食品中还原型抗坏血酸的测定

1、食品中还原型抗坏血酸的测定1范围本标准规定了食品中抗坏血酸的分光光度法。本标准适用于各类食品中的还原型抗坏血酸的测定。本标准不适用于脱氢行抗坏血酸的测定。2原理在乙酸溶液中，抗坏血酸与固蓝盐B反应生成黄色的草酰月井2-轻基丁酰内酯衍生物，在最大吸收波长420处测定吸光度，与标准系列比较定量。3试剂3.1乙酸溶液(12%):吸收12mL冰乙酸，加水稀释至lOOmLo3.2乙酸溶液(2%):吸收2mL冰乙酸，加水稀释至lOOmLo3. 3乙二胺四乙酸二钠溶液(35g/L ):称取35g乙二胺四乙酸二钠CioHi4N2OsNa2H20于水中，加热使之溶解后，放冷，并稀释至100 mLo3. 4蛋白沉

2、淀剂3.4. 1乙酸锌溶液(220g/L):称取22. 0g乙酸锌Zn (CHsCOO) 2 2止0,加3 mL冰乙 酸溶于水，并稀释至100 mLo3.4.2亚铁氧化钾溶液(106g/L):称取106g亚铁氧化钾K4Fe (CN) 4 3也0,加水 溶 解至100 mLo3.5显色剂：固蓝盐B (Fast Blue Salt B)溶液(2g/L):准确称取0. 3125g固蓝 盐 B,加水溶解于100 mLc3. 6抗坏血酸标准储备溶液(2. Omg/mL):精密称取0. 2000g抗坏血酸,加20 mL乙酸 溶液(12%),溶解后移入100 mL棕色容量瓶中，用水稀释至刻度，混匀。此溶液每

3、 毫升相当于2. Omg抗坏血酸(10 C下冰箱内贮存在2d内稳定)。3. 7抗坏血酸标准使用液(0. lg/L):用移液管精密吸取5.0 mL抗坏血酸标准储 备溶 液(20g/L)于100 mL棕色容量瓶内，加5 mL乙酸溶液(12%),用水稀 释至刻 度，混匀。此溶液每毫升相当于100卩g/mL抗坏血酸(临用时配制)。4仪器4.1分光光度计。4.2捣碎机。4. 3离心沉淀机。4.4 10mL具塞玻璃比色管。5分析步骤5. 1试样溶液的制备5. 1. 1非蛋白性食5. 1. 1. 1液体试样：抗坏血酸含量在0. 2g/L以下的试样，混匀后可直接取样测定；抗坏血酸含量在0. 2g/L以上的试样

4、，用水适量稀释后测定。5. 1. 1. 2水溶性固体试样：准确称取1. 0g5. 0g精确至0. 001 g （含0. 2g/kg以下抗 坏血酸）放入乳钵中，加5niL乙酸溶液（12%）研磨溶解后，移入lOOmL棕色容量瓶 内，加水稀释至刻度。5. 1. 1.3蔬菜、水果：称取鲜样可食部分20. 0g50. 0g于捣碎机内，加同倍量的乙 酸溶液（12%）捣成匀浆。称取10. 0g20. 0g匀浆（含0. 2g/kg以下抗坏血酸）于 100mL棕色容量瓶内，加5mL乙酸溶液（12%），用水稀释至刻度，混匀。滤纸过滤，滤液备用。不易过滤的试样可用离心机离心后，上清液供测定。5.1.2蛋白性食品（奶

5、粉、豆粉、乳饮料、强化食品等）:固体试样混匀后精密称取 50g10.0g,精确至0. 001g;液体试样用移液管精密吸取5. OmL-10. OmL于100mL棕色 容量瓶内。加10mL乙酸溶液（12%）,乙酸锌溶液（220g/L）和亚铁氤化钾溶液（106g/L）各7. 5mL,加水至刻度，混匀。将全部溶液移入离心管 内,以3000r/min 离心10min, 清液供测定。同时取与处理试样相同量的乙酸溶 液、乙酸锌溶液和亚 铁氤化钾溶液，按同一方法做试剂空白试验。5. 2标准曲线的绘制精密吸取0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL抗坏血酸标准使用溶液，分别置于25 mL比色管中。各加

6、2 mL乙二胺四乙酸二钠溶液（35g/L）、2mL乙酸溶液（2%）、2.0 mL固蓝盐B溶液（2g/L）,加水稀释至刻度，混匀。室温（20C25 C）下放置20min后，移入lcm比色皿内，以零管为参比，于波长420nni处 测量 吸光度，以标准各点吸光度绘制标准曲线。5.3试样测定5.3.1非蛋白试样的测定：精密吸取按5.1.1制备的试样溶液05mL50mL （相当 于抗坏血酸200测以下）于25 mL比色管内。以下按5.2自“0.3 mL乙二胺四 乙酸二 钠溶液（35g/L） .起依法操作。试样吸光度从标准曲线上查出抗坏血酸含量。5. 3.2蛋白试样的测定：精密吸取按5. 1.2制备的试样溶液（约相当于抗坏血酸200 俱以下）和等量试剂空白溶液（05mL50niL）,各于25 mL比色管内。各 加15mL 乙二胺四乙酸二钠溶液（35g/L）、1.0 mL乙酸溶液（2%）、2. OmL固 蓝盐B溶液（2g/L）,加水稀释至刻度，混匀。室温（20C25C）下放置3min后，移入lcm比 色皿内，以试剂空白为参比，于波长420nm处测量吸光度，试样吸光度从标准曲线上查出抗坏血酸含量。6结果计算按下式计算CX100m VL pooV2式中：x 试样中抗坏血酸的含量，单位为毫克每百克（毫克每百毫升）mg/100g （mg/100mL）;c试样测定液中抗坏血酸的含量，单位为微克（yg；m