胸膜肺炎放线杆菌的分离鉴定与药物敏感性的检测

1、胸膜肺炎放线杆菌的分离鉴定胸膜肺炎放线杆菌的分离鉴定 与药物敏感性检测与药物敏感性检测 报告人：邵健 QQ：644636862 2012.10.19 报告内容报告内容 胸膜肺炎放线杆菌简介 分离细菌的猪场背景 分离APP的鉴定 药物敏感性的检测 防治方案的确定 猪 胸 膜 肺 炎 放 线 杆 菌 ( A c t i n o b a c i l l u s p l e u r o - pneumoniae,APP)为革兰氏阴性球杆菌，有荚膜，大多溶血， APP有两个生物型，生物型是烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD) 依赖性细菌，有13个血清型，是主要的致病血清型(Barbara， 2008)。 该病

2、主要以急性出血和慢性的纤维素性坏死性胸膜炎病 变为主要特征，主要侵害25月龄、体重3060 kg的猪,且具 高度传染性，常呈急性或最急性经过，发病率、死亡率均在 50%以上（冯学平，1987；任光澄，1981） 一一 胸膜胸膜肺炎放线杆菌简介肺炎放线杆菌简介 分离细菌的猪场背景 湖南XX猪场3月龄左右的猪发病并出现大量死亡。临床 主要表现为体温升高,呼吸困难，迅速死亡，死亡时口鼻流 出少量的泡沫状血性液体。剖检可见病猪肺呈紫红色肝变， 肺炎区表面有纤维素性附着物，胸膜增厚，表现为明显的胸 膜炎病理变化。 今年三月份该猪场也发生过猪胸膜肺炎，采用疫苗控 制收效甚微，后采用抗生素预防加治疗才有所改

3、善，在10月 份保育猪再次大量发病胸膜肺炎。 二二 分离分离细菌的猪场背景细菌的猪场背景 发病猪肺充血、出血呈紫红 色 发病稍慢的表现为严重的 纤维素性胸膜炎，在肺脏 表面有黄白色的纤维素性 渗出物 发病猪肺脏的病理变化发病猪肺脏的病理变化 （刁有祥，猪胸膜肺炎放线杆菌 分子流行病学研究，2005） 组织 细菌胸膜肺炎放线杆菌链球菌 肺1 - -+ + 肺2 + +- - 肺3 + +- - 肺4 + +- - 心血1 - -+ + 心血2 - - - 送检病原菌分离情况送检病原菌分离情况 表一 送检病原菌分离统计表 菌落形态的观察 三三 胸膜肺炎放线杆菌的鉴定胸膜肺炎放线杆菌的鉴定 分离菌在

4、TSA.V.S培养基上均为边缘整齐、圆形、表面 稍隆起、半透明湿润、针尖至中等大小的菌落 细菌 培养基 CS1016F2- APP CS1016F3- APP CS1016F4- APP CS1016F1-SS TSA.V.S + 血琼脂 + SS琼脂 APPAPP在不同培养基上的生长情况在不同培养基上的生长情况 表二 分离得到细菌在不同培养基上的生长情况 分离培养物经涂片、染色、镜检，均能见革兰氏 阴性，单在、成双或链状的球菌或球杆菌 革兰氏染色镜检革兰氏染色镜检 糖 菌株CS1016F2-APPCS1016F3-APPCS1016F4-APP 棉子糖 木糖+ + + + 甘露醇+ + +

5、+ 鼠李糖 麦芽糖+ + + 阿拉伯糖 乳糖 山梨醇 -半乳糖苷+ + + + 蔗糖+ + + + 生化生化鉴定鉴定结果结果 注：代表阴性；+代表阳性；代表反映不明显 表三 生化鉴定结果统计表 PCR鉴定鉴定 M 1 2 3 4 5 M为Trans DNA Marker 1为链球菌； 2、3、4 150bp 条带为胸膜肺 炎放线杆菌； 5为H2O对照 200 100 图一 PCR特异性检测 细菌名称： APP 菌株编号：CS1016F2-APP 药敏试纸抑菌圈（mm）敏感性药敏试纸抑菌圈（mm） 敏感性 头孢噻肟 26S 先锋霉素V 24S 阿莫西林 26S 青霉素 20R 复方新诺明 18S

6、 氨苄西林 24S 阿奇霉素 26S 链霉素 10R 阿米卡星 24S 庆大霉素 14I 多粘菌素B 10I 氟苯尼考 10R 四环素 14R 强力霉素 14I 卡那霉素 14I 痢特灵 16I 萘啶酸 24S 壮观霉素 14R 新霉素 12R 四四 药物敏感性的检测药物敏感性的检测 表四 CS1016F2-APP药物敏感性统计表 细菌名称：APP 菌株编号：CS1016F3-APP 药敏试纸抑菌圈（mm）敏感性药敏试纸抑菌圈（mm）敏感性 头孢噻肟 28S 先锋霉素V 26S 阿莫西林 28S 青霉素 34S 复方新诺明 18S 氨苄西林 30S 阿奇霉素 20S 链霉素 12I 阿米卡星

7、26S 庆大霉素 13I 多粘菌素B 10I 氟苯尼考 12R 四环素 14R 强力霉素 14I 卡那霉素 14I 痢特灵 16I 萘啶酸 26S 壮观霉素 16I 新霉素 12R 表五 CS1016F3-APP药物敏感性统计表 细菌名称：APP 菌株编号：CS1016F4-APP 药敏试纸抑菌圈（mm）敏感性药敏试纸抑菌圈（mm） 敏感性 头孢噻肟28S先锋霉素V28S 阿莫西林28S青霉素22R 复方新诺明20S氨苄西林28S 阿奇霉素20S链霉素14I 阿米卡星28S庆大霉素15S 多粘菌素B12S氟苯尼考11R 四环素12R强力霉素14I 卡那霉素16I痢特灵16I 萘啶酸22S壮观霉素17I 新霉素12R 表六 CS1016F4-APP药物敏感性统计表 药敏试验结果表明，头孢类药物、氨基糖甙类药物可作 为治疗本场猪传染性胸膜肺炎的首选药物。若猪采食和饮水 正常,可采取注射与口服同时给药。应注意交替用药，按疗 程投药，这样才能收到较好的治疗效果。同时注意猪场内的 消毒与卫生。 考虑到本场之前大规模发病时采取各种预防措施收效 甚微，后来通过抗生素才得以控制，而且分离株对比较多的 药物敏感，本次发病依然可以采用抗生素解决，选择药敏试 验敏感菌株。 五五 防治方案的确定防治方案的确定 各年龄猪均可感染猪胸膜肺炎放线杆菌，3月龄猪最易 感。本病多发于每年的4-5月或9-11月