培养条件对发酵的影响8

1、4.1.1 4.1.1 培养基成分培养基成分 (Medium proposition)(Medium proposition) 培养基定义：培养基定义： 微生物生长繁殖和生物合成各种代谢产物所需要的按微生物生长繁殖和生物合成各种代谢产物所需要的按 一定比例配制的多种营养物质的混合物。一定比例配制的多种营养物质的混合物。 培养基的重要性：培养基的重要性： 微生物的生长；微生物的生长； 产物的合成；产物的合成； 工艺路线及工艺设备的选择；工艺路线及工艺设备的选择； 产品的质量和产量；产品的质量和产量； 影响生产成本；影响生产成本； 发酵培养基的组成发酵培养基的组成(composition)(com

2、position) 碳源碳源：糖类、脂肪、某些有机酸、醇或碳氢化合物。：糖类、脂肪、某些有机酸、醇或碳氢化合物。 氮源氮源：花生饼粉、黄豆饼粉、玉米浆、玉米蛋白粉、：花生饼粉、黄豆饼粉、玉米浆、玉米蛋白粉、 蛋白胨、酵母粉、鱼粉、蚕蛹粉、尿素、废菌丝体和蛋白胨、酵母粉、鱼粉、蚕蛹粉、尿素、废菌丝体和 酒糟等。常用的无机氮源有氨水、硫酸铵、氯化铵、酒糟等。常用的无机氮源有氨水、硫酸铵、氯化铵、 硝酸盐等。硝酸盐等。 无机盐无机盐类：镁、硫、磷、铁、钾、钙、钠、氯、锌、类：镁、硫、磷、铁、钾、钙、钠、氯、锌、 钴、锰等钴、锰等 生长因子生长因子(growth factors)(growth fac

3、tors)：维生素，如生物素，：维生素，如生物素， 前体物前体物(precursors)(precursors)：被菌体直接用于药物合成而自：被菌体直接用于药物合成而自 身结构无显著改变的物质称为前体。身结构无显著改变的物质称为前体。 （1 1）碳源碳源( Carbon source)( Carbon source) 碳源是组成培养基的主要成分之一。碳源是组成培养基的主要成分之一。 碳源的主要作用：碳源的主要作用： 供给菌种生命活动所需要的能量；供给菌种生命活动所需要的能量； 构成菌体细胞成分；构成菌体细胞成分； 用于合成代谢产物；用于合成代谢产物； 碳源的其它作用：碳源的其它作用： 客观上也

4、是调节维持客观上也是调节维持pHpH的成分。的成分。 调节渗透压。调节渗透压。 碳源如何影响pH 微生物利用糖份作碳源时，如果供氧不微生物利用糖份作碳源时，如果供氧不 足，造成有机酸积累。足，造成有机酸积累。 pHpH下降。下降。 微生物利用脂肪作碳源时，需要更多的微生物利用脂肪作碳源时，需要更多的 氧，如果供氧不足，造成有机酸积累。氧，如果供氧不足，造成有机酸积累。 如果醋酸钠作为碳源，引起如果醋酸钠作为碳源，引起pHpH上升。上升。 CHCH3 3COONa+2OCOONa+2O2 2 2CO 2CO2 2 +H +H2 2O +NaOHO +NaOH 糖类糖类 葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖

5、和淀粉等是药物葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖和淀粉等是药物 发酵生产中常用的碳源。发酵生产中常用的碳源。 发酵过程中过多的葡萄糖会加速菌体的呼吸，发酵过程中过多的葡萄糖会加速菌体的呼吸， 如果此时通风不足，致使培养基中溶解氧不能如果此时通风不足，致使培养基中溶解氧不能 满足菌体的需要，会使一些酸性中间代谢物如满足菌体的需要，会使一些酸性中间代谢物如 乳酸、丙酮酸、乙酸等积累，使培养基乳酸、丙酮酸、乙酸等积累，使培养基pHpH降低，降低， 从而抑制微生物的生长和产物的合成。从而抑制微生物的生长和产物的合成。 细菌，酵母菌一般都只能利用简单的单糖。细菌，酵母菌一般都只能利用简单的单糖。 淀粉是霉菌和放

6、线菌容易利用的碳源。淀粉是霉菌和放线菌容易利用的碳源。 淀粉淀粉(Starch)(Starch) 淀粉分玉米淀粉、甘薯淀粉、土豆淀粉和小麦淀粉分玉米淀粉、甘薯淀粉、土豆淀粉和小麦 淀粉等；淀粉等； 价格比较低廉，来源也较丰富；价格比较低廉，来源也较丰富； 微生物需有淀粉水解酶方可直接利用淀粉；大微生物需有淀粉水解酶方可直接利用淀粉；大 多数霉菌可直接利用碳源。多数霉菌可直接利用碳源。 可利用水解制糖工艺将淀粉转化为糖类，供细可利用水解制糖工艺将淀粉转化为糖类，供细 菌酵母菌利用。菌酵母菌利用。 淀粉水解淀粉水解(hydrolase)(hydrolase)工艺工艺 酸水解：酸水解： 酸酸- -酶

7、法：酶法： 双酶法：高温淀粉酶，糖化酶。双酶法：高温淀粉酶，糖化酶。 双酶法制糖主要过程：玉米淀粉原料出双酶法制糖主要过程：玉米淀粉原料出 发，经配料，糊化，液化和糖化，脱色发，经配料，糊化，液化和糖化，脱色 过滤，制备成淀粉水解糖。过滤，制备成淀粉水解糖。 酶法酶法(Enzymatic)(Enzymatic)制糖制糖 糊化：淀粉乳加热，淀粉颗粒膨胀，晶体结构糊化：淀粉乳加热，淀粉颗粒膨胀，晶体结构 消失，变成糊状液体，淀粉不再沉淀。消失，变成糊状液体，淀粉不再沉淀。 液化：利用淀粉酶液化：利用淀粉酶(amylase)(amylase)使糊化淀粉水解使糊化淀粉水解 到一定的糊精和低聚糖程度，粘

8、度大大降低，到一定的糊精和低聚糖程度，粘度大大降低， 流动性增加。流动性增加。 糖化：（糖化：（C C6 6H H10 10O O5 5） ）n + nHn + nH2 2O = nCO = nC6 6H H12 12O O6 6 淀粉淀粉 (glucoamylase)(glucoamylase)水水 162 18 180162 18 180 1000 X= 1000 X= DEDE值值: :用用DEDE值表示淀粉水解的程度或糖化程度。糖值表示淀粉水解的程度或糖化程度。糖 化液中还原性糖以葡萄糖计，占干物质的百分比称化液中还原性糖以葡萄糖计，占干物质的百分比称 为为DEDE值。值。 DEDE值

9、计算：值计算： DE= DE= 还原糖浓度（还原糖浓度（C C2 2）100% 100% 干物质浓度（干物质浓度（W W1 1）糖液比重（糖液比重（d d） 还原糖用裴林氏法等法测定，浓度表示：葡萄糖还原糖用裴林氏法等法测定，浓度表示：葡萄糖 g/100mlg/100ml糖液；糖液； 干物质用阿贝折光仪测定，浓度表示：干物质干物质用阿贝折光仪测定，浓度表示：干物质 g/100gg/100g糖液。糖液。 淀粉糖制备(酸化法） 1. 1. 调粉。在调粉桶内先加部分水（可使用调粉。在调粉桶内先加部分水（可使用 离交或滤机洗水），在搅拌情况下加入淀离交或滤机洗水），在搅拌情况下加入淀 粉原料，投料完毕

10、，继续加水使淀粉乳达粉原料，投料完毕，继续加水使淀粉乳达 到规定浓度（到规定浓度（40%40%），然后加入盐酸调节至），然后加入盐酸调节至 规定规定pHpH值。值。 2.2.糖化。调好的淀粉乳，用耐酸泵送入糖糖化。调好的淀粉乳，用耐酸泵送入糖 化罐，进料完毕打开蒸气阀升压力至化罐，进料完毕打开蒸气阀升压力至 2.8kg/cm2.8kg/cm2 2左右，保持该压力左右，保持该压力3 35min5min。取。取 样，用样，用20%20%碘液检查糖化终点。糖化液遇碘碘液检查糖化终点。糖化液遇碘 呈酱红色即可放料中和。呈酱红色即可放料中和。 3 3 中和。糖化液转入中和桶进行中和，开始搅中和。糖化液转

11、入中和桶进行中和，开始搅 拌时加入定量废炭作助滤剂，逐步加入拌时加入定量废炭作助滤剂，逐步加入10%10%碳碳 酸钠溶液中和，要掌握混和均匀，达到所需的酸钠溶液中和，要掌握混和均匀，达到所需的 pHpH值后，打开出料阀，用泵将糖液送入过滤机。值后，打开出料阀，用泵将糖液送入过滤机。 滤出的清糖液随即送至冷却塔，冷却后糖液进滤出的清糖液随即送至冷却塔，冷却后糖液进 行脱色。行脱色。 4 4 脱色。清糖液放入脱色桶内，加入定量活脱色。清糖液放入脱色桶内，加入定量活 性炭随加随拌，脱色搅拌时间不得少于性炭随加随拌，脱色搅拌时间不得少于5 5分钟分钟 （指糖液放满桶后），然后再送至过滤机，滤（指糖液放

12、满桶后），然后再送至过滤机，滤 出清液盛放在贮桶内备用。出清液盛放在贮桶内备用。 5 5 离子交换。将第一次脱色滤清液送至离子离子交换。将第一次脱色滤清液送至离子 交换滤床进行脱盐、提纯及脱色。糖液通过阳交换滤床进行脱盐、提纯及脱色。糖液通过阳 - -阴阴- -阳阳- -阴阴4 4个树脂滤床后，在贮糖桶内调整个树脂滤床后，在贮糖桶内调整pHpH 值至值至3.83.84.24.2。 6 6 第一次蒸发。离子交换后，准确调第一次蒸发。离子交换后，准确调 好好pHpH值的糖液，利用泵送至蒸发罐，保值的糖液，利用泵送至蒸发罐，保 持真空度在持真空度在500500毫米汞柱以上，加热蒸气毫米汞柱以上，加热

13、蒸气 压力不得超过压力不得超过1 1公斤公斤/ /厘米厘米2 2 ，控制蒸发，控制蒸发 浓缩的中转化糖浆浓度在浓缩的中转化糖浆浓度在424250%50%左右。左右。 可出料进行第二次脱色。可出料进行第二次脱色。 7 7 二次脱色过滤。经第一次蒸发后的二次脱色过滤。经第一次蒸发后的 中转化糖浆送至脱色桶，再加入定量新中转化糖浆送至脱色桶，再加入定量新 鲜活性炭，操作与第一次脱色相同。二鲜活性炭，操作与第一次脱色相同。二 次脱色糖浆必须反复回流过滤至无活性次脱色糖浆必须反复回流过滤至无活性 炭微粒为止，方可保证质量。然后将清炭微粒为止，方可保证质量。然后将清 透、无色的中转化糖浆，送至贮糖桶。透、

14、无色的中转化糖浆，送至贮糖桶。 8 8 第二次蒸发。该道操作基本上与第第二次蒸发。该道操作基本上与第 一次蒸发操作相同，只是第二次蒸发开一次蒸发操作相同，只是第二次蒸发开 始后，加入适量亚硫酸氢钠溶液（始后，加入适量亚硫酸氢钠溶液（3535波波 美度），能起到漂白而保护色泽的作用。美度），能起到漂白而保护色泽的作用。 蒸发至规定的浓度，即可放料至成品桶蒸发至规定的浓度，即可放料至成品桶 内。内。 上述的工艺操作规程，主要指特、甲级上述的工艺操作规程，主要指特、甲级 成品而言，如生产乙级成品的操作工序，成品而言，如生产乙级成品的操作工序， 只要求一次脱色和一次蒸发，而且有些只要求一次脱色和一次蒸

15、发，而且有些 操作指标也略有差异操作指标也略有差异 双酶法制糖工艺双酶法制糖工艺 1 1 调浆配料槽；调浆配料槽；2 2，8 8过滤器；过滤器；3 3，9 9，1414，1717，泵；，泵；4 4，1010喷射加热器；喷射加热器；5 5缓缓 冲器；冲器；6 6液化层流罐；液化层流罐；7 7液态液贮槽；液态液贮槽；1111灭菌罐；灭菌罐；1212板式换热器；板式换热器；1313糖化罐；糖化罐； 1515压滤机；压滤机；1616糖化液贮槽；糖化液贮槽；1818糖液贮槽糖液贮槽 双酶法制备玉米粉水解糖液的双酶法制备玉米粉水解糖液的 优化工艺优化工艺 液化酶用量液化酶用量55l/100 g55l/10

16、0 g玉米粉玉米粉(1 100 (1 100 U/100 gU/100 g玉米粉玉米粉) )； 液化时间液化时间89 min89 min； 糖化酶的量糖化酶的量400;l/100 g400;l/100 g玉米粉玉米粉(20 (20 000 U/100 g000 U/100 g玉米粉玉米粉) )； 糖化时间糖化时间284 min284 min； 淀粉转化率可达到淀粉转化率可达到93.95%. 93.95%. 氮氮源源(Nitrogen source)(Nitrogen source) 氮源的主要功能：氮源的主要功能： 构成微生物细胞物质构成微生物细胞物质 含氮代谢物的原料；含氮代谢物的原料； 发

17、酵液发酵液pHpH调节：在发酵罐中通入氨可起到双重调节：在发酵罐中通入氨可起到双重 作用。作用。 有机氮源有机氮源(organic nitrogen sources)(organic nitrogen sources) 有机氮源除含有丰富的蛋白质、多肽和游离氨有机氮源除含有丰富的蛋白质、多肽和游离氨 基酸外，往往还含有少量的糖类、脂肪、无机基酸外，往往还含有少量的糖类、脂肪、无机 盐、维生素及其某些生长因子。因而微生物在盐、维生素及其某些生长因子。因而微生物在 含有机氮源的培养基中常表现出生长旺盛、菌含有机氮源的培养基中常表现出生长旺盛、菌 体浓度增长迅速的特点，体浓度增长迅速的特点， 微生物

18、在有机氮源培养基中，可直接利用氨基微生物在有机氮源培养基中，可直接利用氨基 酸和其它有机氮化合物中的各种不同结构的碳酸和其它有机氮化合物中的各种不同结构的碳 架，来合成生命所需要的蛋白质和其它细胞物架，来合成生命所需要的蛋白质和其它细胞物 质，而无需从糖代谢的分解产物来合成所需的质，而无需从糖代谢的分解产物来合成所需的 物质。物质。 微生物对氨基酸利用的选择性微生物对氨基酸利用的选择性 氮源直接作为药物的前提物。氮源直接作为药物的前提物。 某些氨基酸作为合成肽类抗生素的前体物质。某些氨基酸作为合成肽类抗生素的前体物质。 螺旋霉素发酵中，发酵培养基里加入螺旋霉素发酵中，发酵培养基里加入L-L-色

19、氨酸色氨酸 可使螺旋霉素的产量显著提高，但加入可使螺旋霉素的产量显著提高，但加入L-L-赖氨赖氨 酸会完全抑制螺旋霉素的生物合成。酸会完全抑制螺旋霉素的生物合成。 缬氨酸、半胱氨酸和缬氨酸、半胱氨酸和氨基己二酸等就是合氨基己二酸等就是合 成青霉素和头孢菌素的主要前体；成青霉素和头孢菌素的主要前体； 蛋白胨（Peptone） 最常用的氮源，营养价值高。最常用的氮源，营养价值高。 用于蛋白胨生产的蛋白包括动物蛋白（酪蛋白、用于蛋白胨生产的蛋白包括动物蛋白（酪蛋白、 肉类）和植物蛋白（豆类）两种。肉类）和植物蛋白（豆类）两种。 蛋白质经水解降解生成的多肽，二肽及复合氨蛋白质经水解降解生成的多肽，二肽

20、及复合氨 基酸物。具有蛋白质的通性。基酸物。具有蛋白质的通性。 1.1.色泽：白色粉末或浅黄色粉末色泽：白色粉末或浅黄色粉末 2.2.总氮量：总氮量： 14.5%14.5%以上以上 3.3.水份水份5% 4.5% 4.灰份：灰份：5%5%以下以下 5.5.总总 磷量磷量0.2% 6.0.2% 6.氯化物氯化物5% 7.pH5% 7.pH值：值：5-75-7 。 牛肉膏(Beef Extract) 采用新鲜牛肉经过剔除脂肪、消化、过滤、浓采用新鲜牛肉经过剔除脂肪、消化、过滤、浓 缩而得到的一种棕黄色至棕褐色的膏状物。有缩而得到的一种棕黄色至棕褐色的膏状物。有 牛肉自然香味，易溶于水，水溶液呈淡黄

21、色。牛肉自然香味，易溶于水，水溶液呈淡黄色。 牛肉膏当中含有肌酸、肌酸酐、多肽类、氨基牛肉膏当中含有肌酸、肌酸酐、多肽类、氨基 酸类、核苷酸类、有机酸类、矿物质类及维生酸类、核苷酸类、有机酸类、矿物质类及维生 素类的水溶性物质。该产品广泛应用于生物制素类的水溶性物质。该产品广泛应用于生物制 药发酵及各种培养基的制备。药发酵及各种培养基的制备。 酵母浸提物 酵母粉酵母粉 (Yeast Extract powder) (Yeast Extract powder) 酵母浸粉酵母浸粉 采用新鲜酵母经酵母自溶、过滤、浓缩、喷雾干燥而得到的采用新鲜酵母经酵母自溶、过滤、浓缩、喷雾干燥而得到的 一种浅黄色至

22、类白色干燥粉末。有酵母自然香味，易溶于水，一种浅黄色至类白色干燥粉末。有酵母自然香味，易溶于水， 水溶液呈淡黄色。极具吸湿性，水溶液呈淡黄色。极具吸湿性， 酵母粉含有氨基酸类、肽类、水溶性维生素、及酵母多糖、酵母粉含有氨基酸类、肽类、水溶性维生素、及酵母多糖、 酵母核酸组成的一种混合物，含有丰富的酵母核酸组成的一种混合物，含有丰富的B B族维生素和各种氨族维生素和各种氨 基酸。核苷酸类、有机酸类、矿物质类及维生素类的水溶性基酸。核苷酸类、有机酸类、矿物质类及维生素类的水溶性 物质。一般的用量为物质。一般的用量为0.2%0.2%0.5%0.5%。 酵母膏酵母膏 (Yeast Extract) (

23、Yeast Extract) 酵母浸膏酵母浸膏 采用新鲜酵母经酵母自溶、过滤、浓缩而得到的一种棕黄色采用新鲜酵母经酵母自溶、过滤、浓缩而得到的一种棕黄色 至棕褐色的膏状物。有酵母自然香味，易溶于水，水溶液呈至棕褐色的膏状物。有酵母自然香味，易溶于水，水溶液呈 淡黄色至浅棕色。含氨基酸类、肽类、水溶性维生素、及酵淡黄色至浅棕色。含氨基酸类、肽类、水溶性维生素、及酵 母多糖、酵母核酸组成的一种混合物，含有丰富的母多糖、酵母核酸组成的一种混合物，含有丰富的B B族维生素族维生素 和各种氨基酸。核苷酸类、有机酸类、矿物质类及维生素类和各种氨基酸。核苷酸类、有机酸类、矿物质类及维生素类 的水溶性物质。一

24、般的用量为的水溶性物质。一般的用量为0.2%0.2%0.5%0.5%。 黄豆粉（黄豆粉（soybean meal)soybean meal) 黄豆粉是发酵生产中常用的有机氮源。黄豆粉是发酵生产中常用的有机氮源。 根据油脂含量可将其分为三类：根据油脂含量可将其分为三类： 全脂黄豆粉全脂黄豆粉( (含油脂含油脂18%)18%)，低脂黄豆粉，低脂黄豆粉( (含油脂含油脂 9%)9%)，脱脂黄豆粉，脱脂黄豆粉( (含油脂含油脂2%)2%)。 低温提取油脂后加工制备；高温提取油脂后加低温提取油脂后加工制备；高温提取油脂后加 工制备。工制备。 酶解大豆水解液的应用及优点。酶解大豆水解液的应用及优点。 棉籽

25、饼粕，花生粕也是应用较广泛的有机氮源。棉籽饼粕，花生粕也是应用较广泛的有机氮源。 玉米浆玉米浆(Corn Steep Liquor(Corn Steep Liquor，简称，简称 CSL)CSL) 玉米浆是用亚硫酸浸泡玉米的水经过浓缩玉米浆是用亚硫酸浸泡玉米的水经过浓缩 加工制成的，呈鲜黄到暗褐色、浓稠不透加工制成的，呈鲜黄到暗褐色、浓稠不透 明的絮状悬浮物，约含明的絮状悬浮物，约含50%50%干物质；干物质； 玉米浆中含有较丰富的玉米可溶性蛋白，玉米浆中含有较丰富的玉米可溶性蛋白， 很容易被微生物利用。富含维生素。很容易被微生物利用。富含维生素。 由于玉米的来源，不同加工条件各异，因由于玉米

26、的来源，不同加工条件各异，因 此，玉米浆的成分常有较大波动，在使用此，玉米浆的成分常有较大波动，在使用 时应注意适当调配。时应注意适当调配。 玉米浆粉的应用。玉米浆粉的应用。 无机氮源无机氮源(inorganic N source)(inorganic N source) 多种放线菌、霉菌或细菌都能利用各种无机多种放线菌、霉菌或细菌都能利用各种无机 氮源为主要或辅助氮源，氮源为主要或辅助氮源， 常用的有硫酸铵、硝酸铵等。常用的有硫酸铵、硝酸铵等。 铵盐中的铵氮可以直接被菌体利用来合成细胞铵盐中的铵氮可以直接被菌体利用来合成细胞 中的含氮物质，硝基氮必须先还原成氨后，才中的含氮物质，硝基氮必须先

27、还原成氨后，才 能被利用，所以铵盐的利用比硝基快。能被利用，所以铵盐的利用比硝基快。 无机氮源的生理酸或生理碱物质无机氮源的生理酸或生理碱物质 生理酸性物质：如硫酸铵生理酸性物质：如硫酸铵 （NHNH4 4）2SO2SO4 4 2NH 2NH3 3 + H + H2 2SOSO4 4 生理碱性物质，如硝酸盐生理碱性物质，如硝酸盐 NaNONaNO3 3 + 4H + 4H2 2 NH NH3 3 + 2H + 2H2 2O + NaOHO + NaOH 无机盐及微量元素无机盐及微量元素 磷酸盐磷酸盐: :核蛋白等重要细胞物质的组成部分，核蛋白等重要细胞物质的组成部分， 许多辐酶许多辐酶( (或

28、辐基或辐基) )、高能磷酸键的组成部分、高能磷酸键的组成部分 磷在菌体生长、繁殖和代谢活动中起着极其重磷在菌体生长、繁殖和代谢活动中起着极其重 要的作用，磷还可以防止青霉素的破坏，要的作用，磷还可以防止青霉素的破坏， 过量的磷酸盐对某些抗生素合成产生抑制作用。过量的磷酸盐对某些抗生素合成产生抑制作用。 培养基中钙盐过多时，会形成磷酸钙沉淀，降培养基中钙盐过多时，会形成磷酸钙沉淀，降 低培养基中可溶性磷的含量，低培养基中可溶性磷的含量， 当培养基中磷和钙均要求较高浓度时，可将两当培养基中磷和钙均要求较高浓度时，可将两 者分别消毒或逐步补加。者分别消毒或逐步补加。 硫和铁硫和铁 硫也是菌体细胞蛋白

29、质的组成部分。它参与合硫也是菌体细胞蛋白质的组成部分。它参与合 成含硫氨基酸的元素，也是某些抗生素分子中成含硫氨基酸的元素，也是某些抗生素分子中 的组成元素。含硫的氨基酸，如甲硫氨酸是甲的组成元素。含硫的氨基酸，如甲硫氨酸是甲 基供体。基供体。 铁是菌体细胞色素、细胞色素氧化酶和过氧化铁是菌体细胞色素、细胞色素氧化酶和过氧化 物酶的组成元素，是菌体生命活动必须的元素物酶的组成元素，是菌体生命活动必须的元素 之一。之一。 微量金属无素微量金属无素 锌、镁、钴等离子是某些酶的辅基或激活剂。锌、镁、钴等离子是某些酶的辅基或激活剂。 微量的锌对青霉素发酵有促进作用，但过量时微量的锌对青霉素发酵有促进作

30、用，但过量时 对青霉素有破坏作用。对青霉素有破坏作用。 镁离子除了有激活一些酶的作用外，还可提高镁离子除了有激活一些酶的作用外，还可提高 抗生素生产菌对自己所产抗生素的耐性。抗生素生产菌对自己所产抗生素的耐性。 钴离子也能激活一些酶，又是维生素钴离子也能激活一些酶，又是维生素B B12 12的组成 的组成 元素，发酵中加入一定量的钴盐，能使维生素元素，发酵中加入一定量的钴盐，能使维生素 B B12 12的产量提高数倍。 的产量提高数倍。 前体物前体物(precursors)(precursors) 前体物以整体结构加入到新合成的物质中。前体物以整体结构加入到新合成的物质中。 在培养基中加入前体

31、物可大大提高产物的浓度。在培养基中加入前体物可大大提高产物的浓度。 如何寻找到合适的前体物是培养基配方研究的如何寻找到合适的前体物是培养基配方研究的 重点。重点。 青霉素的前体物质是苯乙酸及有关衍生物；青霉素的前体物质是苯乙酸及有关衍生物； 金霉素的前体物质是氯化物；金霉素的前体物质是氯化物； 维生素维生素B B12 12的前体物是钴化物； 的前体物是钴化物； 胡萝卜素的前体物是胡萝卜素的前体物是-紫罗兰酮，等等紫罗兰酮，等等 促进剂 促进剂是指哪些既不是营养物又不是前体，但促进剂是指哪些既不是营养物又不是前体，但 能提高产物产量的添加剂。能提高产物产量的添加剂。 加入巴比妥盐能使利福霉素单位

32、增加，并能使加入巴比妥盐能使利福霉素单位增加，并能使 链霉菌推迟自溶，延长分泌期链霉菌推迟自溶，延长分泌期 抑制剂（抑制剂（inhibitor)inhibitor) 加入抑制剂会抑制某些代谢途径的进行，同时加入抑制剂会抑制某些代谢途径的进行，同时 会使另一代谢途径活跃，从而获得人们所需要会使另一代谢途径活跃，从而获得人们所需要 的某种产物或使正常代谢的某一代谢中间物积的某种产物或使正常代谢的某一代谢中间物积 累起来。累起来。 四环素发酵中，加入溴化剂四环素发酵中，加入溴化剂(NaBr)(NaBr)能抑制金霉能抑制金霉 素形成的代谢途径，促进四环素的生成。素形成的代谢途径，促进四环素的生成。 水

33、 在液态发酵培养基中，水的比例最大。在液态发酵培养基中，水的比例最大。 水源：自来水，深井水，河水，不同地水源：自来水，深井水，河水，不同地 区的水源；区的水源； 水质：主要是水中的杂质，尤其是微量水质：主要是水中的杂质，尤其是微量 元素的含量。元素的含量。 自来水管中的铁锈往往在不同时间含量自来水管中的铁锈往往在不同时间含量 不同。一般在早班时含量最高。不同。一般在早班时含量最高。 增加细胞通透性的物质 表面活性剂： 吐温-80； 曲拉通 Toluene TritonX-100 Span-20 但需注意是否残留在产品中，是否符合药品安 全 4.1.2培养基的种类培养基的种类 培养基的种类与选

34、择培养基的种类与选择 培养基的类型：培养基的类型： 按培养基组成物质的纯度，分为合成培养基按培养基组成物质的纯度，分为合成培养基 和天然培养基和天然培养基( (复合培养基复合培养基) )。 按培养基的状态，培养基可分为固体培养基、按培养基的状态，培养基可分为固体培养基、 半固体培养基和液体培养基。半固体培养基和液体培养基。 依据在生产中的用途依据在生产中的用途( (或作用或作用) )，可将生产上应，可将生产上应 用培养基分为孢子培养基、种子培养基和生产用培养基分为孢子培养基、种子培养基和生产 培养基。培养基。 (1)孢子孢子(spore)(spore)培养基培养基 孢子培养基是供菌种繁殖孢子的

35、一种常用固体培孢子培养基是供菌种繁殖孢子的一种常用固体培 养基，对这种培养基的要求是能够使菌体迅速生养基，对这种培养基的要求是能够使菌体迅速生 长，产生较多优质的孢子，并要求这种培养基不长，产生较多优质的孢子，并要求这种培养基不 易引起菌种发生变异。易引起菌种发生变异。 孢子培养基的基本配制要求：孢子培养基的基本配制要求： 营养不要太丰富营养不要太丰富( (有机氮源有机氮源) )，否则不易产生孢子；，否则不易产生孢子； 如土豆葡萄糖培养基如土豆葡萄糖培养基(PD).(PD). 所用无机盐的浓度要适量，否则会影响孢子量和所用无机盐的浓度要适量，否则会影响孢子量和 孢子颜色；孢子颜色； 要注意孢子

36、培养基的要注意孢子培养基的pHpH和湿度。生产中常用的孢和湿度。生产中常用的孢 子培养基有麸皮培养基，大子培养基有麸皮培养基，大( (小小) )米培养基，由葡米培养基，由葡 萄糖萄糖( (或淀粉或淀粉) )、无机盐、蛋白胨等配制的琼脂斜、无机盐、蛋白胨等配制的琼脂斜 面培养基面培养基 (2) (2) 种子种子(seed)(seed)培养基培养基 种子培养基是供孢子发芽和菌种生长繁殖用的。种子培养基是供孢子发芽和菌种生长繁殖用的。 营养成分应是易被菌体吸收利用的，同时要比较营养成分应是易被菌体吸收利用的，同时要比较 丰富与完全，其中氮源和维生素的含量要高些，丰富与完全，其中氮源和维生素的含量要高

37、些， 但总浓度以略稀薄为宜以便菌体的生长繁殖。但总浓度以略稀薄为宜以便菌体的生长繁殖。 种子培养基的营养成分是易于吸收的碳源和氮源，种子培养基的营养成分是易于吸收的碳源和氮源， 如葡萄糖、硫酸铵、尿素、玉米浆、酵母膏和蛋如葡萄糖、硫酸铵、尿素、玉米浆、酵母膏和蛋 白胨等。白胨等。 种子质量的好坏对发酵的影响很大，为了使培养种子质量的好坏对发酵的影响很大，为了使培养 的种子能够满足发酵的要求，必须将种子培养基的种子能够满足发酵的要求，必须将种子培养基 和发酵的要求联系起来考虑。和发酵的要求联系起来考虑。 最后一级种子培养基的成分应接近发酵培养基，最后一级种子培养基的成分应接近发酵培养基， 可使种

38、子进入发酵培养基后能迅速适应，快速生可使种子进入发酵培养基后能迅速适应，快速生 长。长。 (3)发酵培养基发酵培养基 发酵培养基是供菌种生长、繁殖和合成产物之发酵培养基是供菌种生长、繁殖和合成产物之 用。它既要使种子接种后迅速生长，达到一定用。它既要使种子接种后迅速生长，达到一定 的菌体浓度，又要使长好的菌体能迅速合成所的菌体浓度，又要使长好的菌体能迅速合成所 需产物。需产物。 发酵培养基的组成除有菌体生长所必需的元素发酵培养基的组成除有菌体生长所必需的元素 和化合物外，还要有产物所需的特定元素、前和化合物外，还要有产物所需的特定元素、前 体和促进剂等。但如果生长和生物合成产物需体和促进剂等。

39、但如果生长和生物合成产物需 要的总的碳源、氮源、磷源等的浓度太高，或要的总的碳源、氮源、磷源等的浓度太高，或 生长和合成两阶段各需的最适条件不同时，还生长和合成两阶段各需的最适条件不同时，还 应考虑补加培养基来满足发酵工艺的要求应考虑补加培养基来满足发酵工艺的要求 4.1.3培养基的优化培养基的优化 培养基设计的原理：培养基设计的原理： 根据微生物的性质选取营养物质的种类；根据微生物的性质选取营养物质的种类； 培养基的组分（来源和加工方法）；配比；缓培养基的组分（来源和加工方法）；配比；缓 冲能力，粘度，消毒是否彻底，是否破坏？原冲能力，粘度，消毒是否彻底，是否破坏？原 料中是否有不良杂质。料

40、中是否有不良杂质。 注意快速利用的碳注意快速利用的碳( (氮氮) )源和慢速利用的碳源和慢速利用的碳( (氮氮) ) 源的相互配合源的相互配合, ,发挥各自的优势发挥各自的优势, ,避其所短。避其所短。 要注意生理酸、碱性盐和要注意生理酸、碱性盐和pHpH缓冲剂的加入和搭缓冲剂的加入和搭 配。配。 碳氮比碳氮比 选用适当的碳氮比。培养基中的碳氮比选用适当的碳氮比。培养基中的碳氮比 的影响十分明显。氮源过多，会使菌体的影响十分明显。氮源过多，会使菌体 生长过于旺盛，生长过于旺盛，pHpH偏高，不利于代谢产偏高，不利于代谢产 物的积累；氮源不足，则菌体繁殖量少，物的积累；氮源不足，则菌体繁殖量少，

41、 从而影响产量。碳源过多，则容易形成从而影响产量。碳源过多，则容易形成 较低的较低的pHpH，若氮源不足，易引起菌体衰，若氮源不足，易引起菌体衰 老和自溶。老和自溶。 从碳氮元素分析来看，酵母菌细胞中碳从碳氮元素分析来看，酵母菌细胞中碳 氮比约为氮比约为100:20100:20；霉菌约为；霉菌约为100:10100:10；一；一 般 工 业 发 酵 培 养 基 的 碳 氮 比 约 为般 工 业 发 酵 培 养 基 的 碳 氮 比 约 为 100:0.2-2.0100:0.2-2.0（思考：为何低得多）。（思考：为何低得多）。 碳氮比如何计算？ 含碳化合物与含氮化合物：含碳化合物与含氮化合物：

42、C/NC/N比。重量比。重量 比比, ,摩尔比。摩尔比。 含碳原料中含碳原料中C C含量的计算：含量的计算： 含含N N原料，氨基酸中的原料，氨基酸中的N N计算：计算： 蛋白质的原料（豆饼粉等）中蛋白质的原料（豆饼粉等）中N N的计算：要的计算：要 根据粗蛋白质的含量，折算成根据粗蛋白质的含量，折算成N N含量。含量。 含含N N原料中，如有原料中，如有C C的含量，也应计入的含量，也应计入C C源总源总 量。量。 培养基优化实验方法培养基优化实验方法 一般采用摇瓶，小型发酵罐实验；一般采用摇瓶，小型发酵罐实验； 先进行单因素实验，最后再进行综合实先进行单因素实验，最后再进行综合实 验。验。

43、 在选择培养基中使用的最适原材料种类在选择培养基中使用的最适原材料种类 和浓度配比时，经常采用的方法有单因和浓度配比时，经常采用的方法有单因 子实验法、正交试验设计和均匀试验设子实验法、正交试验设计和均匀试验设 计等。计等。 采用正交试验设计或均匀试验设计等方采用正交试验设计或均匀试验设计等方 法，可大大加快试验进程。法，可大大加快试验进程。 4.1.4影响培养基质量的因素影响培养基质量的因素 原材料质量的影响原材料质量的影响 水质的影响水质的影响 灭菌操作的影响灭菌操作的影响 糖类在高温条件下易被破坏，特别是还原糖与糖类在高温条件下易被破坏，特别是还原糖与 氨基酸、肽类或蛋白质等有机氮源一起

44、加热时，氨基酸、肽类或蛋白质等有机氮源一起加热时， 更容易产生化学反应，形成更容易产生化学反应，形成5-5-甲基糠醛和鬃色甲基糠醛和鬃色 的类黑精。为避免糖类与其它成分在灭菌过程的类黑精。为避免糖类与其它成分在灭菌过程 中相互接触，在生产中有时将糖和其它成分分中相互接触，在生产中有时将糖和其它成分分 别灭菌，别灭菌， 其他因素的影响其他因素的影响 培养基的培养基的pH: pHpH: pH对菌体的生物代谢有较对菌体的生物代谢有较 大的影响。在工业上，通过改变培养基大的影响。在工业上，通过改变培养基 成分的配比，使在发酵过程中的成分的配比，使在发酵过程中的pHpH变化变化 适合菌种代谢的要求，或者

45、直接加酸或适合菌种代谢的要求，或者直接加酸或 碱调节。碱调节。 培养基粘度：特别是用如淀粉、黄豆培养基粘度：特别是用如淀粉、黄豆 饼粉、花生饼粉等，所配制的培养基比饼粉、花生饼粉等，所配制的培养基比 较稠厚，对空气的利用、染菌率的控制较稠厚，对空气的利用、染菌率的控制 以及各项参数的自控都不利，对提取精以及各项参数的自控都不利，对提取精 制也有影响。制也有影响。 4.2菌种扩大培养菌种扩大培养 种子的概念种子的概念 3.4.1 3.4.1 实验室种子培养实验室种子培养 3.4.2 3.4.2 生产车间种子培养生产车间种子培养 3.4.3 3.4.3 接种龄与接种量接种龄与接种量 3.4.4 3

46、.4.4 影响种子质量的因素影响种子质量的因素 3.4.5 3.4.5 种子质量的控制措施种子质量的控制措施 保存菌种的种类保存菌种的种类 菌种的保存方式：斜面菌；砂土管，低菌种的保存方式：斜面菌；砂土管，低 温保存，冷冻干燥管，液氮保存；温保存，冷冻干燥管，液氮保存； 孢子悬浮液，液体种子，固体种；孢子悬浮液，液体种子，固体种； 菌种的活化：尤其是冷藏法保存的菌种菌种的活化：尤其是冷藏法保存的菌种 需先培养一定时间再移接若干代。需先培养一定时间再移接若干代。 菌种低温保藏设备菌种低温保藏设备 超低温冰箱（超低温冰箱（-85-85）和液氮瓶（）和液氮瓶（-195-195）：）： 一般植物或微生

47、物种子保存用超低温冰箱较一般植物或微生物种子保存用超低温冰箱较 多。多。 -85-85冰箱，要选择质量好的，尤其是冰箱冰箱，要选择质量好的，尤其是冰箱 压缩机的性能是最主要的指标。压缩机的性能是最主要的指标。 冰箱所在地的电源应有保证。以防断电时间冰箱所在地的电源应有保证。以防断电时间 过长时引起菌种的衰退。电压稳定（故需要过长时引起菌种的衰退。电压稳定（故需要 配稳压电源）。配稳压电源）。 冷冻菌种的复活冷冻菌种的复活 将冷冻或液氮保藏的菌种取出，迅速放入将冷冻或液氮保藏的菌种取出，迅速放入3737 水浴中解冻。一般需水浴中解冻。一般需22.5min22.5min，等完全解冻后，等完全解冻后

48、， 用无菌吸管，在安瓿管内注入用无菌吸管，在安瓿管内注入0.3-0.5ml0.3-0.5ml的无的无 菌生理盐水或菌生理盐水或1% 1% 麦芽汁等适宜的液体培养基，麦芽汁等适宜的液体培养基， 轻轻振荡，使冻于菌体溶解呈悬浮状。取轻轻振荡，使冻于菌体溶解呈悬浮状。取 0.10.10.2ml0.2ml菌体悬浮液，移植于适宜的琼脂斜菌体悬浮液，移植于适宜的琼脂斜 面平板培养基上，剩余的菌液，注入适宜的面平板培养基上，剩余的菌液，注入适宜的 液体培养基内，然后在建议的温度下培养。液体培养基内，然后在建议的温度下培养。 菌种扩大培养过程 保存菌种（斜面种，沙土管，冻干管）保存菌种（斜面种，沙土管，冻干管

49、） 斜面种子（活化，培养）斜面种子（活化，培养） 摇瓶，茄子瓶斜面，固体培养基摇瓶，茄子瓶斜面，固体培养基 种子罐（一级，二级，三级或四级）种子罐（一级，二级，三级或四级） 4.2.1实验室种子培养实验室种子培养 对于细菌类种子，一般采用从斜面移接对于细菌类种子，一般采用从斜面移接 到三角摇瓶；到三角摇瓶； 对于产孢子的菌种，可采用砂土管孢子，对于产孢子的菌种，可采用砂土管孢子， 或冷冻管孢子等，接入固态培养基上，或冷冻管孢子等，接入固态培养基上， 培养大量孢子；培养大量孢子； 对于不产孢子的放线菌或霉菌，也可在对于不产孢子的放线菌或霉菌，也可在 茄子瓶中大量培养菌丝体，或摇瓶培养。茄子瓶中大

50、量培养菌丝体，或摇瓶培养。 孢子浓度与孢子浓度与OD值的关系：值的关系： 由于测定由于测定ODOD值比孢子数的测定更为简单，而值比孢子数的测定更为简单，而 孢子数与孢子数与ODOD值存在一定的线性关系，故经过值存在一定的线性关系，故经过 实验，可确定两者之间的关系。计算公式实验，可确定两者之间的关系。计算公式 Y Y= 80.79045= 80.79045X X + 3.61871 + 3.61871 （3-273-27） 式中式中 Y Y孢子浓度，个孢子浓度，个/mL/mL； X XODOD750 750。 。 4.2.2生产车间种子培养生产车间种子培养 实验室培养的菌悬液或菌丝体种子接入种

51、子罐，实验室培养的菌悬液或菌丝体种子接入种子罐， 一般采用压差法。孢子悬浮液一般采用微滤法。一般采用压差法。孢子悬浮液一般采用微滤法。 注意罐压应高于气压。注意罐压应高于气压。 逐级扩大的种子罐；逐级扩大的种子罐； 种子罐级数的确定：依据菌种特性，孢子发芽种子罐级数的确定：依据菌种特性，孢子发芽 数量，菌种繁殖速度，发酵罐容积等。数量，菌种繁殖速度，发酵罐容积等。 一般细菌类，可采用一级种子；生长慢的菌种，一般细菌类，可采用一级种子；生长慢的菌种， 采用二级种子（发芽罐和繁殖罐二级）；采用二级种子（发芽罐和繁殖罐二级）； 浅盘式种曲培养机 该种曲机分为两部分：培养室和附属装置。培养室该种曲机分

52、为两部分：培养室和附属装置。培养室 是一个卧式的夹套式压力容器。培养室内有小车，是一个卧式的夹套式压力容器。培养室内有小车， 车内放置车内放置10201020个培养盘。曲料放在培养盘内。培个培养盘。曲料放在培养盘内。培 养室内还设有循环室内空气用的风扇、种曲流向分养室内还设有循环室内空气用的风扇、种曲流向分 配盘和加湿雾化器等。配盘和加湿雾化器等。 附属装置包括种曲供给装置（二级种曲贮罐、无菌附属装置包括种曲供给装置（二级种曲贮罐、无菌 压缩空气供给装置）、空气供给装置（空压机、压压缩空气供给装置）、空气供给装置（空压机、压 缩空气贮罐、过滤器和灭菌装置）、真空吸引装置缩空气贮罐、过滤器和灭菌

53、装置）、真空吸引装置 （水力喷射器，用于培养室内物料降温）、温度调（水力喷射器，用于培养室内物料降温）、温度调 节装置（控温台、温冷水调温装置和加湿装置）。节装置（控温台、温冷水调温装置和加湿装置）。 种曲培养机 4.2.3接种龄与接种量接种龄与接种量 接种龄：以菌种处于旺盛的对数生长期，且菌接种龄：以菌种处于旺盛的对数生长期，且菌 体量未达到最高峰时为宜；体量未达到最高峰时为宜； 过于年轻的种子，造成前期生长慢，发酵周期过于年轻的种子，造成前期生长慢，发酵周期 长的后果；年老的种子，生产能力下降，菌丝长的后果；年老的种子，生产能力下降，菌丝 过早衰老。过早衰老。 接种量：种子液体积与接种后培

54、养液体积之比。接种量：种子液体积与接种后培养液体积之比。 决定于菌种的繁殖速度。接种量一般为决定于菌种的繁殖速度。接种量一般为5-15%5-15%。 接种量多：缩短时间，产物提前合成；但太多，接种量多：缩短时间，产物提前合成；但太多， 则影响产物合成。易形成菌丝球。则影响产物合成。易形成菌丝球。 4.2.4影响种子质量的因素影响种子质量的因素 原材料的质量；原材料的产地，同一产原材料的质量；原材料的产地，同一产 地不同批次质量的波动；地不同批次质量的波动； 培养条件：培养条件：pHpH，温度，湿度，通气等。，温度，湿度，通气等。 斜面的冷藏时间。斜面的冷藏时间。 如何判断种子的质量：如何判断种

55、子的质量：pHpH，培养基中磷，培养基中磷， 氮，氨基酸含量，菌丝形态，浓度，培氮，氨基酸含量，菌丝形态，浓度，培 养液外观，酶活。养液外观，酶活。 4.2.5种子质量的控制措施种子质量的控制措施 菌种培养人员的素质和责任心；菌种培养人员的素质和责任心； 菌种观察及选择（菌丝形态整齐，孢子菌种观察及选择（菌丝形态整齐，孢子 丰满）。丰满）。 菌种稳定性定期检查的必要性；经常性菌种稳定性定期检查的必要性；经常性 的摇瓶实验确定其生产性能。的摇瓶实验确定其生产性能。 无菌检查。无菌检查。 4.3培养基灭菌培养基灭菌 4.3.1 4.3.1 概述概述 4.3.2 4.3.2 培养基和设备灭菌培养基和

56、设备灭菌 4.3.3 4.3.3 空气除菌空气除菌 4.3.1 4.3.1 概述概述 4.3.1.1 4.3.1.1 灭菌操作的重要性灭菌操作的重要性 灭菌是指用化学的或物理学的方法杀灭灭菌是指用化学的或物理学的方法杀灭 或除掉物料或设备中所有有生命的有机或除掉物料或设备中所有有生命的有机 体的技术或工艺过程。体的技术或工艺过程。 工业发酵法药物生成多为需氧的纯种发工业发酵法药物生成多为需氧的纯种发 酵过程，因此与生产相关的原材料、设酵过程，因此与生产相关的原材料、设 备等均需彻底除菌，这是防止发酵过程备等均需彻底除菌，这是防止发酵过程 染菌、确保正常生产的关键。染菌、确保正常生产的关键。 4

57、.3.1.2灭菌方法灭菌方法 火焰灭菌火焰灭菌: :接种针接种针, ,玻璃棒玻璃棒, ,三角瓶口三角瓶口. . 干热灭菌干热灭菌:160:160度度,1,1小时小时. .用于灭菌后需保持干用于灭菌后需保持干 燥的物品燥的物品. .电热法或红外线电热法或红外线. . 湿热灭菌湿热灭菌: :培养基等培养基等. . 射线灭菌射线灭菌: :紫外紫外( (工作场所工作场所),),射线射线( (干料干料).). 化学试剂灭菌化学试剂灭菌: :工作场所工作场所. . 高压静电灭菌高压静电灭菌: :空气空气. . 介质过滤除菌介质过滤除菌: :空气空气. . 化学试剂灭菌化学试剂灭菌 0.1-0.25%高锰酸

58、钾高锰酸钾:皮肤灭菌皮肤灭菌; 2-5%漂白粉漂白粉:用具和车间环境消毒用具和车间环境消毒; 75%酒精酒精:皮肤和玻璃器皿表面皮肤和玻璃器皿表面; 0.25%新洁尔灭溶液新洁尔灭溶液:皮肤和玻璃器皿表面皮肤和玻璃器皿表面;环环 境消毒境消毒. 0.5%甲醛甲醛:6-12小时可杀灭所有芽孢细菌小时可杀灭所有芽孢细菌,可用可用 于无菌室于无菌室,摇瓶间摇瓶间,空罐空罐,车间和熏蒸灭菌车间和熏蒸灭菌 5%石炭酸或石炭酸或1%来苏尔来苏尔:器械或无菌室器械或无菌室,车间环车间环 境境 4.3.2培养基和设备灭菌培养基和设备灭菌 湿热灭菌法：湿热灭菌法： 对培养基和设备的灭菌对培养基和设备的灭菌,以湿

59、热法为佳。效率高以湿热法为佳。效率高, 经济实用经济实用. 湿蒸汽穿透力强湿蒸汽穿透力强,湿热使蛋白质凝固湿热使蛋白质凝固,使微生物使微生物 致死致死. 常用用于培养基的灭菌常用用于培养基的灭菌. 主要参数主要参数:灭菌温度，时间和压力灭菌温度，时间和压力. 常用常用:121度度,20-30min. 培养基灭菌过程中，在杀菌的同时，培养基营培养基灭菌过程中，在杀菌的同时，培养基营 养成分受破坏。养成分受破坏。 故应同时兼顾。应选择恰当的灭菌条件。故应同时兼顾。应选择恰当的灭菌条件。 灭菌方式 空罐灭菌空罐灭菌( (空消空消) )： 实罐灭菌实罐灭菌( (实消实消) )：种子罐，发酵罐，计：种子

60、罐，发酵罐，计 量罐，补料罐等。量罐，补料罐等。 间歇或连续灭菌间歇或连续灭菌( (连消连消) ) 管道灭菌等管道灭菌等 过滤器除菌过滤器除菌 固态培养基的灭菌：蒸煮固态培养基的灭菌：蒸煮 （1）加热灭菌原理）加热灭菌原理 微生物的热阻：微生物的热阻： 加热灭菌原理：热凝固微生物蛋白质。不可逆变性加热灭菌原理：热凝固微生物蛋白质。不可逆变性 一般营养细胞，一般营养细胞，6060度，度，10min10min（巴氏法），死亡。（巴氏法），死亡。 细菌芽孢：细菌芽孢：100100度，致死需数分钟至数小时。度，致死需数分钟至数小时。 嗜热菌，嗜热菌，120120度，度，20-30min20-30min