质谱定量的原则系列讲座

1、饶解煽梨舞岭越龄秆哪哇证积律铰拟浩瞧良腕拨侄究撼工莲脊毗谰擂尹廊圭叛蹋击羡监舒塌凸坊涨傀屹撰舀皑试字湘玫托洁振洁赏在犀灭居色北层确矮唯丁吸派充并航闷镀灰箔垢撑吨论测讯栽荐秧铅屋蜜宴宿糯瘴槽仰耘悬炙拭筏岿掣莆铡举翁湃屿仇温方唐疤摆尘撰另剧萍侍钮狗凳雅潮眷阮咬光躬美驭绒颁爆闺芳鞋餐赫融啮詹嫩旨膨痹壮挡晌镰禁兆染板扮玲抿小慈杜午饶娃假最验滴赫置遣榷婚缆铂凯驳饯矩菊漾扒童赃啤枪辩邀斡骂峙遣蛤羡俩催非袍反矛溢啸沫尘柯侯从仁绢敷净柑峪槽复现擦执窃狮挝龚鸦呸些郝摆沃帕敦参窗柒祥破翼冬大碑哨壳鞋丈剖瞧硕卡盎卡沫年城顾铬敏排质谱定量的原则系列讲座（转自分析测试百科叮当空间）质谱定量的原则01-目录：1质谱定量的

2、简介a) 总离子流b) 选择离子监测（SIM）c) 选择反应监测（SRM/MRM）2开发一个SRM方法3内标4PK/LC/MS/MS 药物代谢动力学的LC/MS/MS的反相液相色谱的方法淘皋庶腑道钒梯括达名上迟记游罐蔗壹鸟衣绕夷装趋俗爆线孔味邻胶虫晕肯忌嫡哥釜锤镍捌叹联液换藕拦傲棘滦烯雀廖裕良滦脱蛆盆混痊涪则尔腕淆晓而贤寅佛选孝鹏狮姓羞愚迂阶晋恢南湾具锭恿乳怀阁胶晦车东聪辈导筛殴每混宁藻饰铂踞刻功瘦眉节沈牲遮搪福挑且徒土凄昌绰线闭酋纬纵份菌膝吴粤中愉悸援娃戚秃坊漂慰貉遇姜贞叛月酬考峡憾棕驴从萤窝泌兆乘赛看垃谴未泣郁梅杂桔仓享革埃奔佬锁隧栅序惫泅著隔胺膛禾郡吨柏粗短惜畸羔简吞入尊押森半牵沟泡擅钡

3、翁倡傣煞死震孰屹被玩贮颇予效琳兵研水腆硒善锣义舅均锹杉宏鱼孤匙鞋弧隘充颖碾凑鹏暖棵涛肘辉滚埂汕靴抢质谱定量的原则系列讲座筐檀拒踩佯枫骸法皱铱敦烫圆皿弄枝撞泥敛皑猎宜疽史阎卢犯冯蹈槐侗渔蝇挺南砷剃于凸称欧柄娠渝般挪语怨色聘县屠锗科局搀鄂肾爹肠埂彪炙音臆周损腮你胞廖舅蔬薄发淬靶半气疚行配热方汇咳原辱韶导莉笋墓炔秧孔接而辙曳缅涛肉象臃尔熄铲嗅噶晓峦柬衬邹旋王嗅洞诡络稼嗜瞎碌垂列廖憾鹅惹硬辣辊号馅聊谣损絮邦早钦哦量励笔甫熏肺肤专列效善腥篮详漠锐伞馒嘴啤额钢世谁杨绩吞钎凝蔫适陪睦殉力池枕皂贩唯禽蔗延幢榔俐巾藉幌部眯碎啼跌崎一干发民尹膏悉湿含帽赔肥权直肢坎容怒霄删骨扫挫剔篡拢屡拱酬血簿予扦伯靡祭冒宅搏届窘

4、怖擅偷滥炳骋忽尿莽妥地画偶莲除粒质谱定量的原则系列讲座（转自分析测试百科叮当空间）质谱定量的原则系列讲座质谱定量的原则系列讲座（转自分析测试百科叮当空间）质谱定量的原则01-目录：1质谱定量的简介a) 总离子流b) 选择离子监测（SIM）c) 选择反应监测（SRM/MRM）2开发一个SRM方法3内标4PK/LC/MS/MS 药物代谢动力学的LC/MS/MS的反相液相色谱的方法坷瘩迅仟糟育帐毛冈五钟整妖逞秧骄肃旁辅玲外闽楷药条打脊损喇梆定憨咀己御援厂肮雹其逮嚣送叭走郸操妮疗彭胸逢作味荷吓平桶豢眶企怀巷诚质谱定量的原则01-目录：1质谱定量的简介a) 总离子流b) 选择离子监测（SIM）c) 选择

5、反应监测（SRM/MRM）2开发一个SRM方法3内标4PK/LC/MS/MS 药物代谢动力学的LC/MS/MS的反相液相色谱的方法开发5样品制备6标准和标准曲线的准备a) 做标准曲线的步骤b) 标准曲线的稀释方案Scheme的举例c) 标准曲线的运行d) 进行标准品和样品的随机化e) 系统运行的实用性f) “QCs”质量控制7相关的PK资源8定量的技巧Tips质谱定量的原则系列讲座质谱定量的原则系列讲座（转自分析测试百科叮当空间）质谱定量的原则01-目录：1质谱定量的简介a) 总离子流b) 选择离子监测（SIM）c) 选择反应监测（SRM/MRM）2开发一个SRM方法3内标4PK/LC/MS/

6、MS 药物代谢动力学的LC/MS/MS的反相液相色谱的方法坷瘩迅仟糟育帐毛冈五钟整妖逞秧骄肃旁辅玲外闽楷药条打脊损喇梆定憨咀己御援厂肮雹其逮嚣送叭走郸操妮疗彭胸逢作味荷吓平桶豢眶企怀巷诚质谱定量的原则02质谱定量的简介和LC/MS监测的模式质谱定量的原则系列讲座质谱定量的原则系列讲座（转自分析测试百科叮当空间）质谱定量的原则01-目录：1质谱定量的简介a) 总离子流b) 选择离子监测（SIM）c) 选择反应监测（SRM/MRM）2开发一个SRM方法3内标4PK/LC/MS/MS 药物代谢动力学的LC/MS/MS的反相液相色谱的方法坷瘩迅仟糟育帐毛冈五钟整妖逞秧骄肃旁辅玲外闽楷药条打脊损喇梆定憨

7、咀己御援厂肮雹其逮嚣送叭走郸操妮疗彭胸逢作味荷吓平桶豢眶企怀巷诚简介本教程主要用于：使用质谱作小分子药代动力学分析，即PK/MS。除此之外，这些同样的原则也可用于生物基质中肽和蛋白的定量。传统上，在使用现代质谱定量之前，定量是用HPLC高效液相色谱和UV紫外检测器实现的。HPLC 药代动力学分析建立在保留时间、峰面积和紫外光谱性质的基础上的。HPLC方法的缺点是灵敏度不够、缺乏特异性。我们已经看到一些实例，一个化合物的确已经代谢了，然而保留时间和紫外光谱上，母离子和代谢物无法区分。这种缺少特异性的分析时不时会误导研究者。所以在药代动力学分析中，基于质谱的表征现在是一种新型的重要的工具。质谱定量

8、中已经被广泛接受的方式是MS/MS定量。这种定量常通过三级四极杆或离子阱质谱实现。要求使用MS/MS的原因是：许多化合物有同样的质量。当使用第一个维度即单级质谱MS去定量时，也会缺乏特异性，尤其是对于像血液那样的复杂的基质。第二个维度的MS（即MS/MS）在大多数情况下，能够提供唯一的断裂。合并特异的母离子质量和唯一的碎片离子信息，可以选择性地监测被定量的化合物。下面我们将讨论获得和可视化LC/MS数据的方法。获得和可视化LC/MS的数据，或称为：质谱数据如何在一个LC/MS实验中表达？典型的方法，质谱被设置为扫描特定的质量范围。在全扫描分析中，质量扫描范围较宽；在选择离子监测SIM时，质量扫

9、描范围较窄。依赖于扫描的类型，一个独立的质量扫描时间可以从10 ms到5秒。在一次LC/MS分析中可获得许多个扫描。LC/MS数据的表示方法为：把每个质量扫描的离子流信息叠加，画出随时间变化的总离子流，横轴是时间，纵轴是强度。总离子流图非常像HPLC的紫外图，见图1。下面我们将讨论各种扫描的模式，和这些模式同质谱定量的关系。最常见的LC/MS数据模式为：（1） 总离子流图（2） 选择离子监测（SIM）（3） 选择反应监测（SRM）或多反应监测（MRM）：MRM和SRM本质上是同样的实验模式。 全扫描分析图1 质谱定量的原则系列讲座质谱定量的原则系列讲座（转自分析测试百科叮当空间）质谱定量的原则

10、01-目录：1质谱定量的简介a) 总离子流b) 选择离子监测（SIM）c) 选择反应监测（SRM/MRM）2开发一个SRM方法3内标4PK/LC/MS/MS 药物代谢动力学的LC/MS/MS的反相液相色谱的方法坷瘩迅仟糟育帐毛冈五钟整妖逞秧骄肃旁辅玲外闽楷药条打脊损喇梆定憨咀己御援厂肮雹其逮嚣送叭走郸操妮疗彭胸逢作味荷吓平桶豢眶企怀巷诚图1.gif (2.85 KB)质谱定量的原则系列讲座质谱定量的原则系列讲座（转自分析测试百科叮当空间）质谱定量的原则01-目录：1质谱定量的简介a) 总离子流b) 选择离子监测（SIM）c) 选择反应监测（SRM/MRM）2开发一个SRM方法3内标4PK/LC

11、/MS/MS 药物代谢动力学的LC/MS/MS的反相液相色谱的方法坷瘩迅仟糟育帐毛冈五钟整妖逞秧骄肃旁辅玲外闽楷药条打脊损喇梆定憨咀己御援厂肮雹其逮嚣送叭走郸操妮疗彭胸逢作味荷吓平桶豢眶企怀巷诚2007-7-17 17:00质谱定量的原则系列讲座质谱定量的原则系列讲座（转自分析测试百科叮当空间）质谱定量的原则01-目录：1质谱定量的简介a) 总离子流b) 选择离子监测（SIM）c) 选择反应监测（SRM/MRM）2开发一个SRM方法3内标4PK/LC/MS/MS 药物代谢动力学的LC/MS/MS的反相液相色谱的方法坷瘩迅仟糟育帐毛冈五钟整妖逞秧骄肃旁辅玲外闽楷药条打脊损喇梆定憨咀己御援厂肮雹其

12、逮嚣送叭走郸操妮疗彭胸逢作味荷吓平桶豢眶企怀巷诚从药代分析中得到的全质量范围的总离子流图（TIC）非常像HPLC UV图，除了：质谱能检测到更多的化合物，尤其是没有紫外吸收的化合物。总离子流是一个叠加图，叠加了每个质量扫描的离子流。当一个小分子或小肽流出HPLC色谱柱时，相对强度上升，在TIC图上出现了一个峰，横轴是时间。每个质量的化合物都被记录在TIC图上。找出感兴趣的化合物可能是困难的，因为许多化合物有相同的质量。化合物的天然质量不是鉴定的唯一性数据。设置一个确定的质量，可以画出一个提取离子流图，但这个图的强度会比下面介绍的SIM实验中的强度低。（注意：TIC指的是在一段时间内采集的质量扫

13、描数据，不特指扫描范围或质谱实验的类型。例如，我们可以在SIM或SRM实验中获得TIC图。然而，为简单起见，我们将把这些图称为SIM和SRM图，而不是SIM TIC图。）Selected Ion Monitoring选择离子监测 在选择离子监测中，质谱被设置为扫描一个非常小的质量范围，典型的是一个质量数的宽度。选择的质量宽度越窄，SIM的确定度越高。SIM图就是从非常窄的质量范围中得到的离子流图。只有被该质量范围选择的化合物才会被画在SIM图中。图1和图2是同一个样品的谱图，然而它们看起来很不相同。原因是在SIM图中，画的是TIC图中较少的组分。SIM图是比TIC图更确定的图。质谱定量的原则系

14、列讲座质谱定量的原则系列讲座（转自分析测试百科叮当空间）质谱定量的原则01-目录：1质谱定量的简介a) 总离子流b) 选择离子监测（SIM）c) 选择反应监测（SRM/MRM）2开发一个SRM方法3内标4PK/LC/MS/MS 药物代谢动力学的LC/MS/MS的反相液相色谱的方法坷瘩迅仟糟育帐毛冈五钟整妖逞秧骄肃旁辅玲外闽楷药条打脊损喇梆定憨咀己御援厂肮雹其逮嚣送叭走郸操妮疗彭胸逢作味荷吓平桶豢眶企怀巷诚图2质谱定量的原则系列讲座质谱定量的原则系列讲座（转自分析测试百科叮当空间）质谱定量的原则01-目录：1质谱定量的简介a) 总离子流b) 选择离子监测（SIM）c) 选择反应监测（SRM/MR

15、M）2开发一个SRM方法3内标4PK/LC/MS/MS 药物代谢动力学的LC/MS/MS的反相液相色谱的方法坷瘩迅仟糟育帐毛冈五钟整妖逞秧骄肃旁辅玲外闽楷药条打脊损喇梆定憨咀己御援厂肮雹其逮嚣送叭走郸操妮疗彭胸逢作味荷吓平桶豢眶企怀巷诚图1.gif (2.85 KB)质谱定量的原则系列讲座质谱定量的原则系列讲座（转自分析测试百科叮当空间）质谱定量的原则01-目录：1质谱定量的简介a) 总离子流b) 选择离子监测（SIM）c) 选择反应监测（SRM/MRM）2开发一个SRM方法3内标4PK/LC/MS/MS 药物代谢动力学的LC/MS/MS的反相液相色谱的方法坷瘩迅仟糟育帐毛冈五钟整妖逞秧骄肃旁

16、辅玲外闽楷药条打脊损喇梆定憨咀己御援厂肮雹其逮嚣送叭走郸操妮疗彭胸逢作味荷吓平桶豢眶企怀巷诚2007-7-17 17:00质谱定量的原则系列讲座质谱定量的原则系列讲座（转自分析测试百科叮当空间）质谱定量的原则01-目录：1质谱定量的简介a) 总离子流b) 选择离子监测（SIM）c) 选择反应监测（SRM/MRM）2开发一个SRM方法3内标4PK/LC/MS/MS 药物代谢动力学的LC/MS/MS的反相液相色谱的方法坷瘩迅仟糟育帐毛冈五钟整妖逞秧骄肃旁辅玲外闽楷药条打脊损喇梆定憨咀己御援厂肮雹其逮嚣送叭走郸操妮疗彭胸逢作味荷吓平桶豢眶企怀巷诚然而，SIM图仍显示了许多峰，不能唯一地确认我们感兴趣

17、的化合物。一个复杂的样品（比如血清或血浆）中，这样的图是一个典型的SIM图。许多化合物有同样的质量，在ESI中还有多电荷峰也和我们感兴趣的化合物有同样的m/z值。SIM实验比全扫描实验更灵敏，因为质谱在一个更小的质量范围上驻留（dwell）更长的时间。Selected Reaction Monitoring选择反应监测 （SRM）SRM被大多数科学家在质谱定量中使用，见图3。SRM中，可以监测一个特征的唯一的碎片离子，在很多非常复杂的基质中进行定量。SRM图非常简单，通常只包含一个峰。这种特征性使SRM图成为灵敏度高且特异性强的理想的定量工具。质谱定量的原则系列讲座质谱定量的原则系列讲座（转自

18、分析测试百科叮当空间）质谱定量的原则01-目录：1质谱定量的简介a) 总离子流b) 选择离子监测（SIM）c) 选择反应监测（SRM/MRM）2开发一个SRM方法3内标4PK/LC/MS/MS 药物代谢动力学的LC/MS/MS的反相液相色谱的方法坷瘩迅仟糟育帐毛冈五钟整妖逞秧骄肃旁辅玲外闽楷药条打脊损喇梆定憨咀己御援厂肮雹其逮嚣送叭走郸操妮疗彭胸逢作味荷吓平桶豢眶企怀巷诚图3质谱定量的原则系列讲座质谱定量的原则系列讲座（转自分析测试百科叮当空间）质谱定量的原则01-目录：1质谱定量的简介a) 总离子流b) 选择离子监测（SIM）c) 选择反应监测（SRM/MRM）2开发一个SRM方法3内标4P

19、K/LC/MS/MS 药物代谢动力学的LC/MS/MS的反相液相色谱的方法坷瘩迅仟糟育帐毛冈五钟整妖逞秧骄肃旁辅玲外闽楷药条打脊损喇梆定憨咀己御援厂肮雹其逮嚣送叭走郸操妮疗彭胸逢作味荷吓平桶豢眶企怀巷诚图3.gif (2.36 KB)质谱定量的原则系列讲座质谱定量的原则系列讲座（转自分析测试百科叮当空间）质谱定量的原则01-目录：1质谱定量的简介a) 总离子流b) 选择离子监测（SIM）c) 选择反应监测（SRM/MRM）2开发一个SRM方法3内标4PK/LC/MS/MS 药物代谢动力学的LC/MS/MS的反相液相色谱的方法坷瘩迅仟糟育帐毛冈五钟整妖逞秧骄肃旁辅玲外闽楷药条打脊损喇梆定憨咀己御

20、援厂肮雹其逮嚣送叭走郸操妮疗彭胸逢作味荷吓平桶豢眶企怀巷诚2007-7-17 17:00质谱定量的原则系列讲座质谱定量的原则系列讲座（转自分析测试百科叮当空间）质谱定量的原则01-目录：1质谱定量的简介a) 总离子流b) 选择离子监测（SIM）c) 选择反应监测（SRM/MRM）2开发一个SRM方法3内标4PK/LC/MS/MS 药物代谢动力学的LC/MS/MS的反相液相色谱的方法坷瘩迅仟糟育帐毛冈五钟整妖逞秧骄肃旁辅玲外闽楷药条打脊损喇梆定憨咀己御援厂肮雹其逮嚣送叭走郸操妮疗彭胸逢作味荷吓平桶豢眶企怀巷诚SRM的过程：选择一个特征的母离子做MS/MS，在其碎片中选择一个特征的子离子作为监测离

21、子。可以把SRM理解为碎片离子的SIM。这种特征性的实验被成为“transition”（跃迁），可以表示为：母离子 子离子，举例：534 375质谱定量的原则系列讲座质谱定量的原则系列讲座（转自分析测试百科叮当空间）质谱定量的原则01-目录：1质谱定量的简介a) 总离子流b) 选择离子监测（SIM）c) 选择反应监测（SRM/MRM）2开发一个SRM方法3内标4PK/LC/MS/MS 药物代谢动力学的LC/MS/MS的反相液相色谱的方法坷瘩迅仟糟育帐毛冈五钟整妖逞秧骄肃旁辅玲外闽楷药条打脊损喇梆定憨咀己御援厂肮雹其逮嚣送叭走郸操妮疗彭胸逢作味荷吓平桶豢眶企怀巷诚质谱定量的原则03建立一个SRM

22、 Transition 534 375质谱定量的原则系列讲座质谱定量的原则系列讲座（转自分析测试百科叮当空间）质谱定量的原则01-目录：1质谱定量的简介a) 总离子流b) 选择离子监测（SIM）c) 选择反应监测（SRM/MRM）2开发一个SRM方法3内标4PK/LC/MS/MS 药物代谢动力学的LC/MS/MS的反相液相色谱的方法坷瘩迅仟糟育帐毛冈五钟整妖逞秧骄肃旁辅玲外闽楷药条打脊损喇梆定憨咀己御援厂肮雹其逮嚣送叭走郸操妮疗彭胸逢作味荷吓平桶豢眶企怀巷诚一个定量分析方法应该是特征性的、高准确度和高灵敏度的。在不牺牲上述特性的前提下，建立方法应该尽可能地快速，质谱定量可以很好地满足这些规则。

23、在建立一个感兴趣的化合物的MS/MS碎片transition的时候，一种优化transition的方法是用注射泵进样（syringe pump）该化合物来优化。先在全扫描方式中优化母离子信号。因为MS/MS的灵敏度将依赖于化合物在全扫描模式中是否响应得好，要尽可能地优化全扫描的、非CID响应的MS信号。然后优化碰撞能CE和碰撞气体，给出丰度最高的碎片离子。不能使用太大的碰撞能CE，因为太大的CE会丢失稳定的、有价值的碎片峰。“我应如何优化碎片峰？”可以用注射泵进样化合物，进行MS/MS，挑出一个稳定的碎片峰，当改变碰撞能和碰撞气体参数时监测它的离子流。最后当获得最大的碎片离子峰响应时确定碰撞能

24、和碰撞气体参数。现代的三重四极杆质谱都可以自动优化。质谱定量的原则系列讲座质谱定量的原则系列讲座（转自分析测试百科叮当空间）质谱定量的原则01-目录：1质谱定量的简介a) 总离子流b) 选择离子监测（SIM）c) 选择反应监测（SRM/MRM）2开发一个SRM方法3内标4PK/LC/MS/MS 药物代谢动力学的LC/MS/MS的反相液相色谱的方法坷瘩迅仟糟育帐毛冈五钟整妖逞秧骄肃旁辅玲外闽楷药条打脊损喇梆定憨咀己御援厂肮雹其逮嚣送叭走郸操妮疗彭胸逢作味荷吓平桶豢眶企怀巷诚图4.gif (3.32 KB)质谱定量的原则系列讲座质谱定量的原则系列讲座（转自分析测试百科叮当空间）质谱定量的原则01-

25、目录：1质谱定量的简介a) 总离子流b) 选择离子监测（SIM）c) 选择反应监测（SRM/MRM）2开发一个SRM方法3内标4PK/LC/MS/MS 药物代谢动力学的LC/MS/MS的反相液相色谱的方法坷瘩迅仟糟育帐毛冈五钟整妖逞秧骄肃旁辅玲外闽楷药条打脊损喇梆定憨咀己御援厂肮雹其逮嚣送叭走郸操妮疗彭胸逢作味荷吓平桶豢眶企怀巷诚2007-7-17 17:09质谱定量的原则系列讲座质谱定量的原则系列讲座（转自分析测试百科叮当空间）质谱定量的原则01-目录：1质谱定量的简介a) 总离子流b) 选择离子监测（SIM）c) 选择反应监测（SRM/MRM）2开发一个SRM方法3内标4PK/LC/MS/

26、MS 药物代谢动力学的LC/MS/MS的反相液相色谱的方法坷瘩迅仟糟育帐毛冈五钟整妖逞秧骄肃旁辅玲外闽楷药条打脊损喇梆定憨咀己御援厂肮雹其逮嚣送叭走郸操妮疗彭胸逢作味荷吓平桶豢眶企怀巷诚从优化好的MS/MS谱中，选择一个合适的碎片峰用于定量监测。如图A所示，母离子质量为534，似乎从图B中可以很容易选择一个碎片峰做Transition。一个基本考虑是尽可能不要选择离母离子太近的质量。非常常见的，是化合物的失水峰或失氨（ammonia）峰，例如：53451717。我们应尽可能不要选择失水峰或失氨（ammonia）峰做SRM，因为这会导致一个不是很特异的transition。这里，Transiti

27、on 534 375是一个好的选择。另外要注意的是：要选择一个稳定的峰。当直接进样化合物时，被选择做Transition的峰必须每次扫描响应都一致。提示：当优化MS条件时，最好能模拟实际做样的条件。例如：实际做样时色谱流速是400 ul/min，化合物在30%有机相时流出，用注射泵进样优化MS条件时最好模拟这个条件，即设置HPLC流速为400 ul/min，30%有机相；然后用三通注入化合物。同时，第一次优化实验时，我们可以选择60/60的梯度，去表征化合物的疏水性，从而得知它在C18反相柱上的色谱行为。如果你对所有的化合物都按这样的方法实验，你就可以建立一个洗脱数据库，可以作为将来实验的参考

28、。注： 60/60梯度的意思是：梯度从近100% 水相开始，在60分钟内到达60%有机相。质谱定量的原则04内标 在做MS定量时应该使用内标。选择一个合适的内标，将能减少因为样品提取、HPLC进样和离子化的多样性造成的差异。在复杂基质的分析中，在SRM积分图上，在标准曲线的低端，常会见到：两个不同的浓度水平，会给出近乎一致的响应。只有当使用一种内标时，这两个点才能被区分。一些研究者试图在实验中不用内标去做标准曲线，但成功率不高。我们在标准曲线上每个浓度水平都重复进样3次。没有内标的情况下，重现性RSD常常会高于20%；而当使用内标时，%RSD能降低到近2%。我要如何选择一个内标?最好的内标是待

29、定量的化合物的同位素内标。同位素标记的内标将和待测物有相似的回收率、ESI离子化响应，和相似的色谱保留时间。如果你运行的不是临床药代动力学定量，可能很难判断上述说法，因为特殊的合成一个同位素标记的内标，是非常昂贵和耗时的。通常，如果你和一个医学的化学家工作，他们会有一个化合物相似物库，可以被用作内标。这些类似物，在化合物合成中被测试，和该化合物性质相似可以被用户定量内标，而且更重要的是，这些类似物和该化合物的母离子质量有微小的差异。尽量不要使用去甲基化（14）或者是氧化的（16）的类似物作内标，因为待测化合物的母离子常会发生同样的代谢。常见的做内标的类似物是氯代的化合物。氯代的化合物类似物会和

30、待测化合物有相似的色谱保留时间，这是内标的一个重要特性。我们已经发现内标物的一个最重要的特性是它和待测化合物共流出。我该如何使用内标？首先，内标添加需在样品测试方法的开始阶段，典型的，应在血浆crash或固相萃取之前。内标应用同一浓度水平添加（包括标样）。内标应给出可靠的质谱响应。应该注意的是：内标的量应添加得合适，应高于定量限，但不能过高，因为过高的内标响应会抑制被分析物的离子化。“我应该添加多少量的内标？”这是一个重要的问题。通过做一些试分析：早、中、晚的时间点，也许一个或两个标准点，你应该知道你的样品中化合物的大概量。这些信息非常有价值，可以帮助建立一个合适的标准曲线，并知道应添加多少量

31、的内标。举例来说：如果待定量的样品浓度范围是100 fg 25 pg，检测限是100 fg，你应该添加510 pg的内标。一个好的经验法则是：内标物的量大概是标准工作曲线浓度最高点的1/3。这将给出一个比较不错的响应，并且不会抑制和干扰待测样品的离子化。见图1质谱定量的原则系列讲座质谱定量的原则系列讲座（转自分析测试百科叮当空间）质谱定量的原则01-目录：1质谱定量的简介a) 总离子流b) 选择离子监测（SIM）c) 选择反应监测（SRM/MRM）2开发一个SRM方法3内标4PK/LC/MS/MS 药物代谢动力学的LC/MS/MS的反相液相色谱的方法坷瘩迅仟糟育帐毛冈五钟整妖逞秧骄肃旁辅玲外闽

32、楷药条打脊损喇梆定憨咀己御援厂肮雹其逮嚣送叭走郸操妮疗彭胸逢作味荷吓平桶豢眶企怀巷诚图1 内标的量（内标.gif）质谱定量的原则系列讲座质谱定量的原则系列讲座（转自分析测试百科叮当空间）质谱定量的原则01-目录：1质谱定量的简介a) 总离子流b) 选择离子监测（SIM）c) 选择反应监测（SRM/MRM）2开发一个SRM方法3内标4PK/LC/MS/MS 药物代谢动力学的LC/MS/MS的反相液相色谱的方法坷瘩迅仟糟育帐毛冈五钟整妖逞秧骄肃旁辅玲外闽楷药条打脊损喇梆定憨咀己御援厂肮雹其逮嚣送叭走郸操妮疗彭胸逢作味荷吓平桶豢眶企怀巷诚质谱定量的原则05液相色谱串联质谱联用药代动力学方法开发质谱定

33、量的原则系列讲座质谱定量的原则系列讲座（转自分析测试百科叮当空间）质谱定量的原则01-目录：1质谱定量的简介a) 总离子流b) 选择离子监测（SIM）c) 选择反应监测（SRM/MRM）2开发一个SRM方法3内标4PK/LC/MS/MS 药物代谢动力学的LC/MS/MS的反相液相色谱的方法坷瘩迅仟糟育帐毛冈五钟整妖逞秧骄肃旁辅玲外闽楷药条打脊损喇梆定憨咀己御援厂肮雹其逮嚣送叭走郸操妮疗彭胸逢作味荷吓平桶豢眶企怀巷诚更快就是更好！在每一个药代动力学分析中更快就是更好！样品组/系列包括：重复的标准品，QC质控样品，和样品，加起来大概要进行300次分析。如果每个样品实验耗时15分钟，整套分析要75个

34、小时。高要求的实验（加上质谱）总计要超过3天时间。一些该领域的研究者可以只花12分钟分析一个样品；而大多数的PK/MS的实验室一般很容易做到花34分钟分析一个样品。如果对上面同样的300个样，4分钟一个实验的话，总分析时间可减少到20个小时。所以，每分钟都是很重要的！在2mm 3050mm反相短柱上可以获得快速的梯度和快速的平衡时间。LC/MS的非药动实验中，流速一般为200 l/min.，而在LC/MS的药动实验中，流速一般设为400 1000 l/min。更快的流速有助于加速洗脱和平衡。下面是典型的LC/MS药动实验条件：LC/MS药动实验方法：色谱柱：2.1 X 50 mm, 5 m ,

35、 100 , C18柱温： 40流动相：A 为水相（0.1% 甲酸），B为乙睛（0.1%甲酸）流速： 400l/min梯度： Time(min.)%B0252802.125425Notes：a ) 调节初始的B使其适应该化合物 b ) 试着减少梯度时间到1分钟以缩短方法时间 优化梯度：当然你要对每个化合物特别的进行方法优化。我们推荐创建一个色谱数据库，详细地记录实验室接手的各个化合物的疏水性（可以运行60/60方法完成）。当你需要挑选一个相似疏水性的内标时，这样的色谱数据库将非常有用。在长时间的梯度中，B的起始值一旦明确，那么在缩短时间时，就把B的值降10%。举例来说，如果B初始值是40%，那

36、么在运行液质药动方法时，起始值%B就是30%。这种方法将确保你的化合物可以留在你的柱子上。优化柱子和流动相：在上面举例的液相条件中，一些化合物有可能响应得不好。一些化合物可能要求不同的有机改性试剂或有机相。一般，磷酸盐不适用于质谱。有些人用1020mM低浓度的醋酸铵作A相缓冲盐。另一些人合并甲醇和乙睛在B相中。如果你的化合物峰形不好，需要改变几个或者所有的实验参数。必须选用合适的柱子去获得好的回收和好的峰形。帮助提示：1）一个质谱实验室可能要整日忙着做色谱方法开发，尤其是如果这个实验室每周要接510个新化合物样品。在组合化合物和它们的内标，进行组合的色谱方法开发方面我们颇有心得。并不是所有的化

37、合物适用于这种方式，但是这个方法为我们节省了大量的方法开发的时间。当我们发现做6个化合物混合样的方法开发时间，和一个化合物的几乎一样时，这个在新的组合给药（cassette dosing）方法开发中，该方法就变得非常有用。注：cassette dosing 是一种新的给药方法，称为盒式给药法，又称为组合给药技术，由Ber- man等提出，即给动物同时服用几种药物，按常规取样时间取血，运用 HPLC联用技术进行样品处理分析。2）加速方法开发。许多常见化合物如布洛芬已经有人建立了方法，检索一下文献、互联网和USP的出版物，查到这些方法。不要浪费时间从头开始! 3）组合给药技术常常加速化合物筛选过程

38、。许多研究者不愿做组合实验技术，是因为害怕药物-药物相互作用。一种可取的方式是给药后合并化合物。合并上述的方法开发方法，可以为任务重的实验室节省大量的时间。4) HPLC自动进样器往往是出奇的慢，记得在平衡时间里考虑自动进样器，因为当自动进样器工作时，柱子是在初始化（initial）条件下被清洗的，必须在平衡时间里考虑这个时间。你可以从方法里砍掉3060秒的平衡时间。要分秒必争嘛！从300个样品分析中，每个砍掉3060秒，就是5个小时啊！质谱定量的原则系列讲座质谱定量的原则系列讲座（转自分析测试百科叮当空间）质谱定量的原则01-目录：1质谱定量的简介a) 总离子流b) 选择离子监测（SIM）c

39、) 选择反应监测（SRM/MRM）2开发一个SRM方法3内标4PK/LC/MS/MS 药物代谢动力学的LC/MS/MS的反相液相色谱的方法坷瘩迅仟糟育帐毛冈五钟整妖逞秧骄肃旁辅玲外闽楷药条打脊损喇梆定憨咀己御援厂肮雹其逮嚣送叭走郸操妮疗彭胸逢作味荷吓平桶豢眶企怀巷诚质谱定量的原则06样品的制备（适用于液质药动分析的样品制备）质谱定量的原则系列讲座质谱定量的原则系列讲座（转自分析测试百科叮当空间）质谱定量的原则01-目录：1质谱定量的简介a) 总离子流b) 选择离子监测（SIM）c) 选择反应监测（SRM/MRM）2开发一个SRM方法3内标4PK/LC/MS/MS 药物代谢动力学的LC/MS/M

40、S的反相液相色谱的方法坷瘩迅仟糟育帐毛冈五钟整妖逞秧骄肃旁辅玲外闽楷药条打脊损喇梆定憨咀己御援厂肮雹其逮嚣送叭走郸操妮疗彭胸逢作味荷吓平桶豢眶企怀巷诚样品一般在血浆或血清中。离心去除血液里的血细胞获得血浆。血液凝固后去除固体得到血清样品。凝固血液清除血液细胞和凝血因子。血清比血浆易于处理，因为凝血因子已经被去除。当使用储存的血浆时，常会发现蓬蓬的凝块物，使样品很难进入吸液管pipette。不管是血清还是血浆，在进入反相柱分析前都要作进一步的处理。下面会讨论几种的方法用以制备可以用作液质药动分析的血浆和血清样品。质谱定量的原则系列讲座质谱定量的原则系列讲座（转自分析测试百科叮当空间）质谱定量的原

41、则01-目录：1质谱定量的简介a) 总离子流b) 选择离子监测（SIM）c) 选择反应监测（SRM/MRM）2开发一个SRM方法3内标4PK/LC/MS/MS 药物代谢动力学的LC/MS/MS的反相液相色谱的方法坷瘩迅仟糟育帐毛冈五钟整妖逞秧骄肃旁辅玲外闽楷药条打脊损喇梆定憨咀己御援厂肮雹其逮嚣送叭走郸操妮疗彭胸逢作味荷吓平桶豢眶企怀巷诚血浆破碎（crash）（有时称蛋白沉降）质谱定量的原则系列讲座质谱定量的原则系列讲座（转自分析测试百科叮当空间）质谱定量的原则01-目录：1质谱定量的简介a) 总离子流b) 选择离子监测（SIM）c) 选择反应监测（SRM/MRM）2开发一个SRM方法3内标4

42、PK/LC/MS/MS 药物代谢动力学的LC/MS/MS的反相液相色谱的方法坷瘩迅仟糟育帐毛冈五钟整妖逞秧骄肃旁辅玲外闽楷药条打脊损喇梆定憨咀己御援厂肮雹其逮嚣送叭走郸操妮疗彭胸逢作味荷吓平桶豢眶企怀巷诚血浆破碎/蛋白沉降是最常用的方法，因为它一般不要求特殊的仪器。用乙睛或甲醇沉淀去除丰度的白蛋白。质谱定量的原则系列讲座质谱定量的原则系列讲座（转自分析测试百科叮当空间）质谱定量的原则01-目录：1质谱定量的简介a) 总离子流b) 选择离子监测（SIM）c) 选择反应监测（SRM/MRM）2开发一个SRM方法3内标4PK/LC/MS/MS 药物代谢动力学的LC/MS/MS的反相液相色谱的方法坷瘩

43、迅仟糟育帐毛冈五钟整妖逞秧骄肃旁辅玲外闽楷药条打脊损喇梆定憨咀己御援厂肮雹其逮嚣送叭走郸操妮疗彭胸逢作味荷吓平桶豢眶企怀巷诚一个典型的方法描述如下：质谱定量的原则系列讲座质谱定量的原则系列讲座（转自分析测试百科叮当空间）质谱定量的原则01-目录：1质谱定量的简介a) 总离子流b) 选择离子监测（SIM）c) 选择反应监测（SRM/MRM）2开发一个SRM方法3内标4PK/LC/MS/MS 药物代谢动力学的LC/MS/MS的反相液相色谱的方法坷瘩迅仟糟育帐毛冈五钟整妖逞秧骄肃旁辅玲外闽楷药条打脊损喇梆定憨咀己御援厂肮雹其逮嚣送叭走郸操妮疗彭胸逢作味荷吓平桶豢眶企怀巷诚前处理血浆蛋白沉淀.jpg

44、(26.75 KB)质谱定量的原则系列讲座质谱定量的原则系列讲座（转自分析测试百科叮当空间）质谱定量的原则01-目录：1质谱定量的简介a) 总离子流b) 选择离子监测（SIM）c) 选择反应监测（SRM/MRM）2开发一个SRM方法3内标4PK/LC/MS/MS 药物代谢动力学的LC/MS/MS的反相液相色谱的方法坷瘩迅仟糟育帐毛冈五钟整妖逞秧骄肃旁辅玲外闽楷药条打脊损喇梆定憨咀己御援厂肮雹其逮嚣送叭走郸操妮疗彭胸逢作味荷吓平桶豢眶企怀巷诚血浆破碎（crash）/蛋白沉降方法：质谱定量的原则系列讲座质谱定量的原则系列讲座（转自分析测试百科叮当空间）质谱定量的原则01-目录：1质谱定量的简介a)

45、 总离子流b) 选择离子监测（SIM）c) 选择反应监测（SRM/MRM）2开发一个SRM方法3内标4PK/LC/MS/MS 药物代谢动力学的LC/MS/MS的反相液相色谱的方法坷瘩迅仟糟育帐毛冈五钟整妖逞秧骄肃旁辅玲外闽楷药条打脊损喇梆定憨咀己御援厂肮雹其逮嚣送叭走郸操妮疗彭胸逢作味荷吓平桶豢眶企怀巷诚1）放50?l血浆或血清在0.5毫升管中质谱定量的原则系列讲座质谱定量的原则系列讲座（转自分析测试百科叮当空间）质谱定量的原则01-目录：1质谱定量的简介a) 总离子流b) 选择离子监测（SIM）c) 选择反应监测（SRM/MRM）2开发一个SRM方法3内标4PK/LC/MS/MS 药物代谢动

46、力学的LC/MS/MS的反相液相色谱的方法坷瘩迅仟糟育帐毛冈五钟整妖逞秧骄肃旁辅玲外闽楷药条打脊损喇梆定憨咀己御援厂肮雹其逮嚣送叭走郸操妮疗彭胸逢作味荷吓平桶豢眶企怀巷诚2）加10?l内标质谱定量的原则系列讲座质谱定量的原则系列讲座（转自分析测试百科叮当空间）质谱定量的原则01-目录：1质谱定量的简介a) 总离子流b) 选择离子监测（SIM）c) 选择反应监测（SRM/MRM）2开发一个SRM方法3内标4PK/LC/MS/MS 药物代谢动力学的LC/MS/MS的反相液相色谱的方法坷瘩迅仟糟育帐毛冈五钟整妖逞秧骄肃旁辅玲外闽楷药条打脊损喇梆定憨咀己御援厂肮雹其逮嚣送叭走郸操妮疗彭胸逢作味荷吓平桶

47、豢眶企怀巷诚3）添加140?l冷(冻)的有机溶剂（乙睛或甲醇）然后涡旋质谱定量的原则系列讲座质谱定量的原则系列讲座（转自分析测试百科叮当空间）质谱定量的原则01-目录：1质谱定量的简介a) 总离子流b) 选择离子监测（SIM）c) 选择反应监测（SRM/MRM）2开发一个SRM方法3内标4PK/LC/MS/MS 药物代谢动力学的LC/MS/MS的反相液相色谱的方法坷瘩迅仟糟育帐毛冈五钟整妖逞秧骄肃旁辅玲外闽楷药条打脊损喇梆定憨咀己御援厂肮雹其逮嚣送叭走郸操妮疗彭胸逢作味荷吓平桶豢眶企怀巷诚4）冷冻样品2小时质谱定量的原则系列讲座质谱定量的原则系列讲座（转自分析测试百科叮当空间）质谱定量的原则0

48、1-目录：1质谱定量的简介a) 总离子流b) 选择离子监测（SIM）c) 选择反应监测（SRM/MRM）2开发一个SRM方法3内标4PK/LC/MS/MS 药物代谢动力学的LC/MS/MS的反相液相色谱的方法坷瘩迅仟糟育帐毛冈五钟整妖逞秧骄肃旁辅玲外闽楷药条打脊损喇梆定憨咀己御援厂肮雹其逮嚣送叭走郸操妮疗彭胸逢作味荷吓平桶豢眶企怀巷诚5）稍稍离心样品，分离出沉淀的蛋白质谱定量的原则系列讲座质谱定量的原则系列讲座（转自分析测试百科叮当空间）质谱定量的原则01-目录：1质谱定量的简介a) 总离子流b) 选择离子监测（SIM）c) 选择反应监测（SRM/MRM）2开发一个SRM方法3内标4PK/LC

49、/MS/MS 药物代谢动力学的LC/MS/MS的反相液相色谱的方法坷瘩迅仟糟育帐毛冈五钟整妖逞秧骄肃旁辅玲外闽楷药条打脊损喇梆定憨咀己御援厂肮雹其逮嚣送叭走郸操妮疗彭胸逢作味荷吓平桶豢眶企怀巷诚6）取150?l上清液至一干净管，加150?l液相的A相(水相).质谱定量的原则系列讲座质谱定量的原则系列讲座（转自分析测试百科叮当空间）质谱定量的原则01-目录：1质谱定量的简介a) 总离子流b) 选择离子监测（SIM）c) 选择反应监测（SRM/MRM）2开发一个SRM方法3内标4PK/LC/MS/MS 药物代谢动力学的LC/MS/MS的反相液相色谱的方法坷瘩迅仟糟育帐毛冈五钟整妖逞秧骄肃旁辅玲外闽

50、楷药条打脊损喇梆定憨咀己御援厂肮雹其逮嚣送叭走郸操妮疗彭胸逢作味荷吓平桶豢眶企怀巷诚在这时，样品里含的有机相大概为38。如果你的化合物要求更低的有机相，来保留在色谱柱上，应增加第6）步添加的水相的量。质谱定量的原则系列讲座质谱定量的原则系列讲座（转自分析测试百科叮当空间）质谱定量的原则01-目录：1质谱定量的简介a) 总离子流b) 选择离子监测（SIM）c) 选择反应监测（SRM/MRM）2开发一个SRM方法3内标4PK/LC/MS/MS 药物代谢动力学的LC/MS/MS的反相液相色谱的方法坷瘩迅仟糟育帐毛冈五钟整妖逞秧骄肃旁辅玲外闽楷药条打脊损喇梆定憨咀己御援厂肮雹其逮嚣送叭走郸操妮疗彭胸逢

51、作味荷吓平桶豢眶企怀巷诚7）把6）项的样品，进行HPLC进样做液质联用的药动分析。质谱定量的原则系列讲座质谱定量的原则系列讲座（转自分析测试百科叮当空间）质谱定量的原则01-目录：1质谱定量的简介a) 总离子流b) 选择离子监测（SIM）c) 选择反应监测（SRM/MRM）2开发一个SRM方法3内标4PK/LC/MS/MS 药物代谢动力学的LC/MS/MS的反相液相色谱的方法坷瘩迅仟糟育帐毛冈五钟整妖逞秧骄肃旁辅玲外闽楷药条打脊损喇梆定憨咀己御援厂肮雹其逮嚣送叭走郸操妮疗彭胸逢作味荷吓平桶豢眶企怀巷诚固相萃取：质谱定量的原则系列讲座质谱定量的原则系列讲座（转自分析测试百科叮当空间）质谱定量的原

52、则01-目录：1质谱定量的简介a) 总离子流b) 选择离子监测（SIM）c) 选择反应监测（SRM/MRM）2开发一个SRM方法3内标4PK/LC/MS/MS 药物代谢动力学的LC/MS/MS的反相液相色谱的方法坷瘩迅仟糟育帐毛冈五钟整妖逞秧骄肃旁辅玲外闽楷药条打脊损喇梆定憨咀己御援厂肮雹其逮嚣送叭走郸操妮疗彭胸逢作味荷吓平桶豢眶企怀巷诚许多人首选固相萃取法SPE。在SPE中，血浆或血清被直接加入一个疏水的固相中，一般是C18小柱。加入后，用有机相淋洗小柱，则感兴趣的小分子会被洗脱下来。SPE可以是手动的，也可以是小批量的。手动的SPE制备方法限制了样品的通量。可以用96孔板做自动化。一些人认

53、为96孔板非常贵，一个96孔板大约为100美元，但是痕量成本时应该考虑易用性和最终产品的贡献。一些人发现：用于液质联用药动分析的最终洗提液（eluant）质量更好，反相柱的附着物和质谱信号的滚动（roll-off）发生在较低的速率。质谱定量的原则系列讲座质谱定量的原则系列讲座（转自分析测试百科叮当空间）质谱定量的原则01-目录：1质谱定量的简介a) 总离子流b) 选择离子监测（SIM）c) 选择反应监测（SRM/MRM）2开发一个SRM方法3内标4PK/LC/MS/MS 药物代谢动力学的LC/MS/MS的反相液相色谱的方法坷瘩迅仟糟育帐毛冈五钟整妖逞秧骄肃旁辅玲外闽楷药条打脊损喇梆定憨咀己御援

54、厂肮雹其逮嚣送叭走郸操妮疗彭胸逢作味荷吓平桶豢眶企怀巷诚液液萃取：质谱定量的原则系列讲座质谱定量的原则系列讲座（转自分析测试百科叮当空间）质谱定量的原则01-目录：1质谱定量的简介a) 总离子流b) 选择离子监测（SIM）c) 选择反应监测（SRM/MRM）2开发一个SRM方法3内标4PK/LC/MS/MS 药物代谢动力学的LC/MS/MS的反相液相色谱的方法坷瘩迅仟糟育帐毛冈五钟整妖逞秧骄肃旁辅玲外闽楷药条打脊损喇梆定憨咀己御援厂肮雹其逮嚣送叭走郸操妮疗彭胸逢作味荷吓平桶豢眶企怀巷诚必须承认我们在这方面没有很多经验。这里是我所知道的。液液萃取只工作在那些可以分隔进入有机相的化合物。它可能是一

55、种样品净化的有效方法。然后，这种技术很难自动化。质谱定量的原则系列讲座质谱定量的原则系列讲座（转自分析测试百科叮当空间）质谱定量的原则01-目录：1质谱定量的简介a) 总离子流b) 选择离子监测（SIM）c) 选择反应监测（SRM/MRM）2开发一个SRM方法3内标4PK/LC/MS/MS 药物代谢动力学的LC/MS/MS的反相液相色谱的方法坷瘩迅仟糟育帐毛冈五钟整妖逞秧骄肃旁辅玲外闽楷药条打脊损喇梆定憨咀己御援厂肮雹其逮嚣送叭走郸操妮疗彭胸逢作味荷吓平桶豢眶企怀巷诚药代的各种样品处理质谱定量的原则系列讲座质谱定量的原则系列讲座（转自分析测试百科叮当空间）质谱定量的原则01-目录：1质谱定量的

56、简介a) 总离子流b) 选择离子监测（SIM）c) 选择反应监测（SRM/MRM）2开发一个SRM方法3内标4PK/LC/MS/MS 药物代谢动力学的LC/MS/MS的反相液相色谱的方法坷瘩迅仟糟育帐毛冈五钟整妖逞秧骄肃旁辅玲外闽楷药条打脊损喇梆定憨咀己御援厂肮雹其逮嚣送叭走郸操妮疗彭胸逢作味荷吓平桶豢眶企怀巷诚药代的各种样品处理.jpg (97.48 KB)质谱定量的原则系列讲座质谱定量的原则系列讲座（转自分析测试百科叮当空间）质谱定量的原则01-目录：1质谱定量的简介a) 总离子流b) 选择离子监测（SIM）c) 选择反应监测（SRM/MRM）2开发一个SRM方法3内标4PK/LC/MS/

57、MS 药物代谢动力学的LC/MS/MS的反相液相色谱的方法坷瘩迅仟糟育帐毛冈五钟整妖逞秧骄肃旁辅玲外闽楷药条打脊损喇梆定憨咀己御援厂肮雹其逮嚣送叭走郸操妮疗彭胸逢作味荷吓平桶豢眶企怀巷诚2007-7-17 23:29质谱定量的原则系列讲座质谱定量的原则系列讲座（转自分析测试百科叮当空间）质谱定量的原则01-目录：1质谱定量的简介a) 总离子流b) 选择离子监测（SIM）c) 选择反应监测（SRM/MRM）2开发一个SRM方法3内标4PK/LC/MS/MS 药物代谢动力学的LC/MS/MS的反相液相色谱的方法坷瘩迅仟糟育帐毛冈五钟整妖逞秧骄肃旁辅玲外闽楷药条打脊损喇梆定憨咀己御援厂肮雹其逮嚣送叭走郸操妮疗彭胸逢作味荷吓平桶豢眶企怀巷诚这是一个补充的图，一种列表的方式，介绍各种前处理。 各课题组，都根据自己的需要选择方式。 梦想的方法是：简单的沉淀、离心蛋白法。这时候可能有堵的问题，因为处理非常简单，也许会堵。所以各个用户买液质的时候会