SYSMEX五分类血液分析仪XT-2000i检测原理及临床应用PPT课件

1、1 2 l二分群时代：淋巴细胞、非淋巴细胞 l三分群时代：（大细胞、中间细胞、小细胞） l五分类时代：淋巴、单核、中性粒、嗜酸粒、 嗜碱粒 3 五分类血球方法学概览五分类血球方法学概览 n方法学方法学 第一代：纯物理原理第一代：纯物理原理(CD-3700，SE-9000) 激光、射频、电阻激光、射频、电阻 第二代：物理第二代：物理+化学（化学（SYSMEX SF-3000，），） 酶染色、颗粒染色酶染色、颗粒染色 特异性溶血特异性溶血 第三代：物理第三代：物理 +分子生物学（分子生物学（SYSMEX XT- 1800i/XT-2000i） 分子生物学技术（分子生物学技术（DNA、RNA染色）染

2、色） 4 lXT-2000i检测报告组成 l白细胞系统的检测原理和临床病例分析 l红细胞系统参数的临床意义 l网织红细胞的参数 l血小板系统参数的临床意义 l标本采集的要求 5 l参数参数 30项项 l研究参数研究参数 2项（项（IG，IG） l处理速度处理速度: 80标本标本/小时小时 l检测模式检测模式: 4种模式种模式（CBC, CBC+DIFF CBC+RET,CBC+DIFF+RET l标本量标本量: 手动进样手动进样: 85 ul 自动穿刺自动穿刺: 150 ul 末梢血预稀释进样：末梢血预稀释进样：40ul+160ul稀释液稀释液 6 （一）2个直方图、4个散点图 （二） 30项

3、数字结果： RBC、WBC、PLT、HGB、HCT、MCV、 MCH、MCHC、RDW-SD、RDW-CV、 MPV、PCT、PDW、P-LCR、NEU%/#、 MNON%/#、LYM%/#、EO%/#、BA%/#、 RET %/#, IRF, LFR, MFR, LFR 7 XT 分析流程分析流程 检测模块 分析原理 检测通道 图形 RBC/PLTWBC 鞘 流 电 阻 法 半导体激光 FCM RBC/PLT 通道 PLT 直方图 参数 PLTHGB HGB 通道 比色法 HGB 全全 血血 标标 本本 DIFF 通道 RET 通道 DIFF散点图 WBC# Baso RET PLT-O I

4、RF RET散点图 Lymph Mono Neut+Ba EO *IG - research RET 半导体激光 FCM WBC/Ba 通道 WBC/BA 散点图 RBC 直方图 RBC only for XT-2000i 8 9 lDIFF散点图、WBC/BASO散点图 l：白细胞总数 l：中性粒细胞 l：淋巴细胞 l：单核细胞 l：嗜酸性粒细胞 l：嗜碱性粒细胞 l：绝对值：百分数 10 半导体激光和流式细胞的应用半导体激光和流式细胞的应用 侧向散射光侧向散射光 RNA/DNA含量含量 细胞内部结构细胞内部结构 细胞体积大小细胞体积大小 前向散射光前向散射光 侧向荧光侧向荧光 激光束激光束

5、 分光镜 11 WBC/BASO 原理原理 n步骤步骤1: 吸入吸入标本标本 通过通过 SRV吸入标本血样和试剂吸入标本血样和试剂 n步骤步骤2: 溶血溶血 STROMATOLYSER-FB使红细胞溶血使红细胞溶血 除嗜碱性粒细胞以外的除嗜碱性粒细胞以外的WBC 收缩收缩 n步骤步骤3: 分析分析 分析前向散射光和侧向散射光的散射图分析前向散射光和侧向散射光的散射图 12 BASO 试剂系统试剂系统 BASO other WBC RBC Hemolysed (Acid, hypotonic solution) 保持原形 脱浆收缩 溶血 13 14 WBC DIFF 分类通道原理分类通道原理 n

6、步骤步骤1: 吸入吸入 从从 SRV吸入血液和试剂吸入血液和试剂 n步骤步骤2: 溶血溶血 STROMATOLYSER-4DL 溶解溶解RBC - WBC膜被轻微损伤，打孔膜被轻微损伤，打孔 (acid, hypotonic solution) n步骤步骤3: 染色染色(RNA and DNA) STROMATOLYSER-4DS 染色染色 染液染液: 荧光染料荧光染料 ( Polymethine Dye) n步骤步骤3: 分析分析 分析前向散射光和荧光的散点图分析前向散射光和荧光的散点图 15 溶血溶血 (WBC membrane is weakly damaged) 染色染色 RNA DN

7、A Diff 试剂系统试剂系统 Blast原核细原核细 胞胞, IG.未成未成 熟粒细胞熟粒细胞 异常淋巴细胞异常淋巴细胞 等等 高荧光浓度高荧光浓度 低荧光浓度低荧光浓度 高荧光浓度高荧光浓度 正常细胞正常细胞 16 17 WBC分类分类-散点图（正常标本）散点图（正常标本） 淋巴淋巴 单核单核 中性中性 嗜酸嗜酸 侧向荧光侧向荧光(RNA ,DNA) 红细胞碎片红细胞碎片 侧向散射光侧向散射光(内部结构内部结构) 18 分类分类-散点图散点图(异常标本异常标本) 淋巴淋巴 单核单核 中性中性 嗜酸嗜酸 侧向荧光侧向荧光(RNA ,DNA) 红细胞碎片红细胞碎片 侧向散射光侧向散射光(内部结

8、构内部结构) 异型淋巴异型淋巴 IG 核左移核左移 19 20 该病例为儿童急性粒细胞白血病（AML-M2），患儿因突发高热而前来 就诊，首次血常规检查发现，外周血原始细胞占71%，幼稚红细胞占 2%。) 21 22 23 急淋（ALL）-L1 24急淋（急淋（ALLALL）L1L1 25 l直方图 l：红细胞总数 l：血红蛋白浓度 l：红细胞压积 l：平均红细胞体积 l：平均血红蛋白量 l：平均血红蛋白浓度 l：红细胞体积分布宽度 26 特点： 曲线波峰左移，峰底变宽， 显示小细胞不均一性。 27 特点： 曲线波峰右移，波底增宽， 显示明显的大细胞不均一 性。 28 特点： 小峰左移，峰底变

9、窄， 典型的小细胞均一性贫血。 29 红细胞体积分布宽度的临床意义 一、定义： 红细胞体积分布宽度（Red blood cells volume Distribution Width） 是反映周围血红细胞体积异质性的参数，用所测单个红细 胞体积的变异系数来表示（CV=SD/X也可用SD表示）。 RDW-SD指把直方图顶点的高度定为100%，自下而上高 度为20%时的红细胞分布宽度；RDW-CV指假定红细胞直方 图分布曲线为正规分布曲线时，把标准偏差除以MCV，再 乘以100所得出的数值。 30 l缺铁性贫血与轻型地中海的鉴别诊断 l有关缺铁性贫血的早期诊断与治疗 l用于贫血的形态学分类(MCV

10、/RDW) 31 RDW是两者鉴别的参考指标： 1、IDA患者RDW100%升高； 2、轻型地中海贫血患者基本正常 32 Uchida对对1648例学生进行了各项指标的观察，例学生进行了各项指标的观察， 结果显示：结果显示： MCV RDW MCV RDW 正常人正常人 （89894fl4fl）（）（12.7 12.7 0.7 0.7）% % 隐性缺铁前期（隐性缺铁前期（89894fl4fl）（）（13.7 13.7 0.7 0.7）% % 隐性缺铁期隐性缺铁期 (86(866fl6fl）（）（14.0 14.0 1.51.5）% % IDAIDA患者患者 79fl 79fl （15.6 15

11、.6 1.71.7）% % 33 34 MCVRDW形态学分类形态学分类 常见疾病分类常见疾病分类 正常正常正常正常 正细胞均一性正细胞均一性急性失血性贫血急性失血性贫血 正常正常异常异常 正细胞不均一性正细胞不均一性 早期缺铁性贫血早期缺铁性贫血 增高增高正常正常 大细胞均一性大细胞均一性部分再生障碍性贫血部分再生障碍性贫血 增高增高异常异常 大细胞不均一性大细胞不均一性 巨幼细胞性贫血巨幼细胞性贫血 减低减低正常正常 小细胞均一性小细胞均一性轻型轻型地中海贫血地中海贫血 减低减低异常异常 小细胞不均一性小细胞不均一性 缺铁性贫血缺铁性贫血 35 lDNA/RNA核酸荧光染色核酸荧光染色 l

12、参参 数：数：RET, IRF, LFR, MFR, HFR, PLT-O 内置全自动内置全自动RET分析及成熟度分类分析及成熟度分类 激光染色法检测激光染色法检测PLT 36 RET 试剂系统试剂系统 Staining: Ploymethine: RNA Oxazine: DNA RET WBC RBC High Level Fluorescence Low Level Fluorescence Very High Level Fluorescence Reagent: RETSEARCH II (Diluent + Dye) 37 Fluorescence(RNA) RET-散点图散点图

13、Forward Scatter(Volume) MFRHFRLFR PLT RBC-O RET WBC IRF 38 v RET是一个独立的监测骨髓造血功能恢复的参数 v IRF是评估造血功能恢复的可靠依据 v IRF是评估造血功能恢复比RET更敏感的指标 RET增高：表示骨髓造血功能旺盛。急性溶血性 贫血，急性失血等明显增高。增生性贫血，骨转移 等轻度升高。 RET减少：肾脏，内分泌疾病，溶贫再生危象， 再生障碍性贫血，放化疗后等。 39 PLT-I 报告报告 PLT-O 用于明显的病理性标本用于明显的病理性标本 正常正常 当明显病理性标本当明显病理性标本 存在存在RBC碎片，异常直方图碎片

14、，异常直方图 ，等等，等等 PLT-O XT-2000i以电阻抗法PLT-I为准 当出现异常标本时， XT-2000i会转换用光学法PLT- O检测 40 41 PLT-I/O 散射图散射图 直方图直方图( (直流阻抗法直流阻抗法)散射图散射图(光学法光学法) 42 PLT-I: RBC/PLT通道通道 v电阻抗每次检测电阻抗每次检测20-25万个细胞，而万个细胞，而RET通道内激光通道内激光 法每次只能检测法每次只能检测60000个细胞，其中个细胞，其中PLT3000个个 v电阻抗法的电阻抗法的PLT数目的准确性与重复性比较好数目的准确性与重复性比较好 PLT-O: RET/PLT-O通道通

15、道 v激光法对激光法对PLT的形态鉴别能力强的形态鉴别能力强 v异常标本中的小异常标本中的小RBC、WBC碎片、或碎片、或PLT数目较少数目较少 时，激光法能更准确地将时，激光法能更准确地将PLT鉴别出来鉴别出来 43 l红细胞低鉴别线红细胞低鉴别线RL(%)10% l血小板低鉴别线血小板低鉴别线PL(%)9% l血小板高鉴别线血小板高鉴别线PU(%)39% l血小板高鉴别线血小板高鉴别线PU(%)23FL 和和PU20% l存在细胞碎片存在细胞碎片 l存在红细胞凝集存在红细胞凝集 l血小板高鉴别线血小板高鉴别线PU%13%和和PLT35FL45% 和和 PLT-I#80 x109/L lPL

16、T-I115% 44 l直方图 l：血小板计数 l：血小板体积分布宽度 l：平均血小板体积 lP C T：血小板压积 l：大血小板比例 45 46 l在多种疾病中PLT直方图均可发生改变，如： 特发性血小板减少性紫癫，特点是血小板数 量减少，巨大血小板增多，直方图表现为曲 线峰右移，而窄峰图则常因PLT减少所致。 l影响因素： l曲线峰左移，可能存在细胞浆碎片； l曲线峰右移，常表示存在异常红细胞 （裂细胞或极端小的红细胞）。 47 l参考值：参考值：0.13-0.43 l体积超过体积超过12fl的的PLT占总占总PLT的比率的比率 l对检测血小板凝集、与红细胞的重叠以对检测血小板凝集、与红细

17、胞的重叠以 及监视血小板造血功能等有意义及监视血小板造血功能等有意义 48 l参考值：参考值：9.4-12.5 fl l是反映骨髓造血功能是否良好的指标。是反映骨髓造血功能是否良好的指标。 l用于病情观察：白血病化疗时，用于病情观察：白血病化疗时，MPVMPV增加是增加是 骨髓恢复的第一个征兆骨髓恢复的第一个征兆 49 PLTMPV常见疾病 正常 增高慢粒、骨髓纤维化等 增高 正常骨髓增生性疾病 增高 增高反应性血小板增多症等 降低 增高外周血血小板破坏增多 降低 降低艾滋病、再生障碍性贫血等 MPV与与PLT联合检测的临床意义联合检测的临床意义 50 51 l静脉血和末梢血因采血方式和部位的

18、不同而静脉血和末梢血因采血方式和部位的不同而 存在较大差别：存在较大差别： 血小板血小板PLT：静脉血末梢血：静脉血末梢血 白细胞白细胞WBC：静脉血末梢血：静脉血末梢血 红细胞红细胞RBC：静脉血略末梢血：静脉血略末梢血 针刺采血：针刺采血： 皮肤刺破后，导致血小板形成红色血栓皮肤刺破后，导致血小板形成红色血栓 活化血小板，使血小板聚集活化血小板，使血小板聚集 同时在血管中间形成一运动迅速，成分含量高的液流同时在血管中间形成一运动迅速，成分含量高的液流 52 l1、最好一次穿刺采血成功、最好一次穿刺采血成功 l2、使用封闭式真空注射器和厂家生产的、使用封闭式真空注射器和厂家生产的 EDTA-K2抗凝管抗凝管 l3、采血后应立即、采血后应立即