临床检验技士-临床免疫学和免疫检验讲义07

1、临床检验技士考试辅导临床免疫学和免疫检验第七章放射免疫分析第一节放射免疫技术、基本类型及原理（一）放射免疫分析（RIA）以放射性核素标记抗原与未标记抗原竞争结合持异性抗体,测定样品中述原量狗一种分析法。_（二）免疫放射分析（IRMA）用放射性核素标记的过量抗体与待测抗原直接结合,固相免疫吸附载体 分离结合与游离标记抗体的非竞争放射免疫分析法。二、常用的放射性核素円、“、H、叱等，使用最广泛的是“。三、放射性标记物制备及鉴定（一）原理：以放射性碘原子宜换被标记物分子中酪氨酸或酪胺残基以及组胺残基上的氢原子。蛋白 质、肽类等含有上述基团，可用【直接标记,不含上述基团的馅体激素或药物分子，须连接相应

2、基团才 能用于放射性碘标记。（二）标记及类型1. 宜接标记法：肽类、蛋白质和酶的碘化标记。常用的方法为:氯胺T （ch-T）法：乳过氧化物 酶标2. 间接标记法：也称连接标记法,是最常用的间接碘标记方法。该法主用于辎体类化合物、环核昔酸、 前列腺素等缺乏碘标记基团的小分子化合物的标记。（三）放射标记物的纯化1. 凝胶过滤法：分子筛机制。2. 离子交换层析法：游离1:5 I与标记物分子极性差异进行吸附解离。3. 聚丙烯酰胺凝胶电泳法（PAGE）：按分子所带电荷和直径不同在电场作用下分子迁移速率不同。4. 高效液相色谱法。（四）放射标记的鉴定1放射化学纯度：单位标记物中结合于被标记物上的放射性占总

3、放射性的百分率，要求95忍该参数 还是观察在贮存期内标记物脱碘程度的重要指标。2. 免疫活性：制备的标记物与抗体结合的能力。3. 比放射活性：单位化学量标记物中所含的放射性强度，即每分子被标记物平均所结合放射性原子数 目。四、方法学评价除常规的灵敏度、精密度、准确性、特异性和稳左性等指标外，还应注意以下指标：（-）可靠性：又称健全性，是评价被测物与标准品的免疫活性是否相同。借助标准曲线与样品稀释 曲线的平行性分析来判断。平行性好者可（二）剂量-反应曲线：通过已知浓度的标准品和相应的反应参数绘制成剂量-反应曲线，待测物立量 是通过计算其反应参数在剂量-反应曲线上对应的标准品浓度值而确定。（三）高

4、剂呈:钩状效应：标本中被测物浓度超过线性范用上限时,所得结果反而降低或呈阴性的现象。 可以通过选用高亲和力抗体或对此类标本进行稀莎测宦以改善或消除。第二节放射免疫分析放射免疫分析（RIA）是以放射性核素作示踪剂的标记免疫分析方法,特别适用于激素、多肽等的超微 量分析。一、基本原理经典RIA是采用标记抗原和非标记抗原竞争性结合有限量特异性抗体的反应。二、实验方法及测定（一）抗原抗体反应:将未标记抗原（标准品和待测样品）、标记抗原和特异性抗体加入反应试管中, 在一定条件（温度、时间及介质pH）下进行竞争抑制反应。先加待测样品（或标准品）和抗血清,使非标记抗原与抗体达到结合平衡，然后再加入标记抗原竞

5、争 与抗体结合。（二）分离结合与游离标记物：RIA反应平衡后，标记抗原与试剂抗体形成免疫复合物（B）。由于其 含量极少，不能自行沉淀，需加入适当的沉淀剂将艮彻底沉淀,然后经离心使其与游离的标记抗原（F）分 离。某些小分子抗原，也可采用吸附法分离B与F。理想的分离方法应分离彻底、迅速：分禽试剂和过程不影响反应平衡，而且效果不受反应介质因素的 影响：操作应简单、重复性好以及经济。方法：1. 第二抗体沉淀法：反应完成后加入二抗形成复合沉淀。为增强效果可加入一泄量的与一抗同种动物 的血淸或IgG,或是将二抗与某些颗粒固相物连接。2. 聚乙二醇（PEG）沉淀法：能非特异地沉淀抗原抗体复合物等大分壬蛋白质

6、,而不沉淀小分子抗原。 当温度髙于30C时,沉淀物易复溶。3. PR试剂法先将二抗与PEG按一左比例混合成悬液后进行试验。此法保留了二者的优点，节省了二者 的用量，且分离迅速，简便。4. 活性炭吸附法：活性炭可吸附小分子游离抗原或半抗原,而大分子蛋白（如抗体和免疫复合物）则 留在溶液中。（三）放射性测量及数据处理分离B、F后，可分别对二者进行测定。绘制标准曲线（剂量-反应曲线），样品管以其测疑或计算的反应参数，通过标准曲线即可查岀相应的 待检抗原浓度。第三节免疫放射分析免疫放射分析（IRMA）是以过量勺标记抗体与待测抗原进行非竞争性免疫结合反应,用固相免疫吸附 剂对B或F进行分离，貝灵敏度和可

7、测范围均优于RIA,操作程序较RIA简单。一、基本原理1. 单位点IRMA：利用过量标记抗体与待测抗原进行反应，形成抗原-抗体复合物,反应平衡后，再用固 相抗原结合反应液中剩余的未结合标记抗体并将其分离,测定上淸2. 双位点IRMA：先用固相抗体与抗原反应结合,然后再用过量的标记抗体与已结合于固相的抗原的另 一抗原决定簇结合，形成固相抗体-抗原-标记抗体复合物,洗弃反应液中剩余的标记抗体,测左固相上的 放射性。两种IRMA最后测得的放射性均与样品中待测抗原的含量呈正相关。二、IRMA与RIA的比较RIAIRMA标记物标记抗原（抗原不同方法不同）标记抗体（方法基本相同）反应速 率较慢抗体过量，反

8、应速率稍快反应原理竞争抑制性结合，反应参数与待检抗原量成 反比非竞争性结合，反应参数与待检抗原浓度呈 正相关特异性特异性较低双抗体，反应不易受交叉反应物干扰，特异 性较高灵敏度与有限量抗体的结合不充分，灵敏度低微量抗原可与抗体充分结合，灵敏度髙标准曲 线较窄工作范围宽12个数虽:级抗体特 点多克隆抗体，用量少亲和力要求低，用量多用途测能大分子和小分子抗原测立至少有两个抗原决圧簇的抗原第四节放射免疫分析技术的应用常用于各种激素、微量蛋白质、肿瘤标志物和药物等微量物质的测定。但具有放射污染和危害，常用放射性核素半衰期短，试剂盒有效期不长，无法自动化分析等诸多不足。 下列有关放射免疫分析的叙述中，错

9、误的是A. 以放射性核素作为标记物B. 是一种定量检测技术C. 主要用于抗原检测D. 形成的免疫复合物中的放射强度与待测抗原含量成正比E. 定量分析时需同时作标准管正确答案D答案解析放射免疫分析中免疫复介物中的放射强度与待测抗原含量呈反比。在放射免疫分析检测中，B/ (B+F)表示(注：B为结合态的标记抗原，F为游离态的标记抗原)A. 结合态的标记抗原与总的标记抗原之比B. 结合态的标记抗原与游离的标记抗原之比C. 总标记抗原与抗原抗体复合物之比D. 结合态的抗原与总抗体之比E. 结合态的抗原与总抗原之比正确答案A答案解析放射免疫分析法(RIA)测左方法分三个步骤：待测标本中未标记抗原，标记抗

10、原和抗 体进行竞争抑制反应。将标记抗原和抗体相结合的复合物(B)和未结合的标记抗原(F)的分离。对B进行放射性强度的测左。根据标准曲线查得待测抗原浓度。由上可知，B/ (B+F)意义是结合态 的标记抗原与总的标记抗原之比。在RIA反应系统中，参与反应的有标记抗原、已知抗体和待测抗原，对这三种成分的要求是A. 只需固定标记抗原量B. 待测抗原要先标记C. 标记抗原和已知抗体的量都是固泄量的D. 只需要固定已知抗体的量E. 三者的量均需固泄正确答案C答案解析在RIA反应系统中，标记抗原和已知抗体的疑都是固左量的，待测抗原和标记抗原竞争结合已知抗体，待测抗原的量和标记抗原的量成反比。临床上通常不利用放射免疫分析技术检测的是A. 微量蛋白质B. 激素C. 小分子药物D. 肿瘤标记物E. 免疫球蛋白正确答案E答案解析放射免疫分析技术常用于各种激素、微量蛋白质、肿瘤标志物和药物等微量物质的测宦。临床上放射免疫分析最常用的放射性核素是A. 1：51B. 1S1IC. D. 1SCE. 51Gr正确答案A答案解析常用的放射性核素: m H、等，使用最广泛的是倔!丄用RIA检测某种激素时，结合物中的放射性强度越大，表明A. 该激素在血淸中的含虽