第09章 维生素类药物的分析-3-2012

1、药物分析学（第十四章） 维生素类药物的分析（维生素类药物的分析（3） 本节教师：本节教师： 韩海韩海 （博士（博士/副教授副教授 ) 暨南大学药学院暨南大学药学院 Tel:E-mail: QQ: 56011856 2013.11.06 维生素维生素D 的分析的分析 n维生素维生素D简介简介 n维生素维生素D为类甾醇衍生物，具有抗佝偻病为类甾醇衍生物，具有抗佝偻病 作用。作用。VD家族中最重要的是麦角骨化醇家族中最重要的是麦角骨化醇 （VD2）和胆骨化醇）和胆骨化醇(VD3)。 其主要生理功能是促进钙磷其主要生理功能是促进钙磷 的吸收，有利于新的吸收，有利于新骨的生成骨

2、的生成 与钙化。主要存在于肝、奶、与钙化。主要存在于肝、奶、 蛋黄中。蛋黄中。儿童缺乏儿童缺乏VD患佝患佝 偻病成人缺乏偻病成人缺乏VD患骨质疏患骨质疏 松病。松病。 HO -2H HOB UV HO HO B UV HO 胆甾醇7-脱氢胆甾醇 维生素 D3 维生素 D2 麦角甾醇 甾醇衍生物甾醇衍生物 HO H CH2 H H H H H H CH3 CH3 CH3 CH3 CH3 HO H CH2 H H H H H CH3 CH3 CH3 CH3 结构及性质结构及性质 n维生素维生素D2、 、维生素 维生素D3 （ChP收录）收录） 结构特点与分析方法的关系 结构特点与分析方法的关系 1

3、开环的甾体：具有甾类化合物的显色反应，可用于鉴别。开环的甾体：具有甾类化合物的显色反应，可用于鉴别。 2手性碳原子：具有旋光性，可用于鉴别。手性碳原子：具有旋光性，可用于鉴别。 3多烯：可进行紫外检测多烯：可进行紫外检测, 不稳定不稳定. 结构及性质结构及性质 n性质：性质： n1.性状性状: 无色针晶或白色结晶状粉末无色针晶或白色结晶状粉末 n2.溶解性溶解性: 脂溶性脂溶性 n3.不稳定性不稳定性: 易氧化易氧化, 对酸也不稳定对酸也不稳定. n4.旋光性旋光性: 具手性碳具手性碳 n5.可发生甾类化合物的显色反应可发生甾类化合物的显色反应 n6.紫外吸收紫外吸收:265nm nE1%1c

4、m（VitD2：460-490 ,VitD3：465-495） 鉴别试验 鉴别试验 n （一）显色反应：（一）显色反应： n1.醋酐醋酐-浓硫酸反应：浓硫酸反应： nD2: 黄黄 红红 紫紫 绿绿。 nD3: 黄黄 红红 紫紫 、蓝绿蓝绿 绿绿 n2.三氯化锑反应三氯化锑反应 :橙红色橙红色，渐变，渐变粉红粉红 n3.三氯化铁反应三氯化铁反应 :橙黄色橙黄色 鉴别试验鉴别试验 n（二）（二）维生素维生素D的比旋度的比旋度 n药物药物 溶剂溶剂 浓度浓度 比旋度值比旋度值 n维生素维生素D2 无水乙醇无水乙醇 40mg/ml +102.5+107.5 n维生素维生素D3 无水乙醇无水乙醇 5mg

5、/ml +105+112 n注意事项注意事项 n应于容器开启应于容器开启3030分钟内取样，分钟内取样， 在溶液配制后在溶液配制后3030分钟内测定，否则会有变旋分钟内测定，否则会有变旋 光现象。光现象。 鉴别试验鉴别试验 n（三）其他鉴别方法（三）其他鉴别方法 nTLC、HPLC、制备衍生物测熔点、制备衍生物测熔点 nUV、IR n （四）（四） VitD2、 、 VitD3区别反应 区别反应： nKober反应：反应：85%浓硫酸浓硫酸乙醇显色乙醇显色 n甾类化合物的显色反应甾类化合物的显色反应 nVitD2： ：红色， 红色， max=570nm nVitD3： ：黄色， 黄色， max

6、=495nm 杂质检查杂质检查 n（一）麦角甾醇（一）麦角甾醇 nChP规定规定VitD2中必须检查项目中必须检查项目 n试剂：洋地黄皂苷溶液试剂：洋地黄皂苷溶液 n混合放置混合放置18小时，不得发生浑浊或沉淀小时，不得发生浑浊或沉淀 n（二）前（二）前VitD（5，7二烯甾醇）的光照产物二烯甾醇）的光照产物 n（三）有关物质：（三）有关物质：NP-HPLC 含量测定含量测定 n方法种类：方法种类： n化学法化学法 n光谱法光谱法 n色谱法色谱法 n微生物法微生物法 n生化法生化法竞争蛋白结合法（特异性最高）竞争蛋白结合法（特异性最高） n中国药典中国药典正相高效液相色谱法正相高效液相色谱法

7、维生素维生素D的含量测定的高效液的含量测定的高效液 相色谱法（相色谱法（ChP方法简介）方法简介） n方法提要：方法提要： nNP-HPLC(VitD2、 、 VitD3均以本法测定 均以本法测定) n硅胶柱硅胶柱 n流动相：正己烷流动相：正己烷正戊醇正戊醇（997:3） n检测波长检测波长:254nm n定量方法：内标法，定量方法：内标法，(测定维生素测定维生素D的的 总量总量.) n内标物：邻苯二甲酸二甲酯内标物：邻苯二甲酸二甲酯 n该法分为三个方法该法分为三个方法 : : n第一法：用于无维生素第一法：用于无维生素A A醇及其它杂质的干扰的醇及其它杂质的干扰的 情况，直接进样测定：情况，

8、直接进样测定： n1 1系统适用性试验：测定重复性和分离度。系统适用性试验：测定重复性和分离度。 维生素维生素D D3 3 、前维生素、前维生素D D3 3 、反式维生素、反式维生素D D3 3 、速、速 甾醇甾醇D D3 3 （R1.0)R1.0) 2 2测定测定前维生素前维生素D折算维生素折算维生素D的的校正因子：校正因子： nf 2=（ASmr-f1mSAr1）/（Ar1mS） n3 3含量测定：用含量测定：用维生素维生素D及前维生素及前维生素D折算维折算维 生素生素D的总量的总量. nmi=（f1 Ai1+ f 2 Ai2）mS /AS n第二法：用于有杂质的干扰的情况，需第二法：用于

9、有杂质的干扰的情况，需 要预处理：要预处理： n1皂化处理：皂化、乙醚提取、洗涤皂化处理：皂化、乙醚提取、洗涤 提取液、蒸除乙醚、制备供试液提取液、蒸除乙醚、制备供试液A。 n2净化：供试液净化：供试液A经液相色谱分离，准经液相色谱分离，准 确收集含有维生素确收集含有维生素D及前维生素及前维生素D混合物混合物 的全部流出液，制备成供试液的全部流出液，制备成供试液B。 n3含量测定：取供试液含量测定：取供试液B按第一法测定按第一法测定。 n第三法：用于经第二法处理后仍有杂质第三法：用于经第二法处理后仍有杂质 的干扰的情况，预处理后还要处理：的干扰的情况，预处理后还要处理： n1预处理后在经提取分

10、离制备供试液预处理后在经提取分离制备供试液 C。供试液。供试液C用于用于进样测定：进样测定： n2含量测定：在第一法的色谱条件下，含量测定：在第一法的色谱条件下， 交替精密进样对照液和供试液交替精密进样对照液和供试液C，按外，按外 标法定量。标法定量。 维生素维生素E的分析的分析 主要生理功能：主要生理功能： 1. 抗氧化作用：抗氧化作用：清清 除自由基保护膜除自由基保护膜 结构。结构。 2. 促进血红素的合促进血红素的合 成：成：能提高血红能提高血红 素合成过程中的素合成过程中的 关键酶关键酶ALA合成合成 酶和酶和ALA脱水酶脱水酶 的活性的活性 O CH3COO R2 R1 R3 名名称

11、称R1R2相对活性相对活性 -生育酚生育酚 -生育酚生育酚 -生育酚生育酚 -生育酚生育酚 CH3 CH3 H H CH3 H CH3 H 1.0 0.5 0.2 0.1 名名称称R1R2相对活性相对活性 -生育酚生育酚 -生育酚生育酚 -生育酚生育酚 -生育酚生育酚 CH3 CH3 H H CH3 H CH3 H 1.0 0.5 0.2 0.1 生物效价生物效价 右旋体右旋体 ： 消旋体消旋体 = 1.4 :10 （天然品）（天然品） （合成品）（合成品） 一、结构及性质一、结构及性质 O O CH3 CH3 CH3 CH3 CCH3 O CH3 CH3 CH3CH3 结构特点 结构特点:

12、1芳环芳环：具弱紫外吸收，可用于鉴别。：具弱紫外吸收，可用于鉴别。 2乙酰化的酚羟基乙酰化的酚羟基：水解后生成生育酚，可发生三氯化：水解后生成生育酚，可发生三氯化 铁反应和氧化还原反应，用于鉴别。铁反应和氧化还原反应，用于鉴别。 分子中无亲水基，不溶于水分子中无亲水基，不溶于水。 酯键易水解酯键易水解 维生素维生素E E为苯丙二氢吡喃醇衍生物，苯环上有一个乙为苯丙二氢吡喃醇衍生物，苯环上有一个乙 酰化的酚羟基，又称生育酚。酰化的酚羟基，又称生育酚。-异构体活性最强。异构体活性最强。 一、结构及性质 理化性质 理化性质: 1. 溶解性溶解性 微黄色或黄色透明的粘稠液体，易溶微黄色或黄色透明的粘稠

13、液体，易溶 于乙醇、丙酮、乙醚、石油醚，不溶于水。于乙醇、丙酮、乙醚、石油醚，不溶于水。 2. 水解性：在酸性或碱性溶液中，加热可水解水解性：在酸性或碱性溶液中，加热可水解 生成游离生育酚。生成游离生育酚。 3. 易氧化性：维生素易氧化性：维生素E水解后的产物，在有氧或水解后的产物，在有氧或 其他氧化剂存在时，则进其他氧化剂存在时，则进被氧化生成醌，被氧化生成醌， 碱性条件下加热则更易反应，应避光、避氧碱性条件下加热则更易反应，应避光、避氧 保存。保存。 n4.弱紫外吸收弱紫外吸收:本品的无水乙醇溶液在本品的无水乙醇溶液在 284nm波长处测定吸收度时，其吸收波长处测定吸收度时，其吸收 系数系

14、数E1%1cm为为41.045.0。(0.1mg mL溶液测定溶液测定) （此性质可用于鉴别，但不能用于含量（此性质可用于鉴别，但不能用于含量 测定！）测定！） 二、鉴别试验 n 1.硝酸反应 硝酸反应 ChP，JP n 原理 原理:维生素维生素E在硝酸酸性溶液中，加热可在硝酸酸性溶液中，加热可 水解生成生育酚，生育酚继续被氧化成为邻醌水解生成生育酚，生育酚继续被氧化成为邻醌 结构的生育红。结构的生育红。（橙红色橙红色） 强氧化剂强氧化剂 CH3 HO O CH3 C16H33 CH3 H3C 生育酚生育酚 HNO3 O O CH3 C16H33 H3C CH3 O （橙红色）（橙红色）生育红

15、生育红 n方法方法：取本品约：取本品约30mg，加无水乙醇加无水乙醇 10ml溶解后，加硝酸溶解后，加硝酸2ml，摇匀，在摇匀，在 75加热约加热约15min，溶液应显溶液应显鲜红色鲜红色， 逐步转为逐步转为橙红色橙红色。 n特点特点： n简便、快速、呈色明显简便、快速、呈色明显 O orOHH VitE 醌醌型型化化合合物物 生生育育酚酚 n 2. 三氯化铁反应 三氯化铁反应: n 原理 原理: 维生素维生素E在碱性溶液中加热水解在碱性溶液中加热水解 生成游离生育酚生成游离生育酚，并被三氯化铁氧化为对并被三氯化铁氧化为对 生育醌生育醌，同时生成亚铁离子。后者与联吡同时生成亚铁离子。后者与联吡

16、 啶生成啶生成血红色的配离子血红色的配离子。 CH3 HO O CH3 C16H33 CH3 H3C 生育酚生育酚 O O O H3C CH3 OH CH3 C16H33 CH3 对对-生育醌生育醌 弱氧化剂弱氧化剂 血红色血红色 n 方法 方法： 取本品约取本品约10ml，加，加醇制氢氧醇制氢氧 化钾试液化钾试液2ml，煮沸煮沸5min，放冷，加水放冷，加水 4ml与与乙醚乙醚10ml，振摇、静置使分层，振摇、静置使分层， 取乙醚液取乙醚液2m1，加加2，2联吡啶的乙联吡啶的乙 醇溶液醇溶液 (0.5100)数滴和三氯化铁的乙数滴和三氯化铁的乙 醇溶液醇溶液(0.2 100)数滴，应显数滴，

17、应显血红色血红色。 n讨论讨论: n1.)测定前必须水解维生素测定前必须水解维生素E,操作繁琐操作繁琐 n2.)专属性不高专属性不高 n3. 紫外光谱法紫外光谱法 n本品的本品的0.01(W/V)无水乙醇溶液无水乙醇溶液 max = 284nm min = 254nm = 41.045.5 % cm E 1 1 可用于鉴别可用于鉴别 。 n4.薄层色谱法薄层色谱法 硅胶硅胶G板板 溶剂：氯仿溶剂：氯仿 展开剂：环己烷展开剂：环己烷乙醚（乙醚（4:1） 浓硫酸浓硫酸显色，显色，根据根据R f 值定性值定性 5.气相色谱法 气相色谱法:USP(24) ChP(2000) 以保留时间定性以保留时间定

18、性 6.红外光谱法红外光谱法: JP(14) BP(2000) VitE Rf = 0.7 O O CH3 CH3 CH3 CH3 CCH3 O CH3 CH3 CH3CH3 三、杂质检查三、杂质检查 n1.酸度检查酸度检查 n目的目的: 检查维生素检查维生素E制备过程中引入的游离醋酸制备过程中引入的游离醋酸. n方法方法: ChP酸度检查法酸度检查法.(教材教材P275) n 2.特殊杂质 特殊杂质游离生育酚的检查游离生育酚的检查 nChP(2000)ChP(2000)方法方法: : 硫酸铈滴定法硫酸铈滴定法. . n原理原理: 游离生育酚有还原性游离生育酚有还原性, 可被硫酸铈定量可被硫酸

19、铈定量 氧化氧化. 可以用硫酸铈滴定法来控制游离生育酚的可以用硫酸铈滴定法来控制游离生育酚的 限量限量. 生育醌生育醌对对生育酚生育酚 34 22CeCe 检查方法检查方法 取本品取本品0.10g0.10g，加无水乙醇加无水乙醇5 5mlml溶解后，溶解后， 加二苯胺试液加二苯胺试液1 1滴，用硫酸铈滴定液滴，用硫酸铈滴定液 (0.01(0.01molmol/ /L)L)滴定，消耗硫酸铈滴定液不滴定，消耗硫酸铈滴定液不 得超过得超过1.01.0m1m1。 若硫酸铈液浓度不是若硫酸铈液浓度不是0.01000mol/L，则则 应重新计算硫酸铈的消耗量！应重新计算硫酸铈的消耗量！ O CH3 CH3

20、 CH3 CH3COO CH3 C16H33 O CH3 CH3 CH3 HO CH3 C16H33 无水乙醇 H2SO4 回流 CH3 CH3 CH3 O O C16H33 CH3OH +2Ce3+ +2Ce4+ %100 W TV % 限限量量 %15. 2 %100 1 . 0 002154. 00 . 1 % 限量限量 ）（ml/mg154. 2 2 8 .43001. 0 T n讨论讨论 n1.1. 酸性环境中进行酸性环境中进行, ,否则硫酸铈滴定液会生成碱式否则硫酸铈滴定液会生成碱式 盐而影响测定。盐而影响测定。 n2.2.二苯胺的作用是作为指示剂二苯胺的作用是作为指示剂, , 终

21、点时溶液由亮黄终点时溶液由亮黄 色转变为灰紫色色转变为灰紫色. . n3. 13. 1molmol的硫酸铈相当于的硫酸铈相当于1/21/2molmol的游离生育酚的游离生育酚 (215.4(215.4g); g); 每每1 1ml ml (0.01(0.01molmol/ /L)L)的硫酸铈滴定液相的硫酸铈滴定液相 当于当于0.0021540.002154g g游离生育酚游离生育酚. . n4.ChP4.ChP规定的杂质限量为规定的杂质限量为2.15%.2.15%. 维生素维生素E的分析的分析 n四、含量测定四、含量测定 n应该采用何种方法？应该采用何种方法？ n根据化学性质：根据化学性质：

22、n1.可被硫酸铈定量氧化可被硫酸铈定量氧化. 铈量法铈量法 n2.三氯化铁反应三氯化铁反应生成的亚铁离子作用形成有色结合生成的亚铁离子作用形成有色结合 物间接测定（三氯化铁物间接测定（三氯化铁2，2联吡啶比色法）联吡啶比色法） O O CH3 CH3 CH3 CH3 CCH3 O CH3 CH3 CH3CH3 含量测定含量测定 n根据物理化学性质：根据物理化学性质： n1.紫外分光光度法紫外分光光度法: 不适用不适用 max = 284nm E1%1cm=41.045.0100 2.色谱法色谱法 方法简便快速，专属性强，方法简便快速，专属性强， 特别适用于多种维生素制剂中维生素特别适用于多种维

23、生素制剂中维生素E的测定。的测定。 3、荧光分光光度法、荧光分光光度法 n 气相色谱法 气相色谱法(ChP) n六十年代起开始研究维生素六十年代起开始研究维生素E的气相色的气相色 谱法谱法(GLC). 选择性好选择性好 灵敏度高灵敏度高 速度快速度快 分离效能好分离效能好 挥发性低、不稳定、挥发性低、不稳定、 极性强极性强衍生化衍生化 易受样品蒸气压限制易受样品蒸气压限制 气相色谱法气相色谱法(GLC)测定维生素测定维生素E的优点的优点 可分离维生素可分离维生素E、其异构体及杂质，可、其异构体及杂质，可 选择性地测定维生素选择性地测定维生素E 。适宜测定纯度。适宜测定纯度 不高的维生素不高的维

24、生素E及维生素及维生素E制剂。制剂。 中国药典测定维生素中国药典测定维生素E及维生素及维生素E制剂均制剂均 采用气相色谱法。采用气相色谱法。 nVitE测定的色谱条件测定的色谱条件 载气载气N2 固定液 固定液50%苯基苯基甲基硅酮甲基硅酮（OV-17） 或或HP-1 柱温柱温265 检测器检测器氢火焰离子化检测器氢火焰离子化检测器(FID) 内标 内标正三十二烷正三十二烷 内标法内标法 供试液（样品供试液（样品+内标）内标） 内标物内标物 对照液（对照对照液（对照+内标）内标） 是样品中不存在的物质是样品中不存在的物质 与被测组分峰靠近与被测组分峰靠近 能与各组分完全分离能与各组分完全分离

25、与被测组分的量接近与被测组分的量接近 系统适用性试验：系统适用性试验： n 500（按维生素（按维生素E 计算）计算） R2 （维生素（维生素E与内与内 标物正三十二烷的分标物正三十二烷的分 离度离度 ） 定量法 定量法: 内标法加校正因子内标法加校正因子 1 K A A 内 对 2 K A A 内内 样样 % W W K K %VitE100 1 2 稀稀释释度度 稀稀释释度度 样样 对对 实际工作中的计算方法实际工作中的计算方法 本品含本品含C31H52O3应为应为 96.0 102.0% 其他药典方法：其他药典方法： BP（2000） GC 内标内标 正三十二烷正三十二烷 R1.4 US

26、P （24） GC 内标内标 十六酸十六醇酯十六酸十六醇酯 R1.0 JP（14） HPLC 测定测定dl生育酚生育酚 JP（14） 中的维生素中的维生素E 外标法外标法 JP （15） RP - HPLC外标法简介外标法简介 样品、外标样品、外标 dl生育酚生育酚 固定相固定相十八烷基硅烷键合硅胶（十八烷基硅烷键合硅胶（ODS） 流动相流动相甲醇甲醇-水（水（49 ：1） 检测波长检测波长292nm（吸收峰肩峰）（吸收峰肩峰） R2.6 RSD0.8% 对 样 对生育酚 H H mW 维生素维生素E的荧光分光光度法的荧光分光光度法 n（一）荧光反应法（一）荧光反应法 n原理：原理：维生素维生

27、素E的的硝硝 酸反应。酸反应。 n利用硝酸将氧化为生利用硝酸将氧化为生 育红，再将这一产物育红，再将这一产物 和邻苯二胺在冰醋酸和邻苯二胺在冰醋酸 中缩台，缩台物在紫中缩台，缩台物在紫 外光照射下发生绿色外光照射下发生绿色 荧光。以荧光。以FC定量。定量。 维生素维生素E的荧光分光光度法的荧光分光光度法 n二、新分析技术的应用二、新分析技术的应用同步扫描直接同步扫描直接 （内源）荧光法（内源）荧光法 n原理原理： n维生素大多含有芳香环结构（大的共轭维生素大多含有芳香环结构（大的共轭 键结键结 构），本身具有较强的天然荧光，因此可以构），本身具有较强的天然荧光，因此可以 利用内源荧光检测维生素

28、。利用内源荧光检测维生素。 n如血液中维生素如血液中维生素A 345nm激发，激发，490nm处测量。处测量。 维生素维生素E 295nm激发，激发，325nm处测量。处测量。 n直接直接295nm激发，激发，325nm处测量。处测量。 则溶剂则溶剂Raman光谱严重干扰测定光谱严重干扰测定! (教材图教材图14-6) n同步荧光扫描技术（可变角同步扫描技术）同步荧光扫描技术（可变角同步扫描技术） n90年代年代Clark等人近年提出的新技术，等人近年提出的新技术， n可以减小了散射光的影响，改善由常规荧光可以减小了散射光的影响，改善由常规荧光 扫描所无法分开的光谱重叠体系的分辨率。扫描所无法

29、分开的光谱重叠体系的分辨率。 n分类：分类： n1.1.“固定波长同步扫描荧光测定固定波长同步扫描荧光测定”维生素维生素 E E的荧光法使用的荧光法使用 n2.2.“固定能量同步扫描荧光测定固定能量同步扫描荧光测定” n3.3.“变角同步扫描荧光测定变角同步扫描荧光测定 ” Stoke位移位移 n扫描过程中使激发波长扫描过程中使激发波长 （ exex）和发射波长（）和发射波长（ emem） 彼此间保持彼此间保持固定的固定的波长间波长间 隔隔 n em- em- ex=ex=常数常数 （本实验中（本实验中 为为 40nm 40nm ） 定量依据定量依据: : F FSL SL = 2.3KCLI

30、 = 2.3KCLI0 0X X I I0 0由由FexFex（ em - em - ）决定、）决定、 X X由由FemFem（ emem）决定）决定 F FSL SL = 2.3KCLI = 2.3KCLI0 0X X由由FexFex（ em - em - ）与）与FemFem（ emem） 的乘积决定的乘积决定 在在 保持固定的情况下，同步荧光的信号强保持固定的情况下，同步荧光的信号强 度便与待测物质的浓度成正比度便与待测物质的浓度成正比 实验实验确定确定 的原则的原则: : 1.1.能消除或减小溶剂能消除或减小溶剂RamanRaman光干扰光干扰 2.2.兼顾方法灵敏度兼顾方法灵敏度 3

31、.3.一般推荐选择等于（或大略于）一般推荐选择等于（或大略于）StokeStoke位移的位移的 . . 优点优点: :有望获得有望获得同步荧光同步荧光信号最强、半高宽度最小的信号最强、半高宽度最小的 单峰单峰同步荧光同步荧光光谱。光谱。 维生素类药物的分析方法总结 结构特点与分析方法的关系归纳总结 结构特点与分析方法的关系归纳总结 n要求记住六种维生素药物的结构式特征要求记住六种维生素药物的结构式特征 CH2OR CH 3 3 CH 3 CH CH3 CH3 N N NH3 N S + OH CH3 H3C Cl,HCl O HO H OH OH OH O CH2 CH3 CH3 H HO C

32、H3 HH CH 3 CH3 H H CH2 CH3 H HO CH3 HH CH 3 CH3 H O O CH3 CH3 CH3 CH3 CCH3 O CH3 CH3 CH3CH3 本类药物重要结构特点及反应比较本类药物重要结构特点及反应比较 n1共轭多烯结构：共轭多烯结构：具有紫外吸收，具有紫外吸收， n（1）可采用紫外吸收光谱法进行）可采用紫外吸收光谱法进行鉴别鉴别， nVitA 、B1 、C、D、E n（2）可采用紫外分光光度法进行）可采用紫外分光光度法进行含量含量 测定测定。 nVitA 、B1 、C、D 本类药物重要结构特点及反应比较本类药物重要结构特点及反应比较 n2.旋光性：旋

33、光性：VitC、D n具手性碳原子：具有旋光性，可用于鉴具手性碳原子：具有旋光性，可用于鉴 别别。 nVitC ： 20.50 21.50 nVitD2： +102.5+107.5 nVitD3： +105+112 n VitE为消旋体为消旋体 nVitA、B1无无旋光性旋光性 本类药物重要结构特点及反应比较本类药物重要结构特点及反应比较 n3. 以三氯化锑生成络合物反应以三氯化锑生成络合物反应 ：维生素：维生素 A 、D与三氯化锑生成络合物。与三氯化锑生成络合物。 n维生素维生素A：蓝色，渐变紫红：蓝色，渐变紫红 n维生素维生素D：即橙红色，渐变粉红：即橙红色，渐变粉红 n其他维生素无此反应

34、其他维生素无此反应 还原性引起的反应：还原性引起的反应： n4.还原性：还原性： VitA 、C、D、E都具有还原都具有还原 性性,易被易被氧化氧化. n还原性引起的反应：还原性引起的反应： n（1）.三氯化铁反应三氯化铁反应 : VitD、E nVitD:橙黄色橙黄色 nVitE:水解后以三氯化铁、水解后以三氯化铁、2，2-联吡啶联吡啶 反应：血红色反应：血红色 还原性引起的反应：还原性引起的反应： n（2）硝酸反应：）硝酸反应： VitE n溶液应显鲜红色，逐步转为橙红色。溶液应显鲜红色，逐步转为橙红色。 n（3）硝酸银反应）硝酸银反应 ： VitC n黑色沉淀黑色沉淀 n（4）2，6二氯

35、靛酚反应：二氯靛酚反应： VitC n颜色消失颜色消失 VitC、D、 B1的特征反应的特征反应 nVitC类似类似糖类糖类物质：物质： n发生糖类的发生糖类的糠醛缩合糠醛缩合反应反应 n以三氯醋酸、吡咯以三氯醋酸、吡咯 5050产生蓝色产生蓝色 n VitD类似类似甾体类甾体类物质：物质： n发生甾体类的发生甾体类的LibermanLiberman反应、反应、KoberKober反应反应 nLibermanLiberman反应：醋酐反应：醋酐- -浓硫酸试剂浓硫酸试剂 nD D2 2：黄：黄 红红 紫紫 绿绿 nD D3 3：黄：黄 红红 紫紫 蓝绿蓝绿 绿绿 VitC、D、 B1的特征反应

36、的特征反应 nKoberKober反应：反应： 85%85%浓硫酸浓硫酸乙醇显色乙醇显色 nVitDVitD2 2： ：红色， 红色， max=570nmmax=570nm nVitDVitD3 3： ：黄色， 黄色， max=495nmmax=495nm nVit B1类似类似生物碱类生物碱类物质：物质： n发生发生生物碱试剂沉淀生物碱试剂沉淀反应反应 n碘化汞钾碘化汞钾 淡黄色沉淀淡黄色沉淀 n碘碘 红色沉淀红色沉淀 VitC、D、 B1的特征反应的特征反应 n硅钨酸硅钨酸 白色沉淀白色沉淀 n苦酮酸苦酮酸 扇形白色结晶扇形白色结晶 nVit B1为为硫杂环类硫杂环类物质：物质： n1.1

37、.发生发生硫色素反应硫色素反应 : :铁氰化钾试液铁氰化钾试液 n强烈的蓝色荧光，酸化后荧光消失强烈的蓝色荧光，酸化后荧光消失. . n2.2.发生发生硝酸铅反应硝酸铅反应 : :氢氧化钠、硝酸铅氢氧化钠、硝酸铅 n黑色沉淀黑色沉淀 ChP版规定的含量测定方法 版规定的含量测定方法 n(一一) 维生素维生素A n 紫外分光光度法 紫外分光光度法 三点校正法三点校正法 n（第一法、第二法）（第一法、第二法） n中国药典收载的维生素中国药典收载的维生素A胶丸、维生素胶丸、维生素AD 滴剂、维生素滴剂、维生素AD胶丸等均采用三点校正胶丸等均采用三点校正 法测定。法测定。 ChP规定的含量测定方法 规

38、定的含量测定方法 n(二二)维生素维生素D n正相高效液相色谱法正相高效液相色谱法 ， n定量方法为内标法，内标物为邻苯二甲定量方法为内标法，内标物为邻苯二甲 酸二甲酯酸二甲酯 n用用维生素维生素D及前维生素及前维生素D折算维生素折算维生素D的的 总量总量. n中国药典收载的维生素中国药典收载的维生素D及其制剂，均及其制剂，均 用本法测定。用本法测定。 ChP规定的含量测定方法 规定的含量测定方法 n （三）维生素 （三）维生素E n气相色谱法气相色谱法(GLC) n定量方法为内标法，内标物为正三十二定量方法为内标法，内标物为正三十二 烷。烷。 n中国药典收载的维生素中国药典收载的维生素E及其

39、制剂，均及其制剂，均 用本法测定。用本法测定。 ChP规定的含量测定方法 规定的含量测定方法 n （四）维生素 （四）维生素C n碘量法，碘滴定液滴定碘量法，碘滴定液滴定 n1m1的碘滴定液的碘滴定液(0.05mol/L)相当于相当于 8.806mg的的C6H8O6 n中国药典中维生素中国药典中维生素C原料、维生素原料、维生素C片、片、 维生素维生素C泡腾片、维生素泡腾片、维生素C注射液、维生注射液、维生 素素C颗粒剂等进行含量测定均选用此方法颗粒剂等进行含量测定均选用此方法 ChP规定的含量测定方法 规定的含量测定方法 n （五）维生素 （五）维生素B1 n原料药与制剂测定方法不同！原料药与

40、制剂测定方法不同！ n原料药测定：非水溶液滴定法原料药测定：非水溶液滴定法 n高氯酸滴定液滴定，高氯酸滴定液高氯酸滴定液滴定，高氯酸滴定液(0.1mol/L) 滴定度为滴定度为16.86mg/ml 。 n制剂测定：紫外分光光度法制剂测定：紫外分光光度法 n用盐酸溶液（用盐酸溶液（9 1000）将维生素）将维生素B1片粉中的片粉中的 维生素维生素B1溶出，经过滤、稀释后于溶出，经过滤、稀释后于246nm测定测定 吸收度，计算含量。吸收度，计算含量。 1在三氯醋酸或盐酸存在下，经水解、在三氯醋酸或盐酸存在下，经水解、 脱羧、失水后，加入吡咯即产生蓝色产物脱羧、失水后，加入吡咯即产生蓝色产物 的药物

41、应是的药物应是 A. 氯氮卓氯氮卓 B. 维生素维生素A C. 普鲁卡因普鲁卡因 D. 盐酸吗啡盐酸吗啡 E. 维生素维生素C 2、中国药典采用以下何法测定维生素、中国药典采用以下何法测定维生素 E含量含量 A. 酸碱滴定法酸碱滴定法 B. 氧化还原法氧化还原法 C. 紫外分光光度法紫外分光光度法 D. 气相色谱法气相色谱法 E. 非水滴定法非水滴定法 3、中国药典采用气相色谱法测定维生、中国药典采用气相色谱法测定维生 素素E含量，内标物质为含量，内标物质为 A. 正二十二烷正二十二烷 B. 正二十六烷正二十六烷 C. 正三十烷正三十烷 D. 正三十二烷正三十二烷 E. 正三十六烷正三十六烷 4、维生素、维生素C的鉴别反应，可以采用的试的鉴别反应，可以采用的试 剂有剂