检验与临床POCT实验室应用

1、检验与临床 检验及产品 上海同仁医院检验科 袁维祥主任 检验一般了解 1检验科方法简单了解 2PCT 3CRP 4心脏标准物 5总结 检验科和实验室区别检验科和实验室区别 检验科检验科 ： 常规工作常规工作 量大量大 临床要求临床要求 快快 临床检验工作最基本要求临床检验工作最基本要求 及时及时 方便方便 准确准确 临床检验人员对仪器及试剂要求临床检验人员对仪器及试剂要求 管用管用 好用好用 实用实用 实验室：特殊项目实验室：特殊项目 科研为主科研为主 量少量少 检验项目：形态学检验项目：形态学 定性和定量定性和定量 检验报告形式 一浓度分析 1定性 2定量 二形态报告 1细胞 2细菌 3管型

2、 一按反应原理分类（定量）一按反应原理分类（定量） 1 用化学试剂测定方法叫化学法。如蛋白用化学试剂测定方法叫化学法。如蛋白 钙钙 镁镁 2 用酶测定方法叫酶法。如葡萄糖用酶测定方法叫酶法。如葡萄糖 谷丙转氨酶谷丙转氨酶 3用抗原抗体反应原理方法叫免疫法。用抗原抗体反应原理方法叫免疫法。HBsAg 4用原子吸收方法叫色谱法。钾用原子吸收方法叫色谱法。钾 钠钠 5用电泳分离方法叫电泳法。蛋白电泳用电泳分离方法叫电泳法。蛋白电泳 高压液相色谱高压液相色谱 6测定蛋白分子用酶联聚合反应即测定蛋白分子用酶联聚合反应即PCR方法。方法。DNA 7生物传感器。血气生物传感器。血气 血糖血糖 二按方法敏感性

3、分类二按方法敏感性分类 1 超微量法超微量法 微克以下微克以下 皮克皮克 纳克纳克 一般用一般用 免疫发光法免疫发光法 激素激素 肿瘤标志物肿瘤标志物 2 微量法微量法 毫克以下毫克以下 微克微克 一般用金标一般用金标 法或胶乳法散射法法或胶乳法散射法 RF CRP 3 常量法常量法 克以下克以下 毫克毫克 一般用生化一般用生化 法法 白蛋白白蛋白 甘油三脂甘油三脂 根据反应产物特性分 1比色 常用生化测定 2比浊 抗原抗体测定 3散射 可标记乳胶 4测定光强度 往往标记 主要反应方式 1液体反应 生化 免疫等成本低 线性宽 灵敏度高 2干式反应 干生化 免疫层析 渗滤法 相 对灵敏度低 线性

4、窄 成本高 往往单人份 包装 标记技术分类标记技术分类 1 放射物质标记放射物质标记 2 荧光物质标记荧光物质标记 3 酶物质标记酶物质标记 4 金标记（铁金标记（铁 铜铜 硒）硒） 5 发光物标记发光物标记 测定方法 1决定性方法 2参考方法 3常规方法 123的过程叫正确度传递 321的过程叫溯源 超微量分析（化学发光） 目前按方法形式分类目前按方法形式分类 1 板式发光（包被在板上）板式发光（包被在板上） 须洗涤和分须洗涤和分 离离 反应手续多反应手续多 反应反应 慢慢 2均相发光均相发光 分洗涤和无洗涤二种分洗涤和无洗涤二种 简单简单 和反应快和反应快 发光按反应方式：发光按反应方式：

5、 干式反应和湿反应干式反应和湿反应 仪器分：仪器分： 全自动全自动 半自动半自动 化学发光发光 免疫化学发光分：免疫化学发光分： 1 酶底物发光（硷性磷酸酶）贝克曼酶底物发光（硷性磷酸酶）贝克曼 2 直接发光（丫叮脂）直接发光（丫叮脂） 西门子西门子 3电发光（钌）电发光（钌） 罗氏罗氏 4时间分辨荧光（铕）时间分辨荧光（铕） 德普德普 5微粒荧光微粒荧光 透景透景 6无须分离直接发光无须分离直接发光 博阳博阳 方法学要求 1精密度 批内 批间 变异系数CV 表示 2正确度 和目前公认结果比较 偏差 5 3稳定性好 4反应快 5抗干扰能力强 分析仪器按反应状态分类分析仪器按反应状态分类 1 干

6、式反应干式反应 万孚飞测万孚飞测 金标定量金标定量 2 湿式反应湿式反应 生化仪生化仪 发光仪发光仪 四四 按反应方便程度分类按反应方便程度分类 1 手工法手工法 2 半自动半自动 3 全自动全自动 仪器要求 1精密度好 CV38C 或90次/每分 3呼吸频率20次/每分 4白细胞12000/uL或4000/uL SIRS主要由微生物感染所引起，其他非感 染如严重缺氧，烧伤、急性胰腺炎等也可 以造成。 炎症诊断试验 1，体温测量 2，白细胞计数和分类 3，血沉 4，血清蛋白电泳 5，CRP 6， IL-6 IL-8 PCT在脓毒血症应用 1， 区分是否细菌感染，越高感染病情越重 2，肺炎中应用

7、 鉴别细菌性和病毒性 3，全身性真菌感染应用 4， 脑膜炎鉴别中应用 5，新生儿感染中应用 PCT监控具有高度感染的患者应用 1，重危患者 2，大手术后 3，器官移植 PCT在疗效观察中应用 1，脓毒症 2，多器官衰竭 3，休克 4，感染后手术治疗 CRP 1肝脏合成，结构五聚体 是一种急性时相反 应蛋白。 2特点：本地很低，当受到刺激时（一般6小 时）迅速升高可达1000倍。 3临床应用普遍。 CRP与PCT的应用比较 CRP:炎症过程的筛选 6小时后上升2天达高峰 CRP高提示病变存在。 PCT：诊断和监测细菌性疾病感染一个参数 是严重细菌性和真菌感染特异性标志。也是脓毒 症和炎症活动有关

8、多脏器衰竭的可靠指标。患者 好转PCT比CRP反应快，而CRP有较长时间才下 降。 CRP和PCT的比较 相同：都是急性时相反应蛋白 CRP是临床运用特点是炎症指标，在感染性 炎症和非感染性炎症，组织损伤、局部和 全身的轻度 中度 重度的感染和各种轻 中度损伤中应用。 PCT运用在严重细菌感染及脓毒血症 CRP和PCT的比较 PCT指标在细菌感染方面相对特异 CRP指标相对特异性差 在病毒感染中PCT不升高，CRP会轻中度升高， 在细菌感染中CRP呈现一般中度以上升高，持续时 间长，PCT只有在严重细菌感染时才会升高，治 疗好转就下降。 检测项目主要临床意义 临床意义：共性有二点 1，诊断和鉴

9、别诊断 2，疗效观察 PCT临床意义 PCT作为急性时相反应蛋白（APR)一 种，一般认为在持续毒素刺激下，68小 时开始升高 CRP临床意义 1主要用于各种损伤、感染、治疗等观察。 2超敏CRP主要用于心血管疾病。 BNP 主要用于慢性心衰的评估 肌钙蛋白 主要用于心肌损伤及梗死 PCT临床意义总结 PCT只有在严重细菌、真菌、寄生虫感染及 脓毒症和多脏器功能衰竭时测定才有意义。 在自身免疫、过敏和病毒感染时不升高。 因此PCT在细菌性疾病鉴别、监控细菌性感 染及病程预后估计等方面有意义。 检验科发展方向 临床检验发展基本要求：围绕临床检验发展基本要求：围绕 及时及时 方便方便 准确方针准确

10、方针 1 整个检验科全自动整个检验科全自动 2 POCT（即时检验）（即时检验） 3系统化系统化 优点优点 溯源性溯源性 不准确度不准确度 4 信息化信息化 提高内涵、把握方向、持续进步提高内涵、把握方向、持续进步 1做企业或公司：诱惑多做企业或公司：诱惑多 最重要不是选择而是放最重要不是选择而是放 弃弃 得到空间更大得到空间更大 坚信基本判断坚信基本判断 项目项目 找对找对 成功一大半成功一大半 2生存法则：守住底线、创造空间生存法则：守住底线、创造空间 3确定方向：想做什么？能做什么？确定方向：想做什么？能做什么？ 4市场要什么：不是你有我有。而是排他性即唯市场要什么：不是你有我有。而是排

11、他性即唯 一性一性 5社会需要什么：可靠、放心、方便、环保社会需要什么：可靠、放心、方便、环保 最好创造新产业最好创造新产业 目前市场上哪些品牌可以真正实现一步法加样？ PCT/心标等：明德、乐普、基蛋（金标半定量） CRP：迪倍思（金标半定量，加样后需补加缓冲液），其他品牌 均需要加样前稀释/预处理 国赛CRP-散射比 浊法 操作步骤： 禾柏CRP-散射比 浊法 艾克美CRP-荧光 免疫法 奥普CRP-金标法 凯创CRP-金标法 热景CRP-上转发光法 检验科需要项目和方法 检测简单方便 检测快速，成本低， 高的特异性和敏感性 能够反映疾病的严重程度 早期准确诊断 反映预后和治疗的疗效 全自动 信息化 荧光免疫法 干式(POCT) 国内代表万孚 特点：专一激发光及双抗体保证高特 异性；信号级联放大保证高灵敏度 p光路特异（专一激发光和吸收光），吸 收光背景干净，光信号特异性高 p荧光微球共价标记：偶联效率高，级联 放大荧光信号，灵敏度高，量程大 p夹心法：免疫反应特异性较高 常见免疫学检测方法 方法学/免疫学 标记物 检测方法 代表厂家 举例 POC T 荧光 定量 荧光免疫 层析 双抗体夹 心法 异硫氰 酸荧光 素 荧光强度 万孚、艾 克美 时间分辨 免疫层析 双抗体夹 心法 镧