微生物检验第五章G球菌

1、微生物检验第五章G球菌 第十四章 革兰阳性球菌 微生物检验第五章G球菌 第一节第一节 葡萄球菌属葡萄球菌属 在自然界广泛分布。在自然界广泛分布。 存在于人和动物的皮肤黏膜上的菌株存在于人和动物的皮肤黏膜上的菌株 可致多种化脓性感染可致多种化脓性感染 疖、痈、脓肿、菌血症等疖、痈、脓肿、菌血症等 烫伤样皮肤综合症烫伤样皮肤综合症 毒性休克综合症毒性休克综合症 微生物检验第五章G球菌 二、临床意义 致病物质：致病物质： 酶酶 血浆凝固酶血浆凝固酶 耐热核酸酶耐热核酸酶 毒素毒素 葡萄球菌溶素葡萄球菌溶素 杀白细胞素杀白细胞素 肠毒素肠毒素 表皮剥脱毒素表皮剥脱毒素 毒性休克综合征毒素毒性休克综合征

2、毒素 微生物检验第五章G球菌 金黄色葡萄球菌所致疾病 感染类型感染类型 所致疾病所致疾病 侵袭性侵袭性局部感染：疖、痈、毛囊炎、局部感染：疖、痈、毛囊炎、 伤口化脓、内脏器官感染伤口化脓、内脏器官感染 全身感染：败血症、脓毒血症全身感染：败血症、脓毒血症 毒素性毒素性假膜性肠炎、食物中毒假膜性肠炎、食物中毒 微生物检验第五章G球菌 凝固酶阴性葡萄球菌（CoNS）所致疾病 1、CoNS是人体皮肤黏膜正常菌群之一，是医院感是人体皮肤黏膜正常菌群之一，是医院感 染的主要病原菌。染的主要病原菌。 2、表皮葡萄球菌：人工瓣膜性心内膜炎、静脉导管、表皮葡萄球菌：人工瓣膜性心内膜炎、静脉导管 感染、腹膜透析

3、性腹膜炎、血管移植物感染和人感染、腹膜透析性腹膜炎、血管移植物感染和人 工关节感染等。工关节感染等。 3、腐生葡萄球菌：女性尿路感染的重要病原菌。、腐生葡萄球菌：女性尿路感染的重要病原菌。 微生物检验第五章G球菌 1.菌体形态：球形，葡萄串状，无鞭毛，无芽菌体形态：球形，葡萄串状，无鞭毛，无芽 胞，体外培养无荚膜。革兰染色阳性球菌。胞，体外培养无荚膜。革兰染色阳性球菌。 2.培养特性：兼性厌氧，易培养，在普通平培养特性：兼性厌氧，易培养，在普通平 板、板、 血平板上生长良好。大部分菌落产生血平板上生长良好。大部分菌落产生 有色素：金黄色、白色、有色素：金黄色、白色、 柠檬色。柠檬色。 有些菌溶

4、血，产生透明的有些菌溶血，产生透明的溶血环。溶血环。 三、生物学特性 微生物检验第五章G球菌 3.生化反应和抗原构造生化反应和抗原构造 触酶阳性触酶阳性 多数菌分解葡萄糖、麦芽糖和蔗糖，产酸多数菌分解葡萄糖、麦芽糖和蔗糖，产酸 不产气。不产气。 微生物检验第五章G球菌 4.抵抗力抵抗力 对外界因素的抵抗力强于其他无芽胞菌。对外界因素的抵抗力强于其他无芽胞菌。 干燥脓汁、痰液中可存活干燥脓汁、痰液中可存活23个月。个月。 耐盐性强，能在耐盐性强，能在10%15%NaCl培养基中生长。培养基中生长。 易产生耐药性，对青霉素易产生耐药性，对青霉素G的耐药性已达的耐药性已达90%以上，尤以上，尤 其是

5、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌其是耐甲氧西林金黄色葡萄球菌MRSA已经成为医院已经成为医院 内感染最常见的致病菌。内感染最常见的致病菌。 病原性葡萄球菌一般分布在人的皮肤和鼻咽部，带菌病原性葡萄球菌一般分布在人的皮肤和鼻咽部，带菌 率达率达20%50%，医务人员带菌率达，医务人员带菌率达70%，是医院内交，是医院内交 叉感染的重要传染源。叉感染的重要传染源。 微生物检验第五章G球菌 （一）标本采集（一）标本采集 根据感染的部位，采集不同的标本。根据感染的部位，采集不同的标本。 该属细菌广泛分布在人体皮肤和黏膜，采取时避免病该属细菌广泛分布在人体皮肤和黏膜，采取时避免病 灶周围正常菌群污染。灶周围正常

6、菌群污染。 四、微生物检验 微生物检验第五章G球菌 （二）检验程序（二）检验程序 微生物检验第五章G球菌 （三）标本直接检查（三）标本直接检查 无菌体液如脑脊液和穿刺液可直接涂片、革兰染色无菌体液如脑脊液和穿刺液可直接涂片、革兰染色 后直接显微镜检查，查见细菌具有重要临床价值。后直接显微镜检查，查见细菌具有重要临床价值。 其他体液标本如同时伴有炎性细胞时则直接显微镜其他体液标本如同时伴有炎性细胞时则直接显微镜 检查结果也具有参考价值。检查结果也具有参考价值。 涂片检查发现有形态相似的革兰阳性球菌，则可初涂片检查发现有形态相似的革兰阳性球菌，则可初 步报告步报告“查见类似葡萄球菌属革兰阳性球菌查

7、见类似葡萄球菌属革兰阳性球菌”，并，并 进一步进行分离和鉴定予以证实。进一步进行分离和鉴定予以证实。 微生物检验第五章G球菌 （四）分离培养与鉴定（四）分离培养与鉴定 脓液、分泌物等接种于血琼脂平板脓液、分泌物等接种于血琼脂平板 有污染的标本如粪便等应接种在选择平板上，如甘露醇有污染的标本如粪便等应接种在选择平板上，如甘露醇 高盐平板、哥伦比亚多粘菌素奈啶酸平板高盐平板、哥伦比亚多粘菌素奈啶酸平板 血液标本则用肉汤增菌培养基血液标本则用肉汤增菌培养基 微生物检验第五章G球菌 1.菌落与菌体形态菌落与菌体形态 金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌 直径直径68mn，金黄色或橙色，菌落周围出现或不出现透明

8、溶血环，金黄色或橙色，菌落周围出现或不出现透明溶血环 表皮葡萄球菌表皮葡萄球菌 直径为直径为56mm，某些产粘液菌株能粘附在琼脂平板表面，无色或白，某些产粘液菌株能粘附在琼脂平板表面，无色或白 色色 溶血葡萄球菌溶血葡萄球菌 直径直径59mm，不透明，无色素或奶油色、黄色，不透明，无色素或奶油色、黄色 里昂葡萄球菌里昂葡萄球菌 直径直径47mm，边缘整齐稍扁，奶色、黄色和沃氏葡萄球菌相似，边缘整齐稍扁，奶色、黄色和沃氏葡萄球菌相似 腐生葡萄球菌腐生葡萄球菌 直径直径58mm，白色或柠檬色，白色或柠檬色 注意：菌落外观疑为葡萄球菌者应进行革兰染色证实，甘露醇高盐平板注意：菌落外观疑为葡萄球菌者应

9、进行革兰染色证实，甘露醇高盐平板 上金黄色葡萄球菌菌落为黄色。上金黄色葡萄球菌菌落为黄色。 微生物检验第五章G球菌 2凝固酶试验凝固酶试验 玻片法玻片法-测定结合型凝固酶测定结合型凝固酶 试管法试管法-测定分泌型凝固酶测定分泌型凝固酶 金黄色葡萄球菌、中间型葡萄球菌呈金黄色葡萄球菌、中间型葡萄球菌呈 现阳性反应现阳性反应 微生物检验第五章G球菌 3耐热核酸酶试验耐热核酸酶试验 大多数金黄色葡萄球菌、施氏葡萄球菌、大多数金黄色葡萄球菌、施氏葡萄球菌、 中间葡萄球菌、猪葡萄球菌能产生耐热中间葡萄球菌、猪葡萄球菌能产生耐热 核酸酶。核酸酶。 表皮葡萄球菌、模仿葡萄球菌、肉葡萄表皮葡萄球菌、模仿葡萄球

10、菌、肉葡萄 球菌含微弱耐热核酸酶。球菌含微弱耐热核酸酶。 微生物检验第五章G球菌 4磷酸酶试验磷酸酶试验 大多数的表皮葡萄球菌和金黄色葡萄球大多数的表皮葡萄球菌和金黄色葡萄球 菌、施氏葡萄球菌、中间葡萄球菌和猪菌、施氏葡萄球菌、中间葡萄球菌和猪 葡萄球菌为阳性。葡萄球菌为阳性。 将待测菌种点种在加有硝基酚磷酸盐的将待测菌种点种在加有硝基酚磷酸盐的 pH5.66.8 MH琼脂上，孵育琼脂上，孵育1824h， 菌落周围出现黄色为阳性。菌落周围出现黄色为阳性。 微生物检验第五章G球菌 微生物检验第五章G球菌 定义：定义： 凡对甲氧西林、苯唑西林、头孢凡对甲氧西林、苯唑西林、头孢 西丁耐药，或西丁耐药

11、，或PBP2aPBP2a阳性、阳性、mecAmecA基因基因 阳性的葡萄球菌定义为耐甲氧西林葡阳性的葡萄球菌定义为耐甲氧西林葡 萄球菌（萄球菌（MRSMRS）。）。 耐甲氧西林葡萄球菌 微生物检验第五章G球菌 微生物检验第五章G球菌 第二节第二节 链球菌属链球菌属 （Streptococcus） 微生物检验第五章G球菌 传统分类传统分类 Lancefield抗原血清分型抗原血清分型 种系分类法种系分类法 溶血现象溶血现象 丙型（丙型（）链球菌）链球菌 甲型（甲型（）溶血性链球菌）溶血性链球菌 乙型（乙型（）溶血性链球菌）溶血性链球菌 血清群与溶血特性没有相关性血清群与溶血特性没有相关性 遗传学

12、和血清学分型不能统一遗传学和血清学分型不能统一 一、分类 微生物检验第五章G球菌 不溶血不溶血D群链球菌：牛链球菌群链球菌：牛链球菌 溶血性链球菌溶血性链球菌 溶血性链球菌溶血性链球菌 肺炎链球菌肺炎链球菌 草绿色链球菌草绿色链球菌 A、C、G群群 B群：无乳链球菌群：无乳链球菌 化脓、马、似马链球菌化脓、马、似马链球菌 米勒链球菌米勒链球菌 微生物检验第五章G球菌 二、临床意义 微生物检验第五章G球菌 酶：链激酶、链道酶、透明质酸酶酶：链激酶、链道酶、透明质酸酶 脂磷壁酸脂磷壁酸 化脓性链球菌化脓性链球菌 肺炎链球菌肺炎链球菌 致病物质致病物质 所致疾病所致疾病 毒素：链球菌溶素毒素：链球菌

13、溶素O和和S、红疹毒素、红疹毒素 M蛋白蛋白 致病物质：荚膜、溶血素、神经氨酸酶致病物质：荚膜、溶血素、神经氨酸酶 所致疾病：大叶性肺炎、支气管炎、中耳炎、乳突炎、所致疾病：大叶性肺炎、支气管炎、中耳炎、乳突炎、 鼻窦炎、脑膜炎和菌血症。鼻窦炎、脑膜炎和菌血症。 超敏反应性疾病：急性肾小球肾炎、风湿热超敏反应性疾病：急性肾小球肾炎、风湿热 化脓性感染化脓性感染 中毒性疾病：猩红热中毒性疾病：猩红热 微生物检验第五章G球菌 无乳链球菌引起新生儿菌血症和脑膜炎无乳链球菌引起新生儿菌血症和脑膜炎 米勒链球菌在手术和创伤时引起内源性感染米勒链球菌在手术和创伤时引起内源性感染 草绿色链球菌可引起心脏瓣膜

14、异常患者的亚急性草绿色链球菌可引起心脏瓣膜异常患者的亚急性 细菌性心内膜炎细菌性心内膜炎 猩红热猩红热 (scarlet fever) 由产生致热外毒素的化脓性链球菌所致。细菌由产生致热外毒素的化脓性链球菌所致。细菌 经咽喉粘膜侵入机体，增殖并产生毒素引起高热、全经咽喉粘膜侵入机体，增殖并产生毒素引起高热、全 身红疹等症状，病后获得较强的免疫力。身红疹等症状，病后获得较强的免疫力。 微生物检验第五章G球菌 链球菌是直径小于链球菌是直径小于2m的球形或卵圆形革兰的球形或卵圆形革兰 阳性球菌，呈链状排列，链的长短和细菌的种阳性球菌，呈链状排列，链的长短和细菌的种 类及生长环境有关。类及生长环境有关

15、。 1.形态染色形态染色 三、微生物学特性 微生物检验第五章G球菌 肺炎链球菌呈矛尖状，宽端相对尖端向肺炎链球菌呈矛尖状，宽端相对尖端向 外，成双排列，无芽胞、无动力，但能外，成双排列，无芽胞、无动力，但能 形成荚膜和粘液层。形成荚膜和粘液层。 微生物检验第五章G球菌 兼性厌氧菌兼性厌氧菌 营养要求高营养要求高 血平板血平板、三种特征性溶血现象三种特征性溶血现象 肺炎链球菌肺炎链球菌 荚膜多糖使菌落呈粘液状荚膜多糖使菌落呈粘液状 产生自溶酶，培养产生自溶酶，培养48h后出现后出现“脐脐 窝状窝状”菌落。菌落。 2培养特性培养特性 微生物检验第五章G球菌 微生物检验第五章G球菌 3生化特性和抗原

16、构造生化特性和抗原构造 发酵葡萄糖和多种糖，不产气，乳酸为代谢终末发酵葡萄糖和多种糖，不产气，乳酸为代谢终末 产物，触酶阴性产物，触酶阴性 分20个群 M抗原 荚膜 蛋白质 多糖 肽聚糖 细胞膜 细胞质 微生物检验第五章G球菌 近年对青霉素耐药甚至多重耐药的肺炎链近年对青霉素耐药甚至多重耐药的肺炎链 球菌的出现并在全球播散，引起高度关注。球菌的出现并在全球播散，引起高度关注。 4.抵抗力抵抗力 大多数细菌对干燥和消毒剂敏感；较少引大多数细菌对干燥和消毒剂敏感；较少引 起细菌耐药性。起细菌耐药性。 微生物检验第五章G球菌 微生物检验第五章G球菌 （二）标本采集（二）标本采集 咽拭子、痰液、脓汁和

17、血液等标本采集后在咽拭子、痰液、脓汁和血液等标本采集后在2h内内 运送到实验室，立即进行检查和接种。运送到实验室，立即进行检查和接种。 对对B群溶血链球菌的检查，用无菌棉签采集第群溶血链球菌的检查，用无菌棉签采集第35 周周37周妊娠妇女的阴道分泌物，置于含多粘菌周妊娠妇女的阴道分泌物，置于含多粘菌 素素(10g/ml)和萘啶酸和萘啶酸(15g/ml)选择性培养肉汤中选择性培养肉汤中 孵育孵育1824h，再作分离培养。，再作分离培养。 微生物检验第五章G球菌 （三）标本直接检查（三）标本直接检查 直接显微镜检查直接显微镜检查 标本涂片、革兰染色、显微镜检查见链状排标本涂片、革兰染色、显微镜检查

18、见链状排 列革兰阳性球菌有助于无正常菌群污染标本列革兰阳性球菌有助于无正常菌群污染标本 的诊断的诊断 荚膜肿胀试验用于检查肺炎链球菌荚膜肿胀试验用于检查肺炎链球菌 直接检测抗原直接检测抗原 咽拭标本的咽拭标本的A群链球菌和女性生殖道标本的群链球菌和女性生殖道标本的B 群链球菌可用抗原检测群链球菌可用抗原检测 微生物检验第五章G球菌 荚膜肿胀试验荚膜肿胀试验 微生物检验第五章G球菌 （四）分离培养与鉴定（四）分离培养与鉴定 用羊血琼脂平板培养初代分离需用用羊血琼脂平板培养初代分离需用5%CO2 环境，环境，3537孵育孵育24h。 观察菌落性状：溶血现象及菌落大小。观察菌落性状：溶血现象及菌落大

19、小。 革兰染色为革兰阳性球菌，链状或短链状革兰染色为革兰阳性球菌，链状或短链状 排列，触酶试验阴性，排列，触酶试验阴性，6.5%NaCl不生长者不生长者 可确定为链球菌属细菌。可确定为链球菌属细菌。 微生物检验第五章G球菌 (1)Lancefield群特异性抗原鉴定：群特异性抗原鉴定：B群为无乳群为无乳 链球菌，链球菌，F群为米勒链球菌。群为米勒链球菌。 (2)PYR试验：化脓性链球菌阳性试验：化脓性链球菌阳性 (3)杆菌肽敏感试验：化脓性链球菌阳性。杆菌肽敏感试验：化脓性链球菌阳性。 (4)VP试验：挑取平板上孵育过夜菌落置于试验：挑取平板上孵育过夜菌落置于 2ml VP肉汤中，孵育肉汤中，

20、孵育6h后加入后加入VP试剂，摇匀试剂，摇匀 30秒，出现桃红色者为阳性。秒，出现桃红色者为阳性。 （5）CAMP试验试验 -溶血链球菌鉴定溶血链球菌鉴定 微生物检验第五章G球菌 链球菌属内的鉴定试验链球菌属内的鉴定试验 微生物检验第五章G球菌 非非溶血链球菌鉴定溶血链球菌鉴定 菌菌 种种 optochin敏感试敏感试 验验 胆汁溶菌试胆汁溶菌试 验验 胆汁七叶苷胆汁七叶苷 试验试验 肺炎链球菌肺炎链球菌S+ 草绿色链球菌草绿色链球菌R 牛链球菌牛链球菌R+ 微生物检验第五章G球菌 抗链球菌溶素抗链球菌溶素O抗体检测抗体检测 微生物检验第五章G球菌 标本标本 分离培养分离培养 脓汁，血液，咽喉

21、拭子脓汁，血液，咽喉拭子 直接涂片镜检直接涂片镜检 革兰阳性链球菌革兰阳性链球菌 与葡萄球菌菌的鉴别与葡萄球菌菌的鉴别 H2O2阳性阳性 1.肚脐样菌落肚脐样菌落 2.荚膜肿胀试验荚膜肿胀试验 3.胆汁溶菌试验胆汁溶菌试验 溶血环溶血环 与肺炎链球菌的鉴别与肺炎链球菌的鉴别 Lancefeild 、PYR、杆菌肽敏感试验、杆菌肽敏感试验 、CAMP试验试验 H2O2阴性阴性 6.5%NaCl不生长者不生长者 微生物检验第五章G球菌 第三节第三节 肠球菌属肠球菌属 广泛分布在自然界。广泛分布在自然界。 常栖居在人、动物的肠道和女性生殖常栖居在人、动物的肠道和女性生殖 道。道。 为医院感染的重要病

22、原菌。为医院感染的重要病原菌。 微生物检验第五章G球菌 一、分类 肠球菌属原归类于链球菌属。肠球菌属原归类于链球菌属。 于于1984年将其命名为肠球菌属。年将其命名为肠球菌属。 至今，经由至今，经由16SrRNA序列分析和核酸序列分析和核酸 杂交等，证实肠球菌可分为杂交等，证实肠球菌可分为5群群19个种。个种。 临床标本分离的肠球菌多属于第临床标本分离的肠球菌多属于第2群。群。 微生物检验第五章G球菌 二、临床意义 肠球菌所致感染最多见于泌尿道感染肠球菌所致感染最多见于泌尿道感染, ,是重要是重要 的医院感染病原菌。的医院感染病原菌。 多与泌尿道器械操作、留置导尿、尿路结构异常有多与泌尿道器械

23、操作、留置导尿、尿路结构异常有 关。关。 腹腔和盆腔创伤时也是常见的感染菌。腹腔和盆腔创伤时也是常见的感染菌。 肠球菌引起的菌血症常发生于有严重基础疾患的老肠球菌引起的菌血症常发生于有严重基础疾患的老 年人、长期住院接受抗菌药物治疗的免疫功能低下年人、长期住院接受抗菌药物治疗的免疫功能低下 患者。患者。 微生物检验第五章G球菌 近年来不断上升的肠球菌感染率和广泛使近年来不断上升的肠球菌感染率和广泛使 用抗菌药物出现的耐药性有关。用抗菌药物出现的耐药性有关。 在临床诊断前应认真评估分离菌的临床意在临床诊断前应认真评估分离菌的临床意 义。义。 临床标本中分离的临床标本中分离的80%90%是粪肠球菌。是粪肠球菌。 屎肠球菌约占屎肠球菌约占5%10%。 很少分离到肠球菌属的其它种。很少分离到肠球菌属的其它种。 微生物检验第五章G球菌 肠球菌为革兰阳性球菌、呈单个，成对或短链状肠球菌为革兰阳性球菌、呈单个，成对或短链状 排列，琼脂平板上生长的细菌呈球杆状。排列，琼脂平板上生长的细菌呈球杆状。 液体培养基中呈卵圆形、链状排列。液体培养基中呈卵圆形、链状排列。 无芽胞和荚膜，个别菌种有稀疏鞭毛。无芽胞和荚膜，个别菌种有稀疏鞭毛。 1. 1.形态形态 微生物检验第五章G球菌 2. 2.培养特性培养特性