工作菌液储存期限验证心得

1、工作菌液贮存时间验证方案 工作菌液贮存时间验证方案 1 .目的： 确认工作菌液在2-8 C条件下的贮存时间。 2. 范围：适用于金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽抱杆菌、生抱梭菌、铜绿假单胞菌、 白色念珠菌和黑曲霉的工作菌液贮存。 3. 环境条件要求：所有检查在环境洁净度10000级下的局部100级洁净度的单向流空气区域 隔离系统内进行，其全过程严格遵守无菌操作，能防止微生物再污染。 4. 验证方法的依据：中国药典2010年版二部。 5. 验证前准备： 5.1验证用菌种 金黄色葡萄球菌CMCC(B) 26003 铜绿假单胞菌CMCC(B) 10104 大肠埃希菌CMCC(B) 44102 枯草

2、芽抱杆菌CMCC(B) 63501 生抱梭菌CMCC(B) 64941 白色念珠菌CMCC(F) 98001 黑曲霉CMCC(F) 98003 培养基的制备： 营养肉汤培养基 批号： 北京三药科技开发公司 硫乙醇酸盐流体培养基 批号： 北京三药科技开发公司 营养琼脂培养基 批号： 北京三药科技开发公司 改良马丁琼脂培养基 批号： 北京三药科技开发公司 改良马丁培养基 批号： 北京三药科技开发公司 玫瑰红钠琼脂培养基 批号： 北京三药科技开发公司 以上培养基按照说明书配制后灌装于洁净的容器中，加塞，按经过验证合格的灭菌程序进行 灭菌，培养基的适用性检查应符合规定。 5.3稀释液的制备： 0.9

3、%无菌氯化钠溶液：取氯化钠 9.0g，加水溶解至1000ml，121C灭菌20min。 0.05 %聚山梨酯80无菌氯化钠溶液：取土温 80 0.5ml，加0.9 %无菌氯化钠溶液至1000ml, 121C 灭菌 20min。 5.4菌原液制备： (1) 将金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽抱杆菌、铜绿假单胞菌的新鲜培养物分别接种 至营养肉汤培养基中，经 30-35 C培养18-24小时。 (2) 将生抱梭菌的新鲜培养物接种至硫乙醇酸盐流体培养基中, (3) 将白色念珠菌的新鲜培养物接种至改良马丁培养基中，经 (4) 接种黑曲霉的新鲜培养物接种至改良马丁琼脂斜面培养基上, 经30-35 C培养

4、18-24小时。 23-28 C培养24-48小时。 实验人/日期： 2328 E培养57天, 加入35ml含0.05 %(ml/ml )聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液，将抱子洗脱。然后, 采用适宜的方法吸出抱子悬液至无菌试管内，备用。实验人/日期： 6. 验证内容: 6.1菌种的确认 菌种名称 代数 编号 接种日期 实验人员 金黄色葡萄球菌 铜绿假单胞菌 大肠埃布困 枯草芽抱杆菌 生抱梭菌 白色念珠菌 黑曲霉 6.2仪器设备: 实验中所用的玻璃仪器及金属器皿在使用前均经过 隔水式恒温培养箱：GRP 9050型 生化培养箱：SHP-250 型 立式压力蒸汽灭菌器： LDZM 75 天平：

5、DT系列电子天平 电热鼓风干燥箱： 101-3AB 型 家用冰箱 170 180C干热灭菌至少 60分钟 北京桑翌科技发展有限公司 上海森信实验仪器有限公司 上海申安医疗器械厂 中国江苏常熟长青仪器仪表厂 天津泰斯特仪器有限公司 6.3验证过程 6.3.1新制备原菌液计数 (1)取金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽抱杆菌、铜绿假单胞菌、生抱梭菌、白色念珠 菌的菌原液，用稀释液0.9 %无菌氯化钠溶液，以十倍递增稀释法制备菌液，平皿法计数： 菌液名称 稀释度 稀释日期 计数（cfu/ml ） 计数日期 实验人员 金黄色葡萄球菌 铜绿假单胞菌 大肠埃布困 枯草芽抱杆菌 生抱梭菌 白色念珠菌 黑曲霉

6、 (2)取黑曲霉抱子悬液，用稀释液 0.05 %聚山梨酯80无菌氯化钠溶液，以十倍递增稀释法 制备菌液，平皿法计数： 菌液名称 稀释度 稀释日期 计数（cfu/ml ） 计数日期 实验人员 黑曲霉 6.3.2保存条件的确认: 将上述原困液及各稀释级别困液包扎好后，置冰箱(2-8 C)保存，原困液一定时间计数 一次，计数方法严格同上，使操作带来的误差减少到最少。 6.3.3结果 金黄色葡萄球菌： 贮存天数 稀释度 稀释日期 计数（cfu/ml ） 计数日期 1 2 3 4 5 6 7 备注： 铜绿假单胞菌: 贮存天数 稀释度 稀释日期 计数（cfu/ml ） 计数日期 1 2 3 4 5 6 7 备注： 大肠埃希菌: 贮存天数 稀释度 稀释日期 计数（cfu/ml） 计数日期 1 2 3 4 5 6 7 备注： 枯草芽抱杆菌: 贮存天数 稀释度 稀释日期 计数（cfu/ml） 计数日期 1 2 3 4 5 6 7 备注： 生抱梭菌: 贮存天数 稀释度 稀释日期 计数（cfu/ml ） 计数日期 1 2 3 4 5 6 7 备注： 白色念珠菌: 贮存天数 稀释度 稀释日期 计数（cfu/ml ） 计数日期 1 2 3 4 5 6 7 备注： 黑曲霉困: