项目六 香菇多糖的生产

1、项目六 香菇多糖的生产A背景药理作用 具有免疫增强作用，其机制在体内虽无直接杀伤肿瘤细胞作用，但可通过增强机体的免疫功能而发挥抗肿瘤活性。在体内能使脾脏和腹腔的NK细胞活性增强，诱生干扰素与本品剂量相关，其活性与白细胞介素类或干扰素诱导剂有协同作用。另有证明，在体外本品可增强脱氧胸腺嘧啶核苷的抗艾滋病毒的活性。适应症1.抗肿瘤与放疗、化疗、手术配合，主要用于不宜手术或复发的胃肠道肿瘤。本品加放疗、化疗治疗小细胞肺癌、乳癌、恶性淋巴瘤等。也可用于癌性胸腹水的治疗。2.抗病毒可用于乙型肝炎及艾滋病等。3.抗感染应用于具有抗药性的肺结核，也用于治疗老年性慢性支气管炎。成分功能 香菇多糖是从优质香菇子

2、实体中提取的有效活性成分，香菇多糖中的活性成分是具有分支的 (13)D葡聚糖，主链由(13)连接的葡萄糖基组成，沿主链随机分布着由(16)连接的葡萄糖基，呈梳状结构。研究表明香菇的活性多糖成分(13)D 葡聚糖对抑制异源的、同源的、甚至是遗传性的肿瘤都有效。生物活性1.香菇多糖的抗肿瘤活性2.香菇多糖的免疫调节3.香菇多糖的抗病毒活性4.香菇多糖抗感染作用B实验实验原理1.本实验主要采用传统的热水浸提法。中性多糖常用水作溶剂来提取，可以用水浸煮2.香菇中色素较高，活性炭有脱色素、脱去异味 等作用。3.香菇多糖在氯仿中溶解度大于在热水中的溶解 度，所以可以用氯仿对香菇多糖进行萃取。4.乙醇沉淀法

3、提取多糖时，乙醇的浓度及提取方式对多糖的得率影响较大。最有效的方法是向多糖溶液中加入乙醇， 使乙醇的最终浓度依次达到40%、60%、70%、80%，离心每次沉淀，乙醇沉淀得到的不一定是纯的多糖，还需用凝胶柱色谱进行分离纯化。5.用苯酚硫酸法显棕色，可以对多糖进行 定性检测。6.香菇子实体有含量较多的脂类的物质，可以用石油 醚、乙醚等低级性溶剂除去脂溶性杂质。7.因为香菇肉质太厚，萃取时氯仿很难渗透至其深处， 则萃取物的产率低。热水提取法多糖在260nm和280nm 波长处有较明显的吸收峰实验器材 组织捣碎机、恒温水浴锅、循环水式真空泵、冷冻离心 机、凝胶柱、脱脂棉、再字夹、紫外分光光度计、容量

4、瓶、 试管、烧杯,紫外检测仪、记录仪、流量泵、试剂氯仿、无水乙醇、丙酮、乙醚、苯酚-硫酸试剂：苯酚3g,浓硫酸5mL，溶于95mL无水乙醇中。操作步骤1.热水浸提：称取香菇10g,于组织捣碎机内粉碎，倒入 烧杯中，加20倍量的水，将烧杯放入恒温水浴锅中90）加热30min,然后用布氏漏斗和真空泵进行抽滤，取滤液。 2. 脱色，除味：在滤液中加入活性炭（1mg/ml），搅 拌吸附1h，抽滤，取滤液。3.萃取、除杂蛋白：在滤液中加入氯仿溶液，充 分混合后，过滤，取滤液。重复萃取、除杂3次。 4. 乙醇沉淀：在萃取液中加入无水乙醇， 使其乙醇浓度达80%，沉淀12h,于冷冻离心机（ 4000/min

5、）离心30min，取沉淀 5.脱脂：沉淀物分别用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤3次，即得香菇多糖提取物。多糖纯化 取上述香菇多糖提取物溶于蒸馏水中，离心除去不溶物。 按照项目三SephadexG50凝胶装好柱，用蒸馏水平衡48h Content design, 10 years experience （控制好流速：4滴/min），然后将上清液上柱分离，用蒸馏水洗脱，洗脱速度5ml/min（可用恒流泵控制洗脱速 度）,200nm波长紫外检测，收集主要峰部分（当记录仪上 出现波峰时即用试管开始收集洗脱液），冷冻干燥得白色香菇多糖，并称重。香菇多糖分析检测定性检测苯酚-硫酸法 将苯酚-硫酸试剂喷洒在冷冻干

6、燥好的白 色香菇多糖上110，加热香菇多糖几分钟，显棕色即为多糖。定量检测-分光光度法a.标准曲线的制备 精密称取(可用分析天平）60干燥至恒重的甘露糖标准品0.1g，置于100ml的容量瓶中，加蒸馏水定容至刻度处。 Content design, 10 years experience 用移液管量取对照品溶液0、0.5、1.0、2.0、2.5、3.0ml.分 别置50ml容量瓶中，加蒸馏水定容在各精密吸取1ml，置于带塞试管中，准确移取8%苯酚溶液1ml，快速加入浓硫酸5ml置于水浴锅中加热15min,取出冷却至室温，橘黄色由浓度从小到大而逐渐加深，将溶液于490nm波长的分光光度计处测定吸收度，绘制标准曲线。.b.样品多糖的测定精密称取香菇多糖10.0mg,加水溶解，定量转移入100ml容量瓶中，加水定容，均摇。准确