朱洁 激素对血糖的影响研究生

1、 实验原理实验原理 v 升糖激素与降糖激素的作用相互对抗又彼此升糖激素与降糖激素的作用相互对抗又彼此 协调，共同维持着血糖浓度的恒定。协调，共同维持着血糖浓度的恒定。 血血 糖糖 肾上腺素肾上腺素 胰岛素胰岛素 v本实验通过分别给大鼠注射肾上腺素和胰岛本实验通过分别给大鼠注射肾上腺素和胰岛 素，作用一段时间后再分别采血，对比注射素，作用一段时间后再分别采血，对比注射 前后血糖浓度的变化，观察激素对血糖浓度前后血糖浓度的变化，观察激素对血糖浓度 的影响。的影响。 v本实验用葡萄糖氧化酶法测定血糖含量。本实验用葡萄糖氧化酶法测定血糖含量。 葡萄糖葡萄糖+ O+ O2 2 + H + H2 2O O

2、 葡萄糖酸葡萄糖酸+H+H2 2O O2 2 葡萄糖氧化酶葡萄糖氧化酶 2H2H2 2O O2 2 + 4-AAP + + 4-AAP + 酚酚 红色醌类化合物红色醌类化合物 过氧化物酶过氧化物酶 v其呈色深浅有葡萄糖含量成正比，在其呈色深浅有葡萄糖含量成正比，在505nm505nm处处 与同样处理的葡萄糖标准液进行比色，计算葡与同样处理的葡萄糖标准液进行比色，计算葡 萄糖含量。萄糖含量。 实验原理实验原理 v1 1、胰岛素注射液、胰岛素注射液 v2 2、肾上腺素注射液、肾上腺素注射液 v3 3、葡萄糖测定试剂盒（、葡萄糖测定试剂盒（葡萄糖氧化酶葡萄糖氧化酶过氧化物酶过氧化物酶 法）法） v4

3、 4、吸管、分光光度计、电热恒温水浴箱、碘酒棉球、吸管、分光光度计、电热恒温水浴箱、碘酒棉球、 酒精棉球、注射器等。酒精棉球、注射器等。 v 5 5、麻醉剂：乌拉坦：按大鼠、麻醉剂：乌拉坦：按大鼠 0.5ml/100g0.5ml/100g。 实验试剂与器材实验试剂与器材 （一）动物准备及取血一）动物准备及取血 v1 1、动物准备及空腹采血、动物准备及空腹采血 取禁食取禁食1616小时大鼠一只，过磅称重，小时大鼠一只，过磅称重，并记录体重并记录体重。 v2 2、取血并测定注射激素前血糖水平、取血并测定注射激素前血糖水平 大鼠大鼠断尾取血断尾取血，用，用血糖仪血糖仪测定血糖浓度（空腹血糖浓测定血糖

4、浓度（空腹血糖浓 度）并记录度）并记录“胰前胰前”或或“肾前肾前”。 v3 3、注射激素、注射激素 按按0.5ml/100g0.5ml/100g腹腔注射胰岛素或肾上腺素。记录注腹腔注射胰岛素或肾上腺素。记录注 药时间。药时间。 实验步骤实验步骤 v4 4、注射胰岛素或注射肾上、注射胰岛素或注射肾上 腺素腺素2020分钟后，腹腔注射分钟后，腹腔注射 乌拉坦乌拉坦 0.5ml/100g0.5ml/100g，麻醉麻醉， 腹主动脉腹主动脉取血取血，标以，标以“胰胰 后后”或或“肾后肾后” ” 。 v5 5、将收集的血液置离心机运转、将收集的血液置离心机运转5 5分钟分钟(3000/min.r)(300

5、0/min.r)， 分离出血浆，制备样本管。分离出血浆，制备样本管。 大鼠，禁食大鼠，禁食16小时，小时， 称重并记录称重并记录 腹腔注射肾上腺腹腔注射肾上腺 素素0.3ml/100g ， 记时记时20分钟分钟 断尾取血断尾取血，用血糖仪测定，用血糖仪测定 大鼠注射激素前血糖水平，大鼠注射激素前血糖水平， 并记录胰前或肾前并记录胰前或肾前 腹腔注射腹腔注射胰岛素胰岛素 0.3ml/100g ，计，计 时时20分钟分钟 按按 0.5ml/100g， 皮下注射乌拉坦，皮下注射乌拉坦， 麻醉麻醉 将麻醉后大鼠捆绑将麻醉后大鼠捆绑 于解剖台上固定于解剖台上固定 将收集血液置离心机运转将收集血液置离心机

6、运转 5分钟分钟(3000/min转转)，分，分 离出血浆，制备样本管。离出血浆，制备样本管。 腹腔解剖，暴露腹主动腹腔解剖，暴露腹主动 脉，抗凝负压管脉，抗凝负压管取血取血， 轻轻振荡，静置轻轻振荡，静置 葡萄糖氧化酶法试剂盒，葡萄糖氧化酶法试剂盒， 分别测定血糖含量，并记分别测定血糖含量，并记 录录“胰后胰后”或或“肾后肾后” 比较大鼠比较大鼠“胰前胰前”或或 “胰胰 后后”血糖的差异以及血糖的差异以及“肾前肾前” 与与“肾后肾后”血糖的差异血糖的差异 （二）血糖含量的测定（二）血糖含量的测定 样本管样本管空白管空白管 血清血清10ul 蒸馏水蒸馏水10ul 酶试剂酶试剂1ml1ml v置

7、置37水浴水浴5分钟，用波长分钟，用波长505nm、比色杯光径、比色杯光径 1.0cm，用空白管调，用空白管调“零零”点测定各管的吸光度点测定各管的吸光度 （A）。）。 v结果处理计算：结果处理计算： 样本管吸光度（样本管吸光度（A） 葡萄糖（葡萄糖（mmol/L）标准液浓度（标准液浓度（5.55） 标准管吸光度标准管吸光度（A）（）（0.24） v比较激素对血糖影响的百分数。比较激素对血糖影响的百分数。 v本实验要求男女搭配本实验要求男女搭配,操作大鼠时要耐心大胆操作大鼠时要耐心大胆,特别特别 注意不能放走大鼠注意不能放走大鼠. v大鼠注射激素后要放回大鼠笼大鼠注射激素后要放回大鼠笼! v打

8、开腹腔时不要用厚的劳保手套打开腹腔时不要用厚的劳保手套!换戴一次性手套换戴一次性手套. v实验结束后统一收集大鼠尸体实验结束后统一收集大鼠尸体,仔细清理实验台面仔细清理实验台面, 不要留有血迹不要留有血迹! 实验步骤实验步骤 讨论思考 v1 1、比较注射激素前、后血糖浓度的变化，这些变化说、比较注射激素前、后血糖浓度的变化，这些变化说 明什么？明什么？ v2 2、血糖主要有哪些代谢来源与去路？升糖激素和降糖、血糖主要有哪些代谢来源与去路？升糖激素和降糖 激素的作用机制是什么？激素的作用机制是什么？ v3 3、葡萄糖氧化酶、葡萄糖氧化酶过氧化物酶法测定血糖的基本原理过氧化物酶法测定血糖的基本原理

9、 是什么是什么? ? v4 4、血糖浓度测定有何临床意义？、血糖浓度测定有何临床意义？ v本实验用葡萄糖氧化酶法测定血糖含量。本实验用葡萄糖氧化酶法测定血糖含量。 葡萄糖葡萄糖+ O+ O2 2 + H + H2 2O O 葡萄糖酸葡萄糖酸+H+H2 2O O2 2 葡萄糖氧化酶葡萄糖氧化酶 2H2H2 2O O2 2 + 4-AAP + + 4-AAP + 酚酚 红色醌类化合物红色醌类化合物 过氧化物酶过氧化物酶 v其呈色深浅有葡萄糖含量成正比，在其呈色深浅有葡萄糖含量成正比，在505nm505nm处处 与同样处理的葡萄糖标准液进行比色，计算葡与同样处理的葡萄糖标准液进行比色，计算葡 萄糖含量。萄糖含量。 实验原理实验原理 v置置37水浴水浴5分钟，用波长分钟，用波长505nm、比色杯光径、比色杯光径 1.0cm，用空白管调，用空白管调“零零”点测定各管的吸光度点测定各管的吸光度 （A）。）。 v结果处理计算：结果处理计算： 样本管吸光度（样本管吸光度（A） 葡萄糖（葡萄糖（mmol/L）标准液浓度（标准液浓度（5.55） 标准管吸光度标准管吸光度（A）（）（0.24） v比较激素对血糖影响的百分数。比较激素对血糖影响的百分数。 v本实验要求男女搭配本实验要求男女搭配,操作大鼠时要耐心大胆操作大鼠时要耐心大胆,特别特别 注意不能放