第七章体液蛋白质检验.

1、第七章体液蛋白质检验蛋白质 是所有生命现象的体现者 没有蛋白质就没有生命 蛋白质复杂的分子结构是蛋白 质一切生物学功能的基础什么是蛋白质？蛋白质(protein)是由许多 氨基酸(amino acids)通过肽 键(peptide bond)相连形成的 高分子含氮化合物。蛋白质的生物学重要性1.蛋白质是生物体重要组成成分分布广：所有器官.组织都含有蛋白质; 细胞的各个部分都含有蛋白质。含量高：蛋白质是细胞内最丰富的有机 分子，占人体干重的45%,某些组织含量更 高，例如脾、肺及横纹肌等高达80%。2. 蛋白质具有重要的生物学功能1）作为生物催化剂（酶）2）代谢调节作用3）免疫保护作用4）物质的

2、转运和存储5）运动与支持作用6）参与细胞间信息传递3氧化供能蛋白质的元素组成主要有C、H、O、N和S。有些蛋白质含有少量磷或金属元素铁、铜、锌.猛、钻、钿，个别蛋白质还含有碘O蛋白质元素组成的特点各种蛋白质的含氮量很接近，平均为16%。由于体内的含氮物质以蛋白质为主，因此，只 要测定生物样品中的含氮量，就可以根据以下公式 推算出蛋白质的大致含量：克样品中蛋白质的含量（g）=每克样品含氮克数X 6.251、结构蛋白：许多蛋白质是构成细胞和生物体 结构的重要物质。如羽毛、肌肉、头发、蛛丝等的成分主要是蛋白质。2、催化作用：细胞内的化学反应离不开酶的（上图所示催化。绝大多数酶都是蛋白质。为胃蛋白质酶

3、结晶）3、运输作用：有些蛋白质具有运输载体的功能。 如血红蛋白、载体蛋白。6、识别作用：细胞膜的外表有一层糖蛋白，与细胞的识别作用有密切关系。糖蛋白的识别作用 好比是细胞与细胞之间，或细胞与其他大分子之 间，互相联络用的文字或语言。:7、维持血浆胶体渗透压:8、维持血浆正常PH二.血*总罢白的测定(双缩應法)【原理】蛋白质分子中的肽链在碱性条 件下能与二价铜离子作用生成紫红色的络合 物，产生的颜色强度在一定范围内与蛋白质 的含量成正比，但双缩淼反应并非蛋白质特 有的颜色反应，分子中含二个以上肽键者均 有此反应。【试剂】双缩腺试剂 未失结晶水的硫酸 铜(CuSO45H2O) 30g溶于500ml

4、新鲜制备的蒸 憎水或刚煮沸冷却的去离子水中，加酒石酸钾钠 (NaKC4O4H6-4H2O ) 9.0g,碘化钾5.0g,待完 全溶解后加入6moI/L NaOH溶液100ml,最后加 蒸憎水至1L,置聚乙烯瓶内盖紧保存。酒石酸钾钠的作用是络合铜离子，维持铜离 子在碱性溶液中的溶解度，碘化钾防止两价铜离 子还原。【参考范围】6080g/L【临床意义】（一）血清总蛋白增高1.血液浓缩严重腹泻、呕吐、高烧2.合成增加 骨髓瘤。主要见于球蛋白合成增加，多发性（二）血清总蛋白降低1 血液稀释静脉滴注过多低渗溶液，各种原因所引起的水钠潴留。2摄入不足和消耗增加 营养不良，慢性胃肠道 疾病引茸煎掘化吸收不良

5、，消耗性疾病，结核病、甲 亢、恶祥肿瘩。3合成障碍主要见于肝脏疾患。4蛋白质丢失 严重烧伤，大量血浆渗出，肾病 综合症。三、血清淸垂白测定（浪甲酚绿法）【原理】漠甲酚绿（BCG）在pH4.2的环境 中，在有非离子去垢剂（Brij35）存在时，可 与清蛋白结合形成蓝绿色复合物，颜色的深浅在 一定范围内与清蛋白含量成正比。BCG与清蛋白结合的特异性较低，它不仅 与Alb结合呈色，还可与其他蛋白质呈色，其中 ai球蛋白，最明显，但反应速度不同，Alb可立 即反应（快反应），其他蛋白质反应慢（慢反 应）。【试剂】1. lOmmoVL BCG贮存液 BCG1.75g,溶 于5ml 1 mol/L Nao

6、H溶液中，加蒸IS水至250ml。2. 0.5mol/L琥珀酸缓冲贮存液（哩4.0） NaoHlOg,琥珀酸56匕，溶解于800ml蒸tg水中, 用Imol/L NaoH溶液谪pH至4.100.05加蒸憎水 至1L。3叠氮钠贮存液叠氮钠40g溶于1000ml蒸憎水中。4. Brij-35溶液 BrH-35 29g,加蒸tg水 80ml,置80ml左右水溶使其溶解，然后加水至 100ml o5. BCG试剂于IL容量瓶内加蒸憎水400ml,琥珀酸缓冲贮存液100ml, BCG贮存 液8ml,叠氮钠贮存液25ml, Brij-35溶液 2.5ml,加蒸tg水至刻度，配好的BCG试剂的 pH 应为

7、4.15005。Brij-35可提高蛋白质与染料的结合力及 溶解度，提高呈色稳定性，如无Brij35可用 吐温20代替，叠氮钠有防腐作用。【参考范35 55g/Lo【临床意义】血浆參F维蚕白城测定IIIIIIIIIIII1复钙双缩腺法在稀释血浆中加入钙离心血清清蛋白:浓度增高：严重脱水:浓度降低：与总蛋白和似 令血清球蛋白:浓度增高：感染性疾病结核病 丨丨身免疫性疾病风湿病心多发性骨髓瘤心浓度降低：血液稀释；严重营养不良血浆纤维蛋白原（Fib）是一种参与血液 凝固的糖蛋白，又称凝血因子I,分子量34万, 在肝脏合成，电泳时位于卩球蛋白区带。血浆 纤维蛋白原测定对于出血性疾病和肝脏损伤的 诊断有

8、重要意义。测定血浆纤维蛋白原的方法 看多袖，主要看：子使纤维蛋白原转化为不溶性纤维蛋白凝块, 将凝块分离后用双缩腺法测定纤维蛋白含量OIll2 盐析双缩腺法 在血浆中加入12.5%的 亚硫酸钠使纤维蛋白原沉淀而与其他血浆蛋白 质分离，将纤维蛋白原用双缩腺试剂显色，求 出其含量。3.比浊法在pH7.0时，用13.3%的硫酸镀溶液沉淀纤维蛋白原，而血浆中其他蛋白质保 持溶解状态，此时溶液的油度完全由纤维蛋白 原产生，通过比浊可求得其含量。4 免疫化学法 用人纤维蛋白原免疫动物获得抗人纤维蛋白原抗体，应用免疫电泳法、免疫扩散法和ELISA法测定纤维蛋白原含量。【参考范围】2.040g/L【临床意义】

9、1 纤维蛋白原增加纤维蛋白原是一种急性时相反应蛋白，在感染、严重组织损伤、休 克、肾炎、风湿热、恶性肿瘤以及放射治疗、 月经期和妊娠期增高。2纤维蛋白原减少 常见于营养不良、严 重的肝功能损伤、弥漫性血管内凝血、分娩时 羊水进入血液在血管内形成血栓.先天性纤维 蛋白原缺乏症。第五节血清粘蛋白测定:粘蛋白是一类辅基为混合多糖（粘蛋白）的 结合蛋白质，粘多糖由己糖、氨基己糖、甲 基戊糖和唾液酸组成。:主要的急性时相反应蛋白，与抗体的免疫防 御功能有关。:不被过氯酸、磺棊水杨酸等沉淀,而被磷窗酸沉淀原理过氯酸除去其他蛋白质,滤液屮的粘蛋I川 磷餡酸沉淀，加酚试剂与粘蛋白中的酪氨酸 作用，生成蓝色化合物。临床意义:粘蛋白增高：急性或慢性炎症，病理性增