原发性胆囊癌中核因子E2P45相关因子与血红素加氧酶-1的表达及其与临床病理的相关性(一)

1、原发性胆囊癌中核因子 E2P45相关因子与血红素加氧酶 -1 的表达及其 与临床病理的相关性 (一 ) 作者：张明鑫，周苏娜，王健生，叶尔买克，蔡惠，段小艺，石景森 【摘要】目的检测核因子 E2p45 相关因子 2(Nrf2) 与血红素加氧酶 -1(HO-1)在原发性胆囊癌组织中的表达，探讨其与胆囊癌发生、发展的 关系。方法采用免疫组化 SP法检测 59例原发性胆囊癌患者 Nrf2和 HO-1 的表达水平。结果原发胆囊癌组织中 Nrf2 和 HO-1 表达的强阳性率分 别为 76.3%、80.7%。随着转移程度、 Nevin 分级以及病理分级的增加， Nrf2 和 HO-1 的强阳性表达率增加

2、，且具有统计学差异 (P0.05)。两者的 强阳性表达与年龄、性别等临床特征无相关性 ;Nrf2 和 HO-1 表达之间 具有相关性 (r=0.376，P0.05)。结论 Nrf2 和 HO-1 在原发性胆囊癌组织 中存在高表达，对胆囊癌的发生、发展起一定作用。【关键词】核因子 E2p45 相关因子 2;血红素加氧酶 -1;原发性胆囊癌 ;免 疫组织化学ABSTRACT:ObjectiveTodetecttheexpressionofnuclearfactor-erythroid2p45- relatedfactor2(Nrf2)andhemeoxygenase(HO-1),andinvest

3、igateitscorrelatio nwiththegenesisanddevelopmentofprimarygallbladdercarcinoma.Methods Immunohistochemistry(SPassay)wasusedtodetecttheexpressionofNrf2and HO-1proteinin59patientswithprimarygallbladdercarcinoma.ResultsHighlyp ositiveexpressionrateofNrf2andHO-1was76.3%and80.7%,respectively,inpri marygal

4、lbladder.TheexpressionofNrf2andHO-1hadasignificantcorrelationwithmetastasis,Nevinstaging,anddifferentiation(P0.05),butshowednosignificantassociationwithsexorage.TheexpressionofNrf2hadapositivecorrelationwit hthatofHO-1(r=0.376,P0.05).ConclusionBothNrf2andHO-1areoverexpresse dinprimarygallbladdercarc

5、inomaandmayplayacertainroleinthegenesisandd evelopmentofprimarygallbladdercarcinoma.KEYWORDS:nuclearfactor-erythroid2p45-relatedfactor2(Nrf2);hemeoxyge nase1(HO-1);primarygallbladdercarcinoma;immunohistochemistry 核 因 子 E2p45 相 关 因 子 2(nuclearfactor-erythroid2p45-relatedfactor2,Nrf2) 是氧化应激中的关键 转录因子，通

6、过上调抗氧化相关基因的表达清除代谢毒物、致癌物等 以维持机体的氧化还原稳态。因此，激活 Nrf2 途径对预防肿瘤具有重 要意义 1。近来的研究发现， Nrf2 及其下游基因在许多肿瘤细胞株及 组织中过度表达，促进了肿瘤的生长，而且 Nrf2 在耐药细胞中表达上 调 ， 可 能 和 肿 瘤 的 获 得 性 耐 药 相 关 2 。 血 红 素 加 氧 酶 -1(hemeoxygenase-1,HO-1是) Nrf2 众多下游基因之一，可氧化血红素生 成胆绿素、一氧化碳和二价铁离子。 HO-1 通过减轻氧化损伤和减轻炎 症反应、抑制细胞凋亡、 调节细胞分化来维持细胞稳态 3。研究发现， HO-1在肿

7、瘤细胞中表达上调且与肿瘤发生、转移以及耐药相关 4。目 前，国内外有关 Nrf2 和 HO-1 表达与胆囊癌关系的研究尚未见报道。 本研究通过免疫组织化学法检测 Nrf2 和 HO-1 在原发性胆囊癌中的表 达情况，探讨 Nrf2 和 HO-1 在胆囊癌发生、发展中的临床意义。1 材料与方法1.1 材料收集西安交通大学医学院第一附属医院 20002006 年间胆囊 癌患者的组织标本，共 59 例，其中男 17 例，女 42 例，年龄 36 83 岁，中位年龄 60.8 岁;所有病例经 HE染色证实为原发性胆囊癌，病理 类型：腺癌 54 例，鳞癌 5 例。所取标本用甲醛固定，常规石蜡包埋， 制备

8、 4m切片，行免疫组化检测。1.2Nrf2 和 HO-1的免疫组化染色 Nrf2 兔抗人多克隆抗体为美国 Santa 公司产品 (货号： sc-722)，按 1200 稀释后作为一抗 ;HO-1兔抗人多克 隆抗体为美国 Abcam公司产品(货号： ab52947)，按 1500 稀释后作 为一抗 ;通用型 SP 系列工作液试剂盒 (SP-9000)及 DAB 显色试剂盒 (ZLI-9032)购自中山金桥生物公司。采用免疫组化 SP法，染色步骤严格 按照说明书进行。以已知阳性反应片作为阳性对照，以PBS 代替一抗作为阴性对照。1.3 免疫组化染色结果的判定由 2位高年资的病理科医生独立评定， 当

9、 出现分歧时共同评定。蛋白表达均以细胞质或细胞核内出现棕黄色颗 粒为阳性，具体方法如下：每张切片随机观察 5 个高倍视野，每个视 野计数 1000 个细胞，用各视野中阳性细胞数的平均百分数进行计分： 0%24%为 1分，25%49%为2分，50%74%为 3分，75%为4分。 染色强度以多数阳性细胞呈现的染色特征为标准计分：细胞未着色为 或呈淡黄色为 0分，棕黄色为 1 分，棕褐色为 2分。为进行统计分析， 以超过 25%细胞呈棕褐色为强阳性，余为弱阳性。1.4 统计学分析计数资料的组间比较采用卡方检验， 应用 SPSS13.0统计 软件对结果进行处理，检验水准为 =0.0。52 结果2.1Nrf2与 HO-1在原发性胆囊癌中的表达情况 Nrf2与 HO-1呈散在分布 的淡黄色或棕褐色颗粒，主要定位于细胞核中，散见于细胞质中。阳 性细胞呈片状分布的棕褐色颗粒， 阴性对照片中未见棕黄色颗粒 (图 1)。 Nrf2 与 HO-1 的强阳性表达率分别为 76.3%和 80.7%。随着转移程度、 Nevin 分级以及病理分级的增加，两者的强阳性表达率增加，且具有统 计学差异 (P0.05)。而不同年龄、性别的原发性胆囊癌患者的 Nrf2与 HO-1 强弱表达无统计学差异 (表 1)。图 1Nrf2与 HO-1在原发性胆