一步脱蜡法在FFPE样本DNA提取中的应用优势

1、一步脱蜡法在FFPE羊本DNA提取中的应用优势什么是FFPE福尔马林固定石蜡包埋技术 (Formali n-Fixed and Parrffi n-Embedded, FFPE是 一种组织保存技术。这种技术为了维持细胞核蛋白结构，先用福尔马林固定然后 将组织用固体石蜡包埋，以供切片后作组织学诊断或研究使用。FFPE技术的应用福尔马林由于可以与蛋白氨基发生不可逆交联， 所以对保持组织细胞结构的 完整性、抗原可测定性、组织渗透性方面均优于其他固定液。因此，ffpEK术长期以来在临床检验、医学科学研究中得到广泛应用，尤其是细胞形态学研究和 肿瘤病理学研究。随着这几年分子诊断领域的不断发展， FFPE

2、技术也越来越多 的被应用在对肿瘤疾病进行分子诊断。为什么要脱蜡如果要对FFPE组织进行分子生物学研究，最首先的就是要进行DNA的提取。 但是固定剂的交联作用对核酸是有害的，福尔马林石蜡和交联作用会妨碍核酸的 提取，抑制DNA聚合酶的活性从而影响PCR扩增。除此之外，石蜡阻碍消化液 对组织的渗透，从而抑制蛋白酶 K和组织内蛋白的接触，影响组织消化和 DNA 释放。所以为了消除石蜡对 DNA提取和PCR扩增的不良影响，必须在保证不增 加外源性PCF抑制因子，并尽量减少 DNA额外损伤的前提下对组织进行彻底脱 蜡。常用的二甲苯法脱蜡法的过程和问题目前应用在成熟试剂盒中的脱蜡方法主要是有机溶剂脱蜡法，

3、其中二甲苯脱蜡法由于其脱蜡彻底的特性，被最广泛的应用在肿瘤研究中。在二甲苯脱蜡法中，需要将石蜡包埋组织浸泡在二甲苯溶液中进行脱蜡， 后 面经过两次高温处理，每次各一个小时，分别在 56C和90C。在此期间结合消 化缓冲液和蛋白酶K来消化组织，同时利用梯度乙醇来疏松组织结构、 促进消化 液渗入并去除组织中痕量的二甲苯和甲醛。FFPE tissue出速由心2#冲期哪乙醇清洗共费时约3小时石蜡溶解EOl 1 小 *4arc询时组织裂解图1二甲苯脱蜡法基本步骤虽然二甲苯脱蜡法是目前最主流的脱蜡方法， 并且被应用在绝大多数商业试剂盒 中，但是它还是有一定的问题：首先，二甲苯是一种有毒的有机试剂，在实验过

4、 程中如果身体接触到会有一定程度的危害，所以此实验是有一定风险的；其次， 此脱蜡法的实验过程很繁琐，脱蜡的步骤耗时至少是耗时3小时以上，加上提取 的步骤整个实验4小时左右，而且涉及到的试剂种类较多，容易出错。所以各个 公司都在积极研发更高效、安全、简易的解决方案来取代二甲苯脱蜡。步脱蜡法的改进和优势为了简化石蜡包埋组织的脱蜡过程， 一种新的一步脱蜡法被研发出来。具体步骤如下图所示，将新型的一步法石蜡裂解液（无毒性）与组织裂解液加入到离心管 中并与切片好的石蜡组织样本混合，在 60C和90C各孵育1小时后管内的液体 会分成油层和水层两层从而完成脱蜡，脱蜡后核酸会存在与水层中。图2 一步脱蜡法基本

5、步骤水孚共资时2小时水&相较于传统的二甲苯脱蜡法， 方面：这种新的一步法脱蜡法的优势主要体现在下面几个表1传统二甲苯脱蜡法与一步脱蜡法的区别项目传统二甲苯脱蜡法一步法脱蜡法石蜡溶解液类型有毒物质二甲苯使用无毒溶解液分离方式需要离心机离心去除上清液油水分层，无需额外操作脱蜡裂解连接方式脱蜡-风干-加入裂解液裂解组织脱蜡和裂解同步加热进行，节省 步骤自动化兼容性无法兼容自动化由于其一步法的特性，无需额外 手动操作，非常适合整合到自动 化仪器耗费时间3小时2小时在DNA的提取效果上，下面的实验对比了传统脱蜡法和一步脱蜡法对于大型、中型、和小 型样本的提取得率。大型样本：切片后面积介于 2.5-4 m

6、m2、厚度介于5-20 um、体积介于0.0125-0.08 mm 3之间 的样本。中型样本：切片后面积介于 1.5-2.5 mm2、厚度介于5-20 um、体积介于0.0075-0.05 mm 3之 间的样本。小型样本：切片后面积介于 0.2-1.5 mm2、厚度介于5-20 um、体积介于0.001-0.03 mm3之间 的样本。图3传统脱蜡法与一步脱蜡法在提取得率上的区别结果表明，在大量样本时，两种方法提取得率相当；中量和小量样本时，一步脱 蜡法的得率均大于传统脱蜡法。所以一步脱蜡法不仅简化了操作、降低了风险， 而且提高了提取效率。一步脱蜡法如何整合自动化解决方案在上述的优势中，一步脱蜡

7、法相对于传统二甲苯脱蜡法决定性的优势就是对于自 动化的兼容性，一步法的特性使其可以非常简单的整合到磁珠法自动化核酸提取 仪上，再一次减少需要人工参与的步骤。只需要将切片好的样本放入预装好的试 剂槽中、准备好需要的耗材，开机运行后等待即可，解放了实验人员时间，大大提高了实验效率。现在，业内很多企业都在利用这种方法开发自动核酸提取仪，例如TIANGEN公司就利用此方法研发了一款石蜡组织一步法DNA提取试剂盒，配合TGuideM16/48磁珠法自动核酸提取仪可以在 3小时内完成石蜡切片组织样本的脱蜡、 DNA提取及纯化。参考文献:1谭卓毅，丁梅，王保捷福尔马林固定石蜡包埋组织中 DNA提取.法医学杂

8、 志,2006(6) :455-458公司档案管理制度一、总则1、为加强本公司档案工作，充分发挥档案作用，全面提高档案管理水平，有效地保护及利用档案，为公司发展服务，特制定本制度。2、公司档案，是指公司从事经营、管理以及其他各项活动直接形成的对公司有保存价值的各种文字、图表、声像等不同形式的历史记录。公司档案分为受控档案和非受控档案。3、公文承办部门或承办人员应保证经办文件的系统完整(公文上的各种附件一律不准抽存)。结案后及时归档。工作变动或因故离职时应将经办的文件材料向接办人员交接清楚，不得擅自带走或销毁。 二、文件材料的收集管理 1、公司指定专人负责文件材料的管理。2、文件材料的收集由各部

9、门或经办人员负责整理，交总经理审阅后归档。3、一项工作由几个部门参与办理的，在工作中形成的文件材料，由主办部门或人员收集，交行政部备案。会议文件由行政部收三、归档范围1、重要的会议材料，包括会议的通知、报告、决议、总结、典型2、本公司对外的正式发文与有关单位来往的文书。3、本公司的各种工作计划、总结、报告、请示、批复、会议记录、统计报表及简报。4、本公司与有关单位签订的合同、协议书等文件材料。5、本公司职工劳动、工资、福利方面的文件材料。6、本公司的大事记及反映本公司重要活动的剪报、照片、录音、录像等。四、归档要求1、档案质量总的要求是：遵循文件的形成规律和特点，保持文件之间的有机联系，区别不

10、同的价值，便于保管和利用。2、归档的文件材料种数、份数以及每份文件的页数均应齐全完整。3、在归档的文件材料中，应将每份文件的正件与附件、印件与定稿、请示与批复、转发文件与原件，分别立在一起，不得分开，文电应合一归档。一年立卷；跨年度的会议文件放在会议4、不同年度的文件一般不得放在一起立卷；跨年度的总结放在针对的最后开幕年。5、档案文件材料应区别不同情况进行排列，密不可分的文件材料应依序排列在一起，即批复在前，请示在后；正件在前，附件在后；印件在前，定稿在后；其它文件材料依其形成规律或应保持文件之间的密切联系并进行系统的排列。6、案卷封面，应逐项按规定用钢笔书写，字迹要工整、五、档案管理人员职责 1、按照有关规定做好 文件材料的收集、整理、分类、归档等工作。2、按照归档范围、要求，将文件材料按时归档。3、工作人员应当遵纪守法、忠于职守，努力维护公司档案的完整与安全。1、公司档案只有公司内部人员可以借阅，借阅者都要填写借阅单，报主管人员批准后，方可借阅，其中非受控文档的借阅要由部门经理签字批准，受控文档的借阅要由总经理签字批准。2、档案借阅的最长期限为两周；对借出档案，档案管理人员要定期催还，发现损坏、丢失或逾期未还，应写出书面报告，报总经理处只有一个孤独的影子，她，倚在栏杆上；她有眼，才从青春之梦里醒过来的眼还带着些朦胧睡意，望着