常用pH缓冲液配置方法及注意事项

1、常用 pH 缓冲液配置方法及注意 事项常用 pH 缓冲溶液的配制和 pH值序号溶液名称配制方法pH值1氯化钾 - 盐酸13.0 ml 0.2 mol/L HCl与 25.0 ml 0.2 mol/L KCl混合均匀后，加水稀释至 100 ml1.72氨基乙酸 - 盐酸在 500 ml 水中溶解氨基乙酸 150 g ，加 480 ml 浓盐 酸，再加水稀释至 1L2.33一氯乙酸 - 氢氧化钠在 200 ml 水中溶解 2 g 一氯乙酸后，加 40 g NaOH ， 溶解完全后再加水稀释至 1 L2.84邻苯二甲酸氢钾 - 盐酸把 25.0 ml 0.2 mol/L 的邻苯二甲酸氢钾溶液与 6.

2、0 ml0.1 mol/L HCl 混合均匀，加水稀释至 100 ml3.65邻苯二甲酸氢钾 - 氢氧化 钠把 25.0 ml 0.2 mol/L的邻苯二甲酸氢钾溶液与 17.5ml 0.1 mol/L NaOH 混合均匀，加水稀释至 100 ml4.86六亚甲基四胺 - 盐酸在 200 ml 水中溶解六亚甲基四胺 40 g，加浓 HCl 10 ml ， 再加水稀释至 1 L5.47磷酸二氢钾 - 氢氧化钠把 25.0 ml 0.2 mol/L的磷酸二氢钾与 23.6 ml 0.1mol/L NaOH 混合均匀，加水稀释至 100 ml6.88硼酸 - 氯化钾 - 氢氧化钠把 25.0 ml

3、0.2 mol/L的硼酸 - 氯化钾与 4.0 ml 0.1mol/L NaOH 混合均匀，加水稀释至 100 ml8.09氯化铵 - 氨水把 0.1 mol/L 氯化铵与 0.1 mol/L 氨水以 2：1 比例 混合均匀9.110硼酸 - 氯化钾 - 氢氧化钠把 25.0 ml 0.2 mol/L的硼酸 - 氯化钾与 43.9 ml 0.1mol/L NaOH 混合均匀，加水稀释至 100 ml10.011氨基乙酸 -氯化钠 - 氢氧 化钠把 49.0 ml 0.1 mol/L 氨基乙酸 - 氯化钠与 51.0 ml0.1 mol/L NaOH 混合均匀11.612磷酸氢二钠 - 氢氧化钠

4、把 50.0 ml 0.05 mol/L Na 2HPO4 与 26.9 ml 0.1 mol/LNaOH 混合均匀，加水稀释至 100 ml12.013氯化钾 - 氢氧化钠把 25.0 ml 0.2 mol/L KCl 与 66.0 ml 0.2 mol/L NaO 混合均匀，加水稀释至 100 mlH13.0、常用溶液的配制（一）溶液配制注意事项1药品要有较好的质量 试剂分为优级纯 （保证 试剂， Guaranteed reagent ， GR）、分析试 剂（ Antalytical reagent ，AR）化学纯 （ Chemical pure ，CP）和实验试剂 （ Laborator

5、y reagent ，LR）等等。工业用 的化学试剂，杂质较多，只在个别情况下应用， 如配洗液用的硫酸、配干燥剂的氯化钙等。 2药品称量要精确。 3配制试剂用水应用新鲜的去离子水或双蒸馏 水，比电阻值在 50 万欧姆以上， pH在 5.57.0 之间才可应用， 在组织培养等特殊用途时应注意 此项要求，配制一般化验用溶液只要求用双蒸馏 水或去离子水。 配好后的溶液，应立即除菌处理（如高压灭 菌、抽滤或加抑菌物质），以防杂菌生长。（二）0.067 （1/15 ）Mol/L 磷酸缓冲液 1 1/15Mol/L 磷酸二氢钾溶液的配制：称取磷 酸二氢钾（ KH2PO4，AR）9.08g ，用蒸馏水溶 解

6、后，倾入 1000ml 容量瓶内，再稀释至刻度 （1000ml）。2 1/15Mol/L 磷酸二氢钠溶液的配制：称取无 水磷酸氢二钠（ Na2HPO4，A.R. ）9.47g （或者 Na2HPO42H2O 11.87g ）用蒸馏水溶解后，放入1000ml 容量瓶内，再加蒸馏水稀释至刻度 （1000ml）。3按附表的比例， 配制成不同 pH值的缓冲溶液 附表 1 磷酸盐缓冲液配制法（单位：毫升）pH1/15Mol/L Na 2HPO41/15Mol/L KH 2PO4pH1/15Mol/L Na 2HPO41/15Mol/L KH 2PO45.88.092.07.166.623.45.99.9

7、90.17.272.028.06.012.287.87.376.823.26.115.384.77.380.819.26.218.681.47.584.115.96.322.477.67.687.013.06.426.773.37.789.410.66.531.868.27.891.58.56.637.562.57.993.26.86.743.556.58.894.75.36.849.650.48.195.84.26.955.444.68.297.03.07.061.138.98.498.02.0（三）0.15Mol/L PB 液 附表 2 0.15Mol/LPB 液配制法pH0.15Mol/

8、L Na 2HPO4（ ml）0.15Mol/L NaH 2PO4（ml ）6.426.573.56.637.562.56.849.051.07.061.039.07.272.028.07.481.019.07.687.013.0Na2HPO42H2O分子量=175.05 0.15Mol/L 溶液含 26.7g/L 。Na2HPO412H2O分子量 =358.22 0.15Mol/L 溶液 含 53.7g/L 。NaH2PO4H2O分子量 =138.00 0.15Mol/L 溶液含 20.7g/L 。NaH2PO42H2O分子量 =156.03 0.15Mol/L 溶液含 23.4g/L 。（

9、四） 0.2Mol/L PB 缓冲液 附表 3 0.2mol/L PB 缓冲液配制法pH0.2 Mol/L Na 2HPO4（ml ）0.2Mol/L NaH 2PO4（ml ）5.88.092.06.012.387.76.218.581.56.426.573.56.637.562.56.849.051.07.061.039.07.272.028.07.481.019.07.687.013.07.891.58.58.094.75.30.2Mol/L Na 2HPO42 H2O溶液 35.61g/L Na2HPO412 H2O溶液含 71.64g/L 0.2Mol/LNaH2PO4H2O溶液含

10、27.60g/L NaH2PO42 H2O溶液含 31.21g/L欲配 0.1Mol/L PB缓冲液则在 0.2Mol/L PB缓冲 液的基础上加 H2O稀释 1 倍即可。欲配制 PBS液 时，则在溶液中加 0.85 的 NaCl 溶液即可。 （五）无钙镁离子磷酸缓冲盐水（ PBS） （ 0.15Mol/L PH 7.2 ）NaCl 8.0gKCl 0.2gNa2HPO4 1.15g（如为 Na2HPO412H2O，则为 2.89g ）KH2PO4 0.2g 将上述试剂依次溶于 1 000ml 去离子水中，完全 溶解后， 115高压灭菌 10min15min，存在 4 冰箱中备用。此液可用于配

11、制和稀释细胞分散剂 以及洗涤细胞培养物。（六）硼酸盐缓冲液（ Borate saline buffer ） 1硼酸（ 3BO3）0.2Mol/L 硼酸：硼酸 12.37g 加水至 1 000ml 。 2硼砂（ Na2B4O7）0.05Mol/L 硼砂：硼砂 19.07g 加水至 1 000ml 。 附表 4 不同 pH 的 0.2Mol/L 硼酸缓冲液配制法pH0.05Mol/L 硼砂（ ml ）0.2Mol/L 硼酸（ ml ）pH0.05Mol/L 硼砂（ ml ）0.2Mol/L 硼酸（ ml ）7.41.09.08.23.56.57.61.58.58.44.55.57.82.08.08

12、.76.04.08.03.07.09.08.02.0七）巴比妥缓冲液1 pH8.2 离子强度 0.05Mol/L 巴比妥缓冲液 巴比妥钠 47.6g 蒸馏水 3 000ml1.17N HCl 55.0ml（1.17 N HCl=193ml 浓 HCl 加 1 807ml 蒸馏水） 将 4.76g 巴比妥钠溶于 3 000ml 蒸馏水。 加 1.17 N HCl 55ml 。 用 HCl调节 pH到 8.2 ，并加蒸馏水至 4 265ml 2 pH8.4 0.06Mol/L 巴比妥缓冲液 巴比妥 1.84g 巴比妥钠 10.30g 加蒸馏水至 1 000.00ml3 pH8.6 0.06Mol/

13、L 巴比妥缓冲液 巴比妥 1.66g 巴比妥钠 12.76g 加蒸馏水 1 000.00ml（八） 0.2Mol/L 醋酸盐缓冲液 见表附表 5附表 5 0.2Mol/L 醋酸盐缓冲液配制法pH0.2Mol/L Tris (ml )0.1Mol/LHCl( ml)pH0.2Mol/L Tris ( ml)0.1Mol/LHCl(ml)233723379.108.952558.067.902527.58.928.76257.57.967.822530.08.758.602510.57.877.732532.58.628.482512.57.777.632535.08.508.372515.57.

14、667.522537.58.408.272517.57.547.402540.08.328.182520.07.367.222542.5（九）三羟甲基甲烷盐酸缓冲液（ Tris HCl 缓冲液）不同 pH， 0.05Mol/L25ml0.2Mol/L 三羟甲基氨基甲烷加 ml0.1NHCl，加水稀释至 100ml（见下表） 附表 6 Tris HCl 缓冲液配制法pH0.2Mol/LTris(ml)0.1NHCl(ml)pH0.2Mol/LTris(ml)0.1NHCl(ml)233723379.108.962558.057.902527.58.928.78257.57.967.822530.

15、08.748.602510.07.877.732532.58.628.482512.57.777.632535.08.508.372515.07.667.522537.58.408.272517.57.547.402540.08.328.182520.07.367.222542.58.238.102522.57.207.052545.08.148.002525.025三羟甲基氨基甲烷（ Tris ） 分子量 =121.140.2Mol/L 三羟甲基氨基甲烷： Tris24.23g ，加 水至 1 000ml 。0.1NHCl：取 HCl8.6ml ，加水至 1 000ml 。（十） 0.5Mo

16、l/L pH9.5 碳酸盐缓冲液NaHC3O 3.70gNa2CO3 0.60g溶于 600.00ml 蒸馏水中即得。 不用时塞紧瓶塞，以免吸收空气中二氧化碳使 PH下降。最好小量配制。（十一）甘油磷酸缓冲液1配制 pH8.0 磷酸缓冲液0.1Mol/L Na 2HPO4 94.50ml0.1N NaH2PO4 5.50ml 混合即可29 份甘油与 1 份 pH8.0 磷酸缓冲液混合，即 为甘油磷酸缓冲液。用途：用于免疫荧光试验。（十二） Hanks液1贮存液NaCl 80.00gKCl 4.00gNa2HPO412 H2O 1.52gKH2PO4 0.60g 葡萄糖 4.00g 0.4 酚红

17、液 50.00ml 双馏水加至 100.00ml 115高压灭菌 15min，冰冻保存。2工作液 贮存液 1 份 双馏水 9 份115高压灭菌 15min。临用时用灭菌的 5.6 NaHC3O液调 pH值至 7.2 左右（溶液呈橙红色）。 （十三） 萘（钠）氏试剂（Nessler s reagent ） 配方 1：氯化汞 6.0g碘化钾 12.4g20NaOH 30ml 加蒸馏水至 100ml 配方 2：碘化汞 11.5g 碘化钾 8g 蒸馏水 50ml （完全溶解后）过滤，加 20NaOH 50m。l 用途：检测溶液中氨离子。（十四）阿氏（ Alsever s）液 葡萄糖 2.05g柠檬酸钠

18、 0.80g 氯化钠 0.42g 蒸馏水 100ml 溶解后，以 10%柠檬酸调节 pH至 6.1 ，过滤，分 装，10 磅 10min 灭菌， 4保存。（十五）青、链霉素混合液（简称 SP液或 双抗液）青霉素（ 40 万 U） 5 支 链霉素（ 200 万 g） 1 支 分别溶于 100ml 灭菌无离子水中或共同溶于 200ml 灭菌无离子水中，混合后分装小瓶，置- 10- 20冰箱保存备用 （ 1 万单位 g/ml ）。 临用时，按 1%的量加入营养液或其他溶液中， 最后浓度是青霉素 100U/ml ，链霉素 100ug/ml 。 （十六）洗液（清洁液） 配方 1： 重铬酸钾 150g 蒸馏水 300ml 浓硫酸 3 000ml 将重铬酸钾加入蒸馏水中， 使之自然溶解或水浴 溶解，亦可在大坩埚中加热溶解， 然后慢慢加入 浓硫酸，边加边搅拌，见发热过