土壤中分解尿素的细菌的分离与计数导学案

1、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数班级姓名一、【学习目标】1说出培养基对微生物的选择作用2. 从土壤中分离出能够分解尿素的细菌二、【学习重点和难点】1学习重点：（1）菌株的筛选与统计（2）微生物的分离和测量方法微生物的分离和测量方法2学习难点：微生物的分离和测量方法三、研究思路：筛选菌株-统计菌落数目-设置对照（记忆）阅读教材，完成筛选菌株的基础知识部分。（一）筛选菌株1、 尿素是一种重要的 氮肥，但不能直接被农作物吸收利用，只有当土壤中的细菌 将尿素分解成 之后，才能被植物利用。土壤中的细菌之所以能分解尿素，是因为它们能合成。2、 DNA多聚酶链式反应（PCR技术）是一种在体外将少量 DNA大

2、量的技术。此项技术的自动化，必须要求使用耐高温（93C）的 。3、（两条途径）:（1）现实生活中微生物的筛选及发现：1966年美国的微生物学家 在美国黄石公园的一个热泉中从一个耐高温的Taq细菌并从中分离到了耐高温的 。（2） 实验室中微生物的筛选：原理：人为提供有利于 生长的条件（包括营养、温度、pH等），同时或 其他微生物生长。4、 选择培养基： 在微生物学中，将允许 种类的微生物生长，同时 和其他种类微生物生长的培养基，称作选择培养基。根据这一思路，分析课本旁栏中培养基的配方，回答以下的问题：KH2PO4NaH2PO4MgSO47H2O葡萄糖尿素琼脂从物理性质看此培养基属于哪类 此培养基

3、中作为碳源、氮源的物质分别是什么这种培养基对微生物是否有选择作用如果有，是如何进行选择的（、统计菌落数目：测定微生物的常用方法有两种： 、显微镜直接计数法。前者常用来统计样品中活菌的数目，当样品的稀释度足够高时，培养基表面生 长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个 ，通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。当菌落数目稳定时，选取菌落数在 的平板进行计数。在同一稀释度下，至少对3个平板进行重复计数， 然后求出 ，并根据平板所对应的稀释度计算出样品中细菌的数目。思考：统计菌落的数与实际数目有何区别，为什么设置对照：设置对照的主要 目的是排除实验组中 对实验结果的影响，提高实验结果

4、的可信度。阅读课本的实例，分析A同学的结果与其他同学不同，可能的原因是什么 如何通过设置对照、帮助A同学排除是土壤样品不同或是培养基被杂菌污染而引起的四、实验的设计：包括实验方案、所需要仪器、材料、具体实施步骤及时间安排方面的设计。 讨论：请根据课本中实验流程示意图和提供的三个资料，然后完成实验设计流程。（课后完 成）五、课堂小结：六、当堂检测0五、课堂检测：1对细菌群体生长规律测定的正确的表述是（）A.在液体培养基上进行B.至少接种一种细菌C. 接种一个细菌D.及时补充消耗的营养物质2使用选择培养基的目的是（）A培养细菌B培养真菌C使需要的微生物大量繁殖D. 表现某微生物的特定性状与其他微生

5、物加以区别3能合成脲酶的微生物所需要的碳源和氮源分别是（）和N2B葡萄糖和NH3和尿素D.葡萄糖和尿素4为培养和分离出酵母菌并淘汰杂菌，常在培 养基 中加入（）A较多的氮源物质B较多的碳源物质C.青霉素类药物D高浓度食盐.统计菌落数目（1 ）测定微生物数量的常用方法有 和。（2）稀释涂布平板法统计样品中 的数目的原理当样品的 足够高时，培养基表面生长的一个菌落， 来源于样品稀释液中的一个 。通过统计平板上的菌落数， 就能推测出样品中大约含有多少活菌。为了保证结果准确，一般选择菌落数在 的平板进行计数。此外，测定微生物数量的常用方法还有 直接计数。设置对照设置对照的主要目的是排除实验组中 对实验

6、结果的影响，提高实验结果的。例如为了排除培养基是否被杂菌污染了，需以培养的培养基作为空白对照。【开拓视野1】显微镜直接计数将待测样品与等量的已知红细胞含量的血液混匀后，涂布在载玻片上，经固定染色后， 在显微镜下随机选取若干个视野进行计数，得出细菌与红细胞的比例，再根据红细胞的 含量计算出单位体积内的细菌数目。也可以用血球计数板直接统计细菌含量。2.【合作探究】一小组讨论，得出一致结论，并展示小组讨论成果！【思考1】、筛选菌株的培养基KH2PO4NaHPOMgSOH2O葡萄糖尿素琼脂将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1000mL。思考1、该培养基的配方中，为微生物的生长提供碳源和氮源的分别是什么物

7、质 碳源：氮源：2、此配方能否筛选出产生脲酶的细菌为什么 。只有产生脲酶的细菌才能利用作为氮源而生存。1.【基础知识】（记忆）关于土壤中某样品细菌的分离与计数实验操作步骤如下：1. 取样：从肥沃、湿润的土壤中取样。应先 3 cm左右，再取样，将样品装入事先准备好的 中。2 .制备:准备牛肉膏蛋白胨培养基和选择培养基将菌液稀释相同的倍数，在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌落数目应明显 选择培养基上的数目，因此，牛肉膏蛋白胨培养基可以作为 ，用来判断选择培养基是否起到了选择作用。3. 微生物的与观察将10g 土样加入盛有90 mL无菌生理盐水的锥形瓶中（体积为250 mL），充分摇匀， 吸取上清液 ,转移至盛有 的生理盐水的无菌大试管中， 将土样以1、101、102依次等比稀释至107稀释度，并按照由107103稀释度的顺序分别吸取 进行平板涂布操作。每个稀释度下需要 3个选择培养基、1个牛肉膏蛋白胨培养基。将涂布好的培养皿放在30 C温度下培养，及时观察和记录。挑选选择培养基中不同形态的菌落接入含培养基的斜面中，观察能否产生如教材中图2-10的颜色反应。4 细菌的计数当菌落数目稳定时，选取菌落数在 的平板进行计数。在同一稀释度下，至少对3个平板进行重复计数， 然后求出 ,并根据平板所对应的稀释度计算出样品中细菌的数目。统计菌