培养基适用性SOP

1、文件名称培养基适用性检查标准操作规程文件编码SOP-QC-1015-03页数共页颁发部门GMP、公室QA年 月曰修订年 月曰批准年 月曰审核年 月曰生效日期年月日分发部门质管部起草说明新增文件，直接升级为03版。目的制定培养基适用性检查标准操作规程。范围本规程适用于微生物培养基适用性测定。责任人文件起草、审核、签批、使用、归档、保管人员执行标准中国药典2010版一部附录XM培训对象检验人员、QC主管内容1.计数培 养基 的适用性检查1.1适用范围细菌、霉菌及酵母菌计数用的培养基应进行培养基的适用性，成品培养基、由脱水培 养基或按处方配置的培养基均应检查。1.2菌种试验用菌株的传代数不得超过5代

2、（从菌种保藏中心获得的冷冻干燥菌种为第0代），并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特征菌种编号大肠埃布困CMCC(B)44102金黄色葡萄球菌CMCC(B)26003枯草芽抱杆菌CMCC(B)63501白色念珠菌CMCC(F)98001黑曲霉CMCC(F)980031.3菌液的制备试验菌株培养物的制备培养菌悬液的制备大肠埃布菌 金黄色葡萄球菌 枯草芽抱杆菌分别接种新鲜培 养物至营养肉汤 培养基中或营养 琼脂培养上。3035C1824小时分别取制备好的培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制备成每1ml含菌数为50100cfu的菌 悬液。白色念珠菌接种新鲜培养物 至改良马丁培养 基或

3、改良马丁琼口匕丄立伞甘L脂培 口养基上。2328C2448小时黑曲霉接种新鲜培养物 至改良马丁琼脂 斜面培养基上。2328C 57天加入35ml含0.05% (ml/ml )聚山梨酯的80的0.9%无菌氯化钠溶液，将抱子洗脱。 然后，米用滴管吸出抱子菌液至无菌试管内，用含0.05% (ml/ml)聚山梨酯的80的0.9%无困氯化钠溶液制成每1ml含困数为50100cfu的菌悬液。困液制备后若在室温卜放置，应在 2小时内使用；若保存在28 C，可在24小时内使用。黑曲 霉抱子悬液可保存在28C，在验证过的贮存期内使用1.4适用性检查被检培养基试验菌株制备过程培养营养琼脂培养基大肠埃布困分别取各试

4、验菌悬液1ml(50100cfu)，分 别注入无菌平皿中，立即注入营养琼脂 培养基，每株试验菌平行制备2个皿， 混匀，凝固。同时，用对照培养基(营养琼脂培养基) 代替被检培养基进行上述试验。3035C48小时金黄色葡萄球菌枯草芽抱杆菌玫瑰红钠琼脂培养基白色念珠菌分别取各试验菌悬液1ml（50100cfu），分 别注入无菌平皿中，立即倾注玫瑰红钠 琼脂培养基，每株试验困平仃制备 2个 平皿，混匀，凝固。同时，用对照培养基（玫瑰红钠琼脂培 养基）代替被检培养基进行上述试验。2328C72小时黑曲霉酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基白色念珠菌取试验菌悬液1ml（50100cfu），分别注入无困平皿中，立即

5、倾注酵母浸出粉胨葡 萄糖琼脂培养基，每株试验困平仃制备2 个平皿，混匀，凝固。同时，用对照培养基（酵母浸出粉胨葡 萄糖琼脂培养基）代替被检培养基进行 上述试验。2328C72小时1.5结果判定若被检培养基上的菌落平均数不小于对照培养基的菌落平均数的70%,且菌落形态大小与对照培养基上的菌落一致，判该培养基的适用性检查符合规定。2控制菌检查用培养基的适用性检查2.1适用范围控制菌检查用的培养基应进行培养基的适用性检查，成品培养基、由脱水培养基或按 处方配制的培养基均应检查。2.2菌种试验用菌株的传代数不得超过5代（从菌种保藏中心获得的冷冻干燥菌种为第0代），并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保

6、证试验菌株的生物学特征。菌种编号大肠埃布困CMCC(B)44102金黄色葡萄球菌CMCC(B)26003乙型副伤寒沙门菌CMCC(B)50094铜绿假单胞菌CMCC(B)10104生抱梭菌CMCC(B)64941白色念珠菌CMCC(F)980012.3菌液制备试验菌株培养物的制备培养菌悬液的制备大肠埃布困分别接种新鲜培 养物至营养肉汤 培养基中或营养 琼脂培养上。3035C1824小时分别取制备好的培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制备成含菌数为50100cfu/ml的 菌悬液。金黄色葡萄球菌乙型副伤寒沙门菌铜绿假单胞菌生抱梭菌接种新鲜培养物 至硫乙醇酸盐流 体培养基中。2328C1824小时取制

7、备好的培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制备成含菌数为50100cfu/ml的菌悬 液。白色念珠菌接种新鲜培养物 至改良马丁培养 基或改良马丁琼口匕拉H甘L脂培 口养基上。2328C2448小时取制备好的培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制备成含菌数为50100cfu/ml的菌悬 液。菌液制备在室温卜放置应在2小时内使用，若保存在28C,可在24小时内使用。2.4适用性检查控制菌检查用培养基的适用性检查项包括促生长能力、抑制能力及指示能力的检查。各 培养基 的检测项目及所用菌株表1。表1控制菌检查用培养基的促生长能力、抑制能力及指示能力检查控制菌检查培养基特性试验菌株胆盐乳糖培养基促生长能力大肠埃希菌

8、大肠埃希菌抑制能力金黄色葡糖球菌4-甲基伞形酮葡糖苷酸培养基促生长能力+指示能力大肠埃希菌曙红亚甲蓝琼脂培养基或麦康凯琼脂培养基促生长能力+指示能力大肠埃希菌乳糖胆盐发酵培养基促生长能力大肠埃希菌大肠菌群抑制能力金黄色葡糖球菌乳糖发酵培养基促生长能力+指示能力大肠埃希菌曙红亚甲蓝琼脂培养基或麦康凯琼脂培养基促生长能力+指示能力大肠埃希菌营养肉汤培养基促生长能力乙型副伤寒沙门菌四硫磺酸钠亮绿培养基促生长能力乙型副伤寒沙门菌沙门菌抑制能力金黄色葡萄球菌胆盐流乳琼脂培养基或沙门、志贺菌属琼脂培养基促生长能力+指示能力乙型副伤寒沙门菌曙红亚甲蓝琼脂培养基或麦康凯琼脂培养基促生长能力+指示能力乙型副伤寒

9、沙门菌三糖铁琼脂培养基指示能力乙型副伤寒沙门菌胆盐乳糖培养基促生长能力铜绿假单胞菌抑制能力金黄色葡萄球菌铜绿假单胞菌溴化十六烷基三甲铵琼脂培养基促生长能力铜绿假单胞菌抑制能力大肠埃希菌绿脓菌素测定用培养基促生长能力+指示能力铜绿假单胞菌亚碲酸盐肉汤培养基促生长能力金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌抑制能力大肠埃希菌卵黄氯化钠琼脂培养基或甘露醇氯化钠琼脂培养基促生长能力+指示能力金黄色葡萄球菌抑制能力大肠埃希菌梭菌梭菌增菌培养基促生长能力生抱梭菌哥伦比亚琼脂培养基促生长能力生抱梭菌沙氏葡萄糖液体培养基促生长能力白色念珠菌沙氏葡萄糖液体培养基促生长能力+指示能力白色念珠菌白色念珠菌念珠菌显色培养基促生长

10、能力+指示能力白色念珠菌抑制能力大肠埃希菌1%聚山梨酯80玉米琼脂培养基促生长能力+指示能力白色念珠菌2.5液体培养基促生长能力检查分别接种不大于100cfu的试验菌（表1）于被检培养基和对照培养基中，在相应控制 菌检查规定的培养温度（3035C ）及最短培养时间下培养。增菌培养基多为澄清液体培 养基，与对照培养基比较，被检培养基中试验菌应生产良好，表现为液体培养基变浑浊。 2.6固体培养基促生长能力检查取试验菌液各0.1ml （含菌数50100cfu）分别涂布与被检培养基和对照培养基平板 上，在相应控制菌检查规定的培养温度（3035C ）及最短培养时间下培养。被检培养基 与对照培养基上生长的

11、菌落大小，形态特征应一致。2.7培养基抑制能力检查接种不大于100cfu的试验菌（表1）于被检培养基和对照培养基平板上，取试验菌 0.1ml菌悬液（不大于100cfu）分别涂布于固体被检培养基和对照培养基，在相应的控制 菌检查规定的培养温度（3035C）及最长时间下培养，试验菌应不得生长。2.8固体培养基指示能力检查取试验菌各0.1ml （含菌数50100cfu）（表1）分别涂布与被检培养基和对照培养基 平板上，在相应控制菌检查规定的培养温度（3035C）及时间下培养。被检培养基上试 验菌生长的菌落大小，形态特征、指示反应情况等应与对照培养基一致。2.9液体培养基指示能力检查分别接种不大于10

12、0cfu的试验菌（表1）于被检培养基和对照培养基中，在相应控制 菌检查规定的培养温度（3035C ）及最短培养时间下培养。对培养基管比较，被检培养 基管试验菌生长情况、指示剂反应等应对照培养基一致。2.10控制菌检查用培养基能力测试列表（表 2）表2控制菌检查用培养基适用性检查项目、菌株及判断指标培养基测试菌株测试特性测试指标胆盐乳糖培养基大肠埃希菌促生长能力浑浊铜绿假单胞菌浑浊金黄色葡糖球菌抑制能力未见浑浊MUG培养基大肠埃希菌促生长能力浑浊大肠埃希菌指示能力366nm有荧光曙红亚甲蓝琼脂或麦康凯琼脂大肠埃希菌促生长能力回收率乙型副伤寒沙门菌回收率大肠埃希菌指示能力颜色形态同对照乙型副伤寒沙

13、门菌颜色形态同对照乳糖胆盐发酵管大肠埃希菌促生长能力浑浊产气金黄色葡糖球菌抑制能力未见浑浊乳糖发酵培养基大肠埃希菌促生长能力浑浊大肠埃希菌指示能力产气营养肉汤乙型副伤寒沙门菌促生长能力浑浊金黄色葡糖球菌促生长能力浑浊四硫磺酸钠亮绿培养基乙型副伤寒沙门菌促生长能力上清浑浊金黄色葡糖球菌抑制能力上清未见浑浊胆盐流乳琼脂或沙门、志贺菌属琼脂乙型副伤寒沙门菌促生长能力回收率乙型副伤寒沙门菌指示能力颜色形态同对照溴化十八烷基甲铵琼脂铜绿假单胞菌促生长能力回收率大肠埃希菌抑制能力不得生长绿脓菌素测定用培养基铜绿假单胞菌促生长能力回收率铜绿假单胞菌指示能力颜色形态同对照亚碲酸盐肉汤培养基金黄色葡糖球菌促生长能力浑浊大肠埃希菌抑制能力未见浑浊卵黄氯化钠琼脂或甘露醇氯化钠琼脂金黄色葡糖球菌促生长能力回收率金黄色葡糖球菌指示能力颜色形态