环，能及时杀死接种环上的菌种，避免 细菌污染环境和感染操作者细菌污染环境和感染操作者 临时保藏临时保藏 甘油管藏甘油管藏 降低微生物的新陈代谢速率降低微生物的新陈代谢速率 36 一、选择题一、选择题 1关于制备牛肉膏蛋白胨固体培养基，叙述错误的是关于制备牛肉膏蛋白胨固体培养基，叙述错误的是() a操作顺序为计算、称量、溶化、倒平板、灭菌操作顺序为计算、称量、溶化、倒平板、灭菌 b将称好的牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯将称好的牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯c

41、待培养基冷却至待培养基冷却至 50左右时进行倒平板左右时进行倒平板 d待平板冷却凝固约待平板冷却凝固约510 min后，将平板倒过来放置后，将平板倒过来放置 2金黄色葡萄球菌有很强的致病力，常引起骨髓炎等，还可能引金黄色葡萄球菌有很强的致病力，常引起骨髓炎等，还可能引 起食物中毒，下述实验结束后的做法错误的是起食物中毒，下述实验结束后的做法错误的是() a对接种环进行灼烧处理对接种环进行灼烧处理b带菌培养基必须经高压蒸汽灭菌锅带菌培养基必须经高压蒸汽灭菌锅 灭菌后才能倒掉灭菌后才能倒掉 c带菌培养基必须经加热后才能倒掉带菌培养基必须经加热后才能倒掉 d接种后双手必须经肥皂洗净，再用接种后双手必

42、须经肥皂洗净，再用75%的酒精棉球擦拭的酒精棉球擦拭 3防止杂菌入侵，获得纯净的培养物，是研究和应用微生物的前防止杂菌入侵，获得纯净的培养物，是研究和应用微生物的前 提。下列叙述错误的是提。下列叙述错误的是() a实验室里可以用紫外线或化学药物进行消毒实验室里可以用紫外线或化学药物进行消毒 b接种环、接种针等金属用具，直接在酒精灯火焰的内焰部位灼接种环、接种针等金属用具，直接在酒精灯火焰的内焰部位灼 烧灭菌烧灭菌 c在实验室中，切不可吃东西、喝水，离开实验室时一定要洗手，在实验室中，切不可吃东西、喝水，离开实验室时一定要洗手， 以防止被微生物感染以防止被微生物感染 d使用后的培养基丢弃前一定要

43、进行灭菌处理，以免污染环境使用后的培养基丢弃前一定要进行灭菌处理，以免污染环境 4下列叙述错误的是下列叙述错误的是() a右手拿装有培养基的锥形瓶，左手拔出棉塞，为避免污染需放右手拿装有培养基的锥形瓶，左手拔出棉塞，为避免污染需放 在酒精灯火焰附近在酒精灯火焰附近 b倒平板整个过程应在火焰旁进行倒平板整个过程应在火焰旁进行 c打开培养皿盖，右手将锥形瓶中的培养基倒入培养皿，左手立打开培养皿盖，右手将锥形瓶中的培养基倒入培养皿，左手立 即盖上培养皿的皿盖即盖上培养皿的皿盖 d为避免水滴滴入培养基，平板应倒过来放置为避免水滴滴入培养基，平板应倒过来放置 5有关稀释涂布平板法的说法中，错误的是有关稀

44、释涂布平板法的说法中，错误的是() a用移液管把菌液从一支试管转移到下一支试管后，要用手指轻用移液管把菌液从一支试管转移到下一支试管后，要用手指轻 压移液管的橡皮头，吹吸三次，目的是使菌液与水充分混匀压移液管的橡皮头，吹吸三次，目的是使菌液与水充分混匀 b移液管需经过灭菌移液管需经过灭菌 c试管口与移液管应在离火焰试管口与移液管应在离火焰12 cm处处 d涂布时可转动涂布器，使菌液涂布均匀涂布时可转动涂布器，使菌液涂布均匀 6以下关于制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的操作顺序正确的是以下关于制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的操作顺序正确的是 a计算计算称量称量倒平板倒平板溶化溶化灭菌灭菌 b计算计算称量称

45、量溶化溶化倒平板倒平板灭菌灭菌 c计算计算称量称量溶化溶化灭菌灭菌倒平板倒平板 d计算计算称量称量灭菌灭菌溶化溶化倒平板倒平板 7为了保持菌种的纯净，需要进行菌种的保藏，下列有关叙述不为了保持菌种的纯净，需要进行菌种的保藏，下列有关叙述不 正确的是正确的是() a对于频繁使用的菌种，可以采用临时保藏的方法对于频繁使用的菌种，可以采用临时保藏的方法 b临时保藏的菌种一般是接种到试管的斜面培养基上临时保藏的菌种一般是接种到试管的斜面培养基上 c临时保藏的菌种容易被污染或产生变异临时保藏的菌种容易被污染或产生变异 d对于需要长期保存的菌种，可以采用低温对于需要长期保存的菌种，可以采用低温4保藏的方法

46、保藏的方法 8有关平板划线操作的叙述，正确的是有关平板划线操作的叙述，正确的是() a使用已灭菌的接种环、培养皿，操作过程中不再灭菌使用已灭菌的接种环、培养皿，操作过程中不再灭菌 b打开含菌种的试管需通过火焰灭菌，取出菌种后需马上塞上棉打开含菌种的试管需通过火焰灭菌，取出菌种后需马上塞上棉 塞塞 c把皿盖打开，将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划三至五把皿盖打开，将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划三至五 条平行线即可条平行线即可 d最后将平板倒置，放入培养箱中培养最后将平板倒置，放入培养箱中培养 二、简答题二、简答题 9某学校打算开辟一块食用菌栽培基地，以丰富学生的劳动技术课内容。首先某学校

47、打算开辟一块食用菌栽培基地，以丰富学生的劳动技术课内容。首先 对食用菌实验室进行清扫和消毒处理，准备食用菌栽培所需的各种原料和用具，对食用菌实验室进行清扫和消毒处理，准备食用菌栽培所需的各种原料和用具， 然后从菌种站购来各种食用菌菌种。请回答下列问题：然后从菌种站购来各种食用菌菌种。请回答下列问题： (1)对买回来的菌种进行扩大培养，首先制备试管培养基，写出制备牛肉膏蛋白对买回来的菌种进行扩大培养，首先制备试管培养基，写出制备牛肉膏蛋白 胨固体培养基所需的原料：胨固体培养基所需的原料：_、_、_、_、 _。其中提供氮源的是。其中提供氮源的是_；提供碳源的主要物质是；提供碳源的主要物质是 _。

48、(2)微生物在生长过程中对各种成分所需量不同，故配制培养基时各成分要有合微生物在生长过程中对各种成分所需量不同，故配制培养基时各成分要有合 适的适的_。在烧杯中加入琼脂后要不停地。在烧杯中加入琼脂后要不停地_，防止，防止 _。 (3)将配制好的培养基分装到试管中，加棉塞后若干个试管一捆，包上牛皮纸并将配制好的培养基分装到试管中，加棉塞后若干个试管一捆，包上牛皮纸并 用皮筋勒紧放入用皮筋勒紧放入_中灭菌，压力中灭菌，压力_kpa，温度，温度_，时，时 间间_。灭菌完毕拔掉电源，待锅内压力自然降到。灭菌完毕拔掉电源，待锅内压力自然降到0时，将试管取时，将试管取 出。如果棉塞上沾有培养基，此试管出。

49、如果棉塞上沾有培养基，此试管_。 (4)使用高压蒸汽灭菌锅时注意，先向锅内倒入使用高压蒸汽灭菌锅时注意，先向锅内倒入_，把锅内水加热煮沸并，把锅内水加热煮沸并 将其中原有冷空气彻底排出后将锅密闭。将其中原有冷空气彻底排出后将锅密闭。 (5)从一支试管向另一支试管接种时注意，接种环要在酒精灯从一支试管向另一支试管接种时注意，接种环要在酒精灯_(“内内”或或 “外外”)焰灭菌，并且待接种环焰灭菌，并且待接种环_后蘸取菌种，试管口不能离开酒精灯火焰后蘸取菌种，试管口不能离开酒精灯火焰 附近，将接种的试管放入附近，将接种的试管放入_冰箱中保藏。冰箱中保藏。 牛肉膏牛肉膏 牛肉膏牛肉膏 蛋白胨蛋白胨水水

50、无机盐无机盐 琼脂琼脂蛋白胨蛋白胨 琼脂糊底引起烧杯破裂琼脂糊底引起烧杯破裂 比例比例 搅拌搅拌 废弃废弃 高压蒸汽灭菌锅高压蒸汽灭菌锅100121 1530 min 适量水适量水 外外 冷却冷却 4 10下表是用于从土壤中分离纯化土壤细菌的牛肉膏蛋白胨培养基的配方。请回答下表是用于从土壤中分离纯化土壤细菌的牛肉膏蛋白胨培养基的配方。请回答 ： 试剂试剂用量用量 牛肉膏牛肉膏5.0 g 蛋白胨蛋白胨10.0 g nacl5.0 g 琼脂琼脂20.0 g 水水1 000 ml (1)培养基的类型很多，但培养基中一般都含有水、碳源、氮源和无机盐。上述培养基的类型很多，但培养基中一般都含有水、碳源、

51、氮源和无机盐。上述 培养基配方中能充当碳源的成分是培养基配方中能充当碳源的成分是_和和_。培养基配制完成以后，。培养基配制完成以后， 一般还要调节一般还要调节ph并对培养基进行并对培养基进行_处理。处理。 (2)分离纯化微生物最常使用的接种方法是分离纯化微生物最常使用的接种方法是_和和_两两 种。在接种过程中，接种针或涂布器的灭菌方法是种。在接种过程中，接种针或涂布器的灭菌方法是_。 (3)假设某同学发现培养基上细菌数目过多地连成一片，可能的原因是什么？。假设某同学发现培养基上细菌数目过多地连成一片，可能的原因是什么？。 菌液浓度过高；培养过程中被杂菌污染；利用接种针划线时，划下一个区域菌液浓

52、度过高；培养过程中被杂菌污染；利用接种针划线时，划下一个区域 前没有对接种针进行灭菌处理前没有对接种针进行灭菌处理 牛肉膏牛肉膏蛋白胨蛋白胨 灭菌灭菌 平板划线法平板划线法 稀释涂布平板法稀释涂布平板法 蘸取酒精；引燃灭菌蘸取酒精；引燃灭菌 目标导航目标导航1.研究培养基对微生物的选择作用。研究培养基对微生物的选择作用。 2.进行微生物数量的测定。进行微生物数量的测定。 第第2课时土壤中分解尿素细菌的分离与计数课时土壤中分解尿素细菌的分离与计数 一、研究思路一、研究思路 1筛选菌株筛选菌株 (1)实验室中微生物筛选的原理实验室中微生物筛选的原理 人为提供有利于人为提供有利于_生长的条件生长的条

53、件(包括营养、温度、包括营养、温度、 ph等等)，同时，同时_或或_其他微生物生长。其他微生物生长。 (2)选择培养基选择培养基 在微生物学中，将允许在微生物学中，将允许_种类的微生物生长，同时种类的微生物生长，同时 _或或_其他种类微生物生长的培养基，称做选择培其他种类微生物生长的培养基，称做选择培 养基。养基。 目的菌株目的菌株 抑制抑制阻止阻止 特定特定 抑制抑制 阻止阻止 (3)分离分解尿素的细菌的选择培养基分离分解尿素的细菌的选择培养基 在该培养基配方中，为微生物的生长提供碳源的是在该培养基配方中，为微生物的生长提供碳源的是 _，提供氮源的是，提供氮源的是_，琼脂的作用是凝固剂。，琼

54、脂的作用是凝固剂。 该培养基对微生物具有选择作用。其选择机制是该培养基对微生物具有选择作用。其选择机制是 _才能在该培养基上生长。才能在该培养基上生长。 土壤中的细菌之所以能分解尿素，是因为它们体内能合成土壤中的细菌之所以能分解尿素，是因为它们体内能合成 _，将尿素分解的反应式是，将尿素分解的反应式是 _。 taq细菌能忍受细菌能忍受93左右的高温，是在美国黄石国家公园的一个热左右的高温，是在美国黄石国家公园的一个热 泉中发现的，这说明，在寻找目的菌株时，要根据泉中发现的，这说明，在寻找目的菌株时，要根据 _。 2统计菌落数目的方法统计菌落数目的方法 (1)稀释涂布平板法稀释涂布平板法(也叫活

55、菌计数法也叫活菌计数法) 原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落， 来源于样品稀释液中的来源于样品稀释液中的_，通过统计平板上的，通过统计平板上的 _，就能推测出样品中大约含有多少活菌。，就能推测出样品中大约含有多少活菌。 操作操作 葡萄糖葡萄糖尿素尿素 只有能够以尿素作为氮源的微生物只有能够以尿素作为氮源的微生物 脲酶脲酶 co(nh2)2h2o co22nh3 脲酶脲酶 它对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找它对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找 一个活菌一个活菌 菌落数菌落数 第一，设置重复组，增强实验的说服力与

56、准确性。将待测样品经一第一，设置重复组，增强实验的说服力与准确性。将待测样品经一 系列系列10倍稀释，然后选择倍稀释，然后选择_稀释度的菌液，分别取稀释度的菌液，分别取0.1 ml 接种到已制备好的平板上，然后用无菌涂布器将菌液涂布整个平板接种到已制备好的平板上，然后用无菌涂布器将菌液涂布整个平板 表面，放在适宜的温度下培养并计算菌落数。为使结果接近真实值，表面，放在适宜的温度下培养并计算菌落数。为使结果接近真实值， 可将同一稀释度涂布到三个或三个以上的平板上，培养并计算出可将同一稀释度涂布到三个或三个以上的平板上，培养并计算出 _。 第二，为了保证结果准确，一般选择菌落数在第二，为了保证结果

57、准确，一般选择菌落数在_的平板进的平板进 行计数，若设置的重复组中结果相差太远，意味着操作有误，需重行计数，若设置的重复组中结果相差太远，意味着操作有误，需重 新实验。新实验。 计算公式：每克样品中的菌株数计算公式：每克样品中的菌株数c/vm，其中，其中c代表代表_ _ ，v代表代表 _ _(ml)，m代表代表_。 (2)显微镜直接计数法显微镜直接计数法 原理：此法利用特定的原理：此法利用特定的_或或_，在，在 显微镜下计算一定容积的样品中微生物的数量，但不能区分细菌的显微镜下计算一定容积的样品中微生物的数量，但不能区分细菌的 死活。计数板是一块特制的载玻片，上面有一个特定的面积死活。计数板是

58、一块特制的载玻片，上面有一个特定的面积1 mm2 和高和高0.1 mm的计数室，在的计数室，在1 mm2的面积里又被划分成的面积里又被划分成25个个(或或16个个) 中格，每个中格进一步划分成中格，每个中格进一步划分成16个个(或或25个个)小格，计数室由小格，计数室由_ 个小格组成。个小格组成。 三个三个 菌落平均数菌落平均数 30300 某一稀释度下平板上生长的平均菌落数某一稀释度下平板上生长的平均菌落数 涂布平板时所用的稀释液的体积涂布平板时所用的稀释液的体积 稀释倍数稀释倍数 细菌计数板细菌计数板血细胞计数板血细胞计数板 400 操作：将稀释的样品滴在计数板上，盖上盖玻片，然后在显微镜

59、操作：将稀释的样品滴在计数板上，盖上盖玻片，然后在显微镜 下计数下计数45个中格中的细菌数，并求出每个小格所含细菌的平均数，个中格中的细菌数，并求出每个小格所含细菌的平均数， 再按公式求出每毫升样品中所含的细菌数。再按公式求出每毫升样品中所含的细菌数。 计数公式：计数公式：每毫升原液所含细菌数每小格平均细菌数每毫升原液所含细菌数每小格平均细菌数 40010 000稀释倍数。稀释倍数。 (3)设置重复和对照设置重复和对照 设置重复：培养过程中应设置重复组，同一稀释度下应涂布设置重复：培养过程中应设置重复组，同一稀释度下应涂布 _个平板，才能个平板，才能增强实验的说服力与准确性。增强实验的说服力与

60、准确性。 设置对照：实验中应设置对照，主要目的是设置对照：实验中应设置对照，主要目的是 _对实验结果的影响，提高实验结果对实验结果的影响，提高实验结果 的可信度。如的可信度。如_对照组，观察培养物中是否有杂菌污染；对照组，观察培养物中是否有杂菌污染； 设置设置_培养基，观察选择培养基是否具有培养基，观察选择培养基是否具有_作用。作用。 二、实验设计二、实验设计 实验步骤实验步骤 1土壤取样：从肥沃、湿润的土壤中，用无菌小铁铲铲去表层土土壤取样：从肥沃、湿润的土壤中，用无菌小铁铲铲去表层土3 cm左右，迅速取土壤并装入左右，迅速取土壤并装入_密封或事先准备好的密封或事先准备好的 _中。中。 至少