大二：紫外、荧光分光光度计--(上学期)

1、1、设备名称：RF-5301PC荧光分光光度计;二、使用原理1、荧光分光光度计由高压汞灯或価灯发出的紫外光和蓝紫光经滤光片照射到样品池中，激发 样品中的荧光物质发出荧光，荧光经过滤过和反射后，被光电倍增管所接受， 然后以图或数字的形式显示出来。荧光是光致发光，任何荧光物质都具有激发 光谱和发射光谱，发射波长总是大于激发波长。荧光激发光谱是通过测定荧光体 的发光通量随波长变化而获得的光谱，反映不同波长激发光引起荧光的相对效 率。荧光发射光谱是当荧光物质在固定的激发光源照射后所产生的分子荧光，是 荧光强度对发射波长的关系曲线，表示在所发射的荧光中各种波长相对强度。山 于各种不同的荧光物质有它们各自

2、特定的荧光发射波长，可用它来鉴定荧光物 质。有些发荧光的物质其荧光强度与物质的浓度成正比，故可用荧光分光光度法 测定其含量。 在溶液中，当荧光物质的浓度较低时，其荧光强度与该物质的浓 度通常有良好的正比关系，即IF=KC,利用这种关系可以进行荧光物质的定量分 析，与紫外-可见分光光度法类似，荧光分析通常也采用标准曲线法进行。利用某 些物质受激发出的荧光，其光强度与该物质的含量成一定函数关系的性质而制 成的。三、组成结构光源、光件、样品池、检测器、数据处理器1、荧光分光光度计I图RF53O1PC荧光分光光度汁主要是由激发光源、激发单色器、样品池、发射单色器、检测器以及数据处理 系统几部分组成1.

3、 光源：为高压汞蒸气灯或毎弧灯，后者能发射出强度较大的连续光谱，且在300nm400nm范围内强度儿乎相等，故较常用。2. 激发单色器：置于光源和样品室之间的为激发单色器或第一单色器，筛选出特定的激发光谱。3. 发射单色器：置于样品室和检测器之间的为发射单色器或笫二单色器，常采用光栅为单色器。 筛选出特定的发射光谱。4. 样品室：通常山石英池（液体样品用）或固体样品架（粉末或片状样品）组成。测量液体时， 光源与检测器成直角安排；测量固体时，光源与检测器成锐角安排。5. 检测器：一般用光电管或光电倍增管作检测器。可将光信号放大并转为电信号四、功能用途1、荧光分光光度计是用于扫描液相荧光标记物所发

4、出的荧光光谱的一种仪 器，扫描范围200-900mn,通常比紫外分光光度计检测灵敏度高23个数量级， 能在紫外“力不能及”的领域发挥作用，是现代分析测试领域尤其是痕量分析领 域一种应用广泛的重要分析仪器，在生命科学、医学及临检、药学及药理学、生 化、食品、环保、公安等领域有广泛应用。1 医学和临床检验生物体试料的临床分析2. 药学和药理学天然药物分析，药品质量控制和药物代谢的研究3. 生物化学对于生物体内微量物质的测定4. 食品工业食品中痕量组分的测定5. 污染物的分析大气污染、环境卫生检测，食品污染物研究等6 有机和无机化学用吸光光度法不能测定的痕量组分分析五、注意维护保养1、仪器一定要安装

5、在稳定牢固的实验台上，远离振动源。2、配灯寿命为500h,超过使用时间必须更换，否则易引起爆炸。3、荧光分光光度计毎灯点亮后需一定时间稳定，故进行精密测试应在30分钟 以上。关闭氤灯电源后，若要重新使用，请等待60秒以后重新触发。4、供试品测试完毕后应及时取出，长时间放置在样品室中会污染光学系统，引 起性能下降。样品室应保持干燥，应及时更换干燥剂。六、仪器操作现场具体操作一、设备名称：UV2401紫外可见分光光度计二、使用原理由于各种物质具有各自不同的分子、原子和不同的分子空间结构，其吸收光 能量的情况也就不会相同。因此，每种物质就有其特有的、固定的吸收光谱曲线, 可根据吸收光谱上的某些特征波

6、长处的吸光度的高低判别或测定该物质的含量。 因为许多物质在紫外-可见光区有特征吸收峰，所以可用紫外分光光度法对这些 物质分别进行测定（定量分析和定性分析）O紫外分光光度法使用基于朗伯-比 耳定律。朗伯-比耳定律（Lambert-Beer）是光吸收的基本定律，俗称光吸收定律, 是分光光度法定量分析的依据和基础。当入射光波长一定时，溶液的吸光度A 是吸光物质的浓度C及吸收介质厚度1 （吸收光程）的函数。三、组成结构主要由辐射源（光源）、色散系统、检测系统、吸收池、数据处理机、自动记录 器及显示器等部件组成。四. 功能用途1检定物质根据吸收光谱图上的一些特征吸收，特别是最大吸收波长虽ax和摩尔吸收系数 是检定