从业人员健康体检沙门氏菌、志贺氏菌检测操作程序(讨论稿)

1、精品从业人员健康体检沙门氏菌、志贺氏菌检测操作程序 一、目的本程序用于对从业人员健康体检进行沙门氏菌、志贺氏菌检测等致病菌检测 的方法，以规范操作程序，保证检测数据的有效性。 二、适用范围：本方法适用于从人体粪便中沙沙门氏菌、志贺氏菌的分离、鉴定及保 存的梯相关操作。三、生物安全要求标本及相应的致病菌操作必须在 bsl-2 生物安全实验室的生物安全 柜中进行。四、试剂及仪器设备4.1 试剂采便盒、cary-blair 运送培养基、亚硒酸增菌液（sf）、改良亚硒酸盐磺绿增菌肉汤（ sbg ）、沙门志贺培养液、木糖 - 赖氨酸 - 脱氧胆酸琼脂（xld）、麦康凯琼脂、沙门显色培养基、结晶紫沙门培养

2、基（ys）、三糖铁（ tsi ）、动力- 吲哚 - 尿素培养基（ miu）、沙门氏菌属诊断血清、志贺氏菌属诊断血清、api20e 生化试剂条、磁珠菌种保存管 4.2 仪器设备恒温培养箱、微生物鉴定仪五、采样方法5.1 标本应为新鲜的或转移至 cary-blair 运送培养基的粪便或肛拭子，最优标本是转移到 cary-blair 运送培养基的粪便拭子。肛拭子可编辑精品不是最佳标本，仅在病人无粪便标本时采用。5.2 粪便标本：应采集自然排出的新鲜粪便，取稀水样、粘血样、脓血样，黏液样部分。盛于清洁、干燥、无吸水性的无菌容器，避免混 入尿液、水和其他物质。5.3 肛拭标本 ：若无法获得粪便（如排便困

3、难或婴幼儿），也可以采用肛拭子，即无菌棉拭子用生理盐水湿润后，插入肛门内 4-5cm 处儿童约 2-3cm），同一方向轻轻旋转 2-3 周。以目测能见到粪便为 准。插入 cary-blair 运送培养基。5.4 标本采集后立即送至实验室进行检测，若室温保存，不能超过1h；如不能立即送检，应放入 cary-blair 运送培养基中冷藏条件下 24 小时内送检。六、检验程序粪便标本或肛子xld 或麦康凯可疑菌落接种 tsi 和 miu生化符合者做血清凝集和系统生化反应菌株保存管保存菌株上送七、操作步骤可编辑sbg 增菌xld 或显色平板可疑菌落接种 tsi 和 miu生化符合者做血清凝集和系 统生

4、化反应精品7.1 分别标记一个 xld 平板（或 ys 平板、麦康凯平板）和 1 管9ml 改良亚硒酸盐磺绿增菌肉汤（sbg）（或sf 增菌液或沙门志贺培 养液）。7.2 用 1 个无菌拭子取少量标本（不要使拭子 粘得太多，尽量从可见血或黏液的部位收集）接种在 xld 平板的第一区，接着把拭子放入 sbg 增菌液。再灭菌接种环在 xld 平板的其余区进行划线接种。如果是 cary-blair 运送培养基的粪便拭子，则轻搅混合标本后接种 增菌液与平板。7.3 所有培养基均放入 361培养，sbg 的最佳增菌时间是1618h（建议每天下午 45 时接种标本，第二天早上 810 时用 增菌液划平板）

5、。7.4 观察平板：取培养后的平板，观察有无可疑菌落。7.4.1 xld 平板可疑菌落观察：志贺菌在 xld 平板上为粉红或无色、透明、光滑、湿润、边缘整齐、圆形菌落，直径 1-2mm，而大部分的大肠杆菌类的菌落为黄色、混浊、凸起、湿润、边缘整齐或不规则，直径 2-3mm。大多数沙门菌在 xld 平板上中心黑色的透明、 光滑、湿润、边缘整齐、圆形的菌落。（图 2）7.4.ys 平板可疑菌落观察：7.4. 麦康凯平板可疑菌落观察：志贺菌在麦康凯平板上为无色至浅粉色、半透明、光滑、湿润、边缘整齐或不规则、圆形菌落，直径 2-3mm；大多数沙门菌为无色菌落，粉红色，带或不带黑心，伤寒沙门菌为无色菌落

6、；而大部分的大肠杆菌类的菌落为粉红或红色、可编辑2精品混浊、凸起、湿润、边缘整齐或不规则，直径 3-4mm。7.4. sbg 肉汤增菌：sbg 增菌 1618 小时后，划线接种 xle平板或沙门显色平板，放入 361培养 1824h。沙门显色平板可疑菌落观察：典型的沙门菌在沙门显色平板上为紫色的菌落，直径 2-3mm。7.4.4 建议的初步筛查方案（初步生化特征见表 1）：表 沙门菌、伤寒沙门菌、志贺菌及常见肠道菌的初步生化特征大部分伤寒志 贺大 肠枸橼酸变 形沙门菌沙门菌氏 菌杆 菌杆菌杆 菌tsi（斜面）tsi（底面）k（红色） k（红色） k（红色） a（黄色） a（黄色） k（红色）a

7、（黄色） a（黄色） a（黄色） a（黄色） a（黄色） a（黄色）tsi（h s）+（黑色） 小部分- +（黑色） +（黑色）tsi（产气）+（气泡）-+（气泡） +（气泡） +（气泡）+（弥漫+（弥漫 -（沿接种+（弥漫+（弥漫+（弥漫miu（动力）生长）生长）线生长）生长）生长）生长）+（加试+（加试-（黄色-（黄色-（黄色-（黄色miu（吲哚）剂变红剂变红圆环）圆环）圆环）圆环）色）色）miu（尿素）-（黄色） -（黄色） -（黄色） -（黄色） -（黄色） +（红色）a ：粪便（或肛拭子） sbg 或 sf 增菌 xld 分离 接种 tsi 和 miu可编辑精品b ： 粪 便 （ 或

8、 肛 拭 子 ） sbg 或 sf 增 菌 ys 分 离 接种 tsi 和 miub ：粪便（或肛拭子） sbg 或 sf 增菌 xld 和麦康凯分离接种 tsi 和 miud：粪便（或肛拭子） sbg 或 sf 增菌 ys 和沙门显色分离接种 tsi 和 miue：粪便（或肛拭子） sbg 或 sf 增菌 xld 和沙门显色分离接种 tsi 和 miu7.5 生化初步鉴定每个平板挑取 35 个分离较好的单个可疑菌落，分别接种到三糖铁（tsi）和动力-吲哚-尿素培养基（miu），361培养 1824h。 沙门菌和志贺菌的生化特征见表 2。7.6 系统生化试验沙门菌和志贺菌初步鉴定阳性菌经转种营

9、养琼脂单，取单个菌落进行系统生化鉴定（可以使用 ape20e 或全自动生化鉴定系统进行）。 7.7 血清学试验7.7.1 志贺菌血清学试验7.7.1.1 挑取生化反应实筛符合志贺菌的营养琼脂斜面，首先用四种多价血清做玻片凝集反应(4 种多价包括：a 群 1、2 型；b 群和d 群)。凝集者则用 b 群多价、d 群和 a1、a2、血清分别凝集。7.7.1.2 若多价血清不凝集，可能为 c 群或 a 群的 312 型，应 进行 c 群的四种多价和 a 群另三种多价血清做玻片凝集。可编辑精品7.7.2 沙门菌血清学试验7.7.2.1 挑取生化反应实筛符合沙门菌的营养琼脂斜面，首先用 a-f 群 o

10、多价血清做玻片凝集反应。7.7.2.2 若凝集可按常见 o 因子检出频率，按照 o4o10o9 o7o8o19o2o11 顺序凝集。7.7.2.3 h 抗原凝集7.7.3 所有凝集阳性的菌落，都要同时用生理盐水做凝集试验， 只有不出现自凝时，才可以报告阳性结果。8 结果报告8.1 在初步生化鉴定符合后，可以先将可疑菌落进行革兰氏染色，最后综合生化及血清学结果，可以报告检出（或未检出）沙门菌（或 志贺菌）。8.2 对于从业人员体检结果已经纳入检验软件管理的单位，可以 直接在检验软件中录入相应结果。8.3 其他单位可以设计专门的报告格式反馈给送检单位或送检科室，检验报告中应至少包括姓名，性别，年龄，体检编号，检测结果。8.4 检测结果为阴性，可以报告为未检出肠道沙门菌和志贺菌