试验叶绿素含量的测定

1、深圳大学实验报告课程名称：植物学生理实验实验项目名称：五、叶绿素含量的测定学院：生命科学专业：生物科学指导教师：邹永东报告人 : 张嘉慧学号： 2010300077 班级：3实验时间：2012 年 4 月 12 日实验报告提交时间：2011年 4月 19 日教务处制一、实验目的：1、熟悉使用分光光度计。2、学会如何测定叶绿素的含量。二、实验原理：叶绿素不溶于水，溶于有机溶剂，可用多种有机溶剂，如丙酮、乙醇或 二甲基亚砜等研磨提取或浸泡提取。叶绿色素在特定提取溶液中对特定波长 的光有最大吸收，用分光光度计测定在该波长下叶绿素溶液的吸光度（也称为光密度 ），再根据叶绿素在该波的不同 ,测定各特定峰

2、值波长下的光密度 ,再根据 色素分子在长下的吸收系数即可计算叶绿素含量。根据比尔定律 ,利用叶绿素 a和 b吸收光谱该波长下的消光系数 ,计算出浓 度. 叶绿素 a的80%丙酮提取液的最大吸收峰为 663nm,叶绿素 b的吸收峰为 645nm.这样,叶绿素 a和 b在两种波长下浓度与光密度的关系可用下式表示： D663= 82.04 Ca + 9.27 CbD645= 16.75 Ca + 45.60 Cb （单位 :毫克/升）解得:CA = 12.7 D663 - 2.69 D645CB = 22.9 D645 - 4.68 D663CT = CA + CB = 20.2 D645 + 8.

3、02 D663CK = 4.7D440 0.27 C a+b式中: CA、 CB分别为叶绿素 a和 b的浓度, CT 为叶绿素总浓度， CK为类胡萝卜素浓度 . 式中单位 :毫克 /升三、实验设备与材料： 天平、研钵、烧杯、量筒、滤纸、表面皿、剪刀、 90-95%乙醇、漏斗、滴管 新鲜菠菜叶、层析液配方：石油醚 :乙醚： 4：1（V/V）四、实验步骤 ：1、叶绿体色素的提取及叶绿体色素的含量测定：取菠菜（或其他植物）叶子 2g，剪碎，放在研钵中，加石英砂和碳酸钙少 许， 80丙酮约 2-3ml，研磨成匀浆，再加 80丙酮定容至 25ml，用漏斗过 滤，即为色素提取液。叶片洗净、吸干、去大叶脉称

4、 1g 叶用丙酮研磨匀浆过滤（用 80%丙酮洗研钵及残渣，合并滤液）滤液用 80%丙酮定容至 25mL适当稀释后测 A 645、A 663、 A 652 、 A4402、叶绿体色素的分离：（1）点样。取前端剪成三角形的滤纸条，用毛细管取叶绿素提取液。点样后 晾干，再重复操作数次。（2）分离。在烧杯中加入推动剂，然后将滤纸插入试管中，使尖端浸入溶剂 内(点样原点要高于液面，滤纸条边缘不可碰到试管壁) 。(3) 当推动剂前沿接近滤纸边缘时，取出滤纸，风干，观察色带的分布。五、实验现象：测得： D440=1.85 D645=0.301 D663=0.688六、分析与讨论：CA=12.7D663-2.

5、69D645=12.7*0.688-2.69*0.301=8.7376-0.80969=7.92791CB=22.9D645-4.67D663=22.9*0.301-4.68*0.688=6.8929-3.21984=3.67306 CT=CA+CB=20.2D645+8.02D663=20.2*0.301+8.02*0.688=6.0802+5.51776=11.59 796CK = 4.7D440 0.27 C a+b=4.7*1.85-0.27*11.59796=8.695-3.131=5.564CT+Ck=11.59796+5.564=17.162色素在叶片中的含量 (%)= 色素浓度

6、 ( mg /l ) 提取液总体积 (L) 稀释倍数 重量 (g) 1000=17.162*0.025*3/(2*1000)=0.064%七、实验结论：1、叶绿素 a的浓度为 7.928 mg/l。2、叶绿素 b 的浓度为 3.673 mg/l。3、叶绿素总量为 11.598 mg/l。4、类胡萝卜素的浓度为 5.564 mg/l 5、色素在叶片中的含量为 0.064%。6、色素带上蓝绿色为叶绿素 a，黄绿色为叶绿素 b，黄色为叶黄素，橙黄色 为胡萝卜素。八、思考题：1、为什么植物在不同生长环境下其 Chl 含量有差异？ Chla /Chlb 有何适应 意义？ 答：不同的生境下营养元素是有差异的，会影响叶绿素的含量。 Chl 含量受自 然环境的影响， Gs、