人外周血单核细胞分离技术_第1页
人外周血单核细胞分离技术_第2页
人外周血单核细胞分离技术_第3页
人外周血单核细胞分离技术_第4页
全文预览已结束

付费下载

下载本文档

版权说明：本文档由用户提供并上传，收益归属内容提供方，若内容存在侵权，请进行举报或认领

文档简介

1、外周血单核细胞分离 技术 本页仅作为文档封面，使用时可以删除 This document is for reference only-rar21 year.March 人外周血单核细胞分离 1 抗凝血的预离心分别取正常人新鲜抗凝全血 A: 20 mL J 50 mL离心管中,以2 000 r/min离心20 min吸弃上层血浆,获得下层 沉淀细胞约1012.5 mL。 2. 沉淀细胞的稀释与离心分离在所获取沉淀 A中的细胞中加入Hank s液（不含Ca?+、Mg2+, pH 7.27.6）体积比仍未1:1,混匀， 制成细胞悬液。 B:无菌抗凝血与Hank s液或PBS以1:1体积在试管中混匀。

2、 另取一离心管，加入LTS1077淋巴细胞分层液，然后用毛细吸管距分层液上icm处将 细胞悬液小心而缓慢地加于其上面，使稀释血液重叠于分层液上。此时稀释后的细胞悬液 分离液淋巴细胞体积为：1:1-与用水平离心机以2000 r/min离心20min,离心结束后，取 出离心管，可见管中液体已经分层。 管内可见分为4层：最上层是血浆，含部分血小板：第二层为薄薄的白膜层，主要台 单个核细胞，还混杂有少疑血小板：第三层为分离液层；第四层为粒细胞及红细胞，红细 胞沉于管底，而粒细胞则紧贴在压积红细胞上呈一层很薄的白膜 3. 单个核细胞的提取、洗涤与悬浮、贴壁 吸去最上层的血浆，收集血浆层和淋巴细胞分藹液交

3、界而的单个核细胞，尽量全部吸 出PBMCo加34倍以上体积Hanks或PBS液于所得的单个核细胞中，用毛细吸管轻轻吹 判均匀，避免产小气泡，液柱高度不超过离心管的2/3o混匀后离心1500r/min离心 lOmin,低速离心有利于去除细胞悬液中留存的血小板，去上淸液。 注意：还可以先用吸管把雾状层上而的液体吸走，注意不要碰到雾状层，然后在把要的部 分慢慢吸岀来。第二种方法，比较简单一些。 再用同样洗涤液洗涤细胞2次，1500r/min离心lOmin,洗去残留的淋巴细胞分离 液。再以RPMI-1640培养基离心洗涤2次，吸尽上淸，以充分去除血小板等杂质。按每亳 升血液标本加0.2 mL含20%小牛血淸的Hank s液（或含10%胎牛血淸及25 mmol/L hepas 的RPMI-1640液34 mL）重新混悬细胞37C、5% CO2孵育箱中培养23 h后去除上淸, 得到贴壁的单核细胞。于各培瓶中分别加入含10%胎牛血淸的RPMI-1640液34 mL,按 需调左细胞密度，于37C、5% CO2孵育箱中培养备用。 4. 单核细胞的纯度与细胞活力的鉴左 取一泄体积的细胞悬液送做流式细胞CD14. CD56等检査以测左所得细胞的纯度。取 1滴细胞悬液登于血细胞汁数板内计数。以台盼蓝拒染法检测细胞活力。取1

人人文库> 全部分类> 行业资料 > 信息产业

温馨提示

  • 1. 本站所有资源如无特殊说明，都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
  • 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等，如果需要附件，请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
  • 3. 本站RAR压缩包中若带图纸，网页内容里面会有图纸预览，若没有图纸预览就没有图纸。
  • 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
  • 5. 人人文库网仅提供信息存储空间，仅对用户上传内容的表现方式做保护处理，对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑，并不能对任何下载内容负责。
  • 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容，请与我们联系，我们立即纠正。
  • 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。

最新文档

评论

0/150

提交评论